非酒精性脂肪性肝炎患者血清sCD163和IL-1βmRNA水平變化及其臨床意義探討*

方菊梅，張萬里，陳怡發(fā)，劉黎明，黃慶勇

非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatiti-s，NASH)屬于非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)的一種類型，主要臨床和病理學(xué)特征為無過量飲酒史出現(xiàn)的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞發(fā)生脂肪變性和炎癥，可發(fā)展為肝纖維化和肝硬化，早期及時(shí)診斷對(duì)于改善治療結(jié)局和預(yù)后有著重要的意義[1, 2]。由于NASH發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，臨床還缺乏特異性的診斷指標(biāo)[3]。既往眾多研究指出，炎癥反應(yīng)和炎性損傷與NASH的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，NASH患者可溶性白細(xì)胞分化抗原163(soluble cluster of differentiation 163，sCD163)和白介素(interleukin，IL)1βmRNA呈高表達(dá)狀態(tài)[4, 5]。本研究檢測(cè)了51例NASH患者和51例不嗜酒健康人血sCD163和IL-1βmRNA水平，旨在為NAFLD的臨床診斷和預(yù)后判斷提供合理的依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2016年1月～2018年3月我院消化內(nèi)科就診的NASH患者51例，男性31例，女性20例；年齡36～60歲，平均年齡為(45.1±6.2)歲；體質(zhì)指數(shù)(body mass index，BMI)為24.1～28.6 kg/m2，平均為(26.3±1.2)kg/m2；病程1～7年，平均為(4.1±1.2)年。符合《非酒精性脂肪性肝病診療指南》[6]中關(guān)于NASH的診斷標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室檢查提示血清谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶均超過80 IU/L，超聲檢查提示肝臟近場(chǎng)回聲增強(qiáng)，超過肝臟面積的一半，遠(yuǎn)場(chǎng)回聲衰減。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在心、腦、腎等重要器官功能異常及精神性疾病；②合并惡性腫瘤等消耗性疾??；③造血系統(tǒng)功能障礙；④入組前8周內(nèi)使用過免疫功能調(diào)節(jié)劑、抗生素、皮質(zhì)激素、微生態(tài)制劑或具有肝損害性藥物；⑤有酒精性脂肪性肝病、病毒性肝炎或自身免疫性肝炎；⑥合并嚴(yán)重的內(nèi)分泌或遺傳代謝性疾病；⑦接受過肝移植。另選擇51例健康人為對(duì)照組，男32例，女19例；平均年齡為(44.2±5.5)歲，不飲酒，平均BMI為(23.5±2.1)kg/m2。本研究方案已經(jīng)獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，且所有患者均簽署了知情同意書。

1.2 血清檢測(cè) 使用全自動(dòng)生化分析儀(日本SIEMENS ADVIA 2400/1800)及其原裝配套試劑盒檢測(cè)血生化指標(biāo)；采用ELISA法檢測(cè)血清sCD163(上海藍(lán)基公司)、內(nèi)脂素和脂聯(lián)素水平(上海派思柔生物科技公司)；采用RT-PCR法檢測(cè)血清IL-1βmRNA(Takara， 日本 )。

2 結(jié)果

2.1 兩組血糖和血脂指標(biāo)比較 NASH患者血糖和血脂指標(biāo)顯著高于健康人(P<0.05)，但兩組高密度脂蛋白膽固醇水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05，表1)。

2.2 兩組血清指標(biāo)比較 NASH患者血清sCD163、IL-1βmRNA和內(nèi)脂素水平均顯著高于健康人(P<0.05)，而脂聯(lián)素水平顯著低于健康人(P<0.05，表2)。

2.3 兩組肝功能指標(biāo)比較 NASH患者血清ALT、AST和GGT水平顯著高于健康人(P<0.05，表3)。

例數(shù)GluHDLLDLTGTCNASH516.1±1.4①1.3±0.53.6±1.1①2.9±0.4①6.1±0.6①健康人514.5±0.31.4±0.72.5±0.92.2±0.24.5±0.3

與健康人比，①P<0.05

例數(shù)sCD163(ng/ml)IL-1βmRNA內(nèi)脂素(μg/ml)脂聯(lián)素(μg/ml)NASH5170.7±10.4①0.5±0.1①31.1±8.4①6.8±1.3①健康人5130.8±5.90.1±0.215.9±2.615.2±2.2

與健康人比，①P<0.05

表3 兩組肝功能指標(biāo)比較

與健康人比，①P<0.05

3 討論

NASH是NAFLD中最具肝臟病變進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)的臨床表型。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，NAFLD 是以胰島素抵抗和系統(tǒng)性炎癥為主要病機(jī)的代謝綜合征的一部分，其發(fā)生發(fā)展與肥胖、糖尿病等關(guān)系密切，但其發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡明。隨著國(guó)人日常生活方式及飲食習(xí)慣的改變，肥胖、糖尿病等發(fā)病率逐年升高，導(dǎo)致NAFLD發(fā)病率升高，NASH發(fā)病率亦隨之升高[7]。研究指出，NASH發(fā)病率高達(dá)20%～30%，且逐漸趨于年輕化，已成為影響我國(guó)公共健康的嚴(yán)重問題之一。NASH作為肝硬化的前期階段，可無任何臨床癥狀，容易導(dǎo)致ALT等長(zhǎng)期處于升高狀態(tài)。若得不到及時(shí)的診斷和有效的干預(yù)，易發(fā)生纖維細(xì)胞增殖、肝細(xì)胞變性、壞死等，最終導(dǎo)致肝硬化。但現(xiàn)階段，對(duì)NASH的研究還不夠深入，關(guān)于其診斷指標(biāo)亦尚未明確。本研究通過對(duì)NASH患者和不嗜酒健康人群血生化指標(biāo)、sCD163、IL-1βmRNA等檢測(cè)和分析，取得了較好的結(jié)果。

本研究結(jié)果顯示，NASH患者血清sCD163、IL-1βmRNA、Glu、LDL、TG和TC均顯著高于健康人，說明NASH患者存在肝功能指標(biāo)異常和細(xì)胞因子代謝紊亂。sCD163由特異性的M2 巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD163脫落而來，是CD163的可溶形式，具有抑制 T 細(xì)胞增殖的作用，可較好地反映機(jī)體單核-巨噬細(xì)胞的活化狀態(tài)，亦能介導(dǎo)單核-巨噬細(xì)胞膜下游相關(guān)分子的高表達(dá)，以發(fā)揮一系列抗炎和抗氧化作用[8, 9]。NASH患者的飲食結(jié)構(gòu)主要為高脂飲食，膳食纖維、維生素E、C、多聚不飽和脂肪酸的含量較少，而富含飽和脂肪酸和膽固醇，可提高肝細(xì)胞膜磷脂的飽和脂肪酸成分，進(jìn)而引起胰島素抵抗，在NASH相關(guān)疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中起了關(guān)鍵作用。膳食因素中的能量攝入過多，膳食脂肪酸不平衡是導(dǎo)致脂肪肝的主要危險(xiǎn)因素。由于NASH患者產(chǎn)生胰島素抵抗，脂質(zhì)代謝出現(xiàn)紊亂，大大促進(jìn)了脂肪組織中的脂肪酸向肝臟中的轉(zhuǎn)運(yùn)，不僅可導(dǎo)致肝臟脂肪浸潤(rùn)，LDL、 TG和TC大量蓄積，還可導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂，進(jìn)而引起糖代謝紊亂，血糖異常增高，使得肝細(xì)胞對(duì)內(nèi)外源性損害因子的敏感性增強(qiáng)，進(jìn)一步加重局部炎癥，導(dǎo)致大量炎癥因子異常代謝，進(jìn)而出現(xiàn)一種或多種致病因子長(zhǎng)期反復(fù)損傷肝實(shí)質(zhì)，導(dǎo)致長(zhǎng)期肝細(xì)胞彌漫性變性和炎癥壞死，可進(jìn)一步引起肝臟纖維組織彌漫性增生和肝細(xì)胞再生，使得肝小葉結(jié)構(gòu)不斷被破壞和重建[10]。研究指出，在胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下, TG、TC等的水解被抑制, 促進(jìn)了外周脂肪組織的分解，導(dǎo)致大量游離脂肪酸通過門脈系統(tǒng)進(jìn)入肝臟, 使得TG和TC合成增加，后者不斷蓄積可引起肝臟代謝紊亂，導(dǎo)致NASH患者肝組織血液循環(huán)出現(xiàn)障礙，機(jī)體免疫功能呈現(xiàn)紊亂狀態(tài)，肝臟代謝解毒功能異常，可出現(xiàn)sCD163水平升高[11，12]。IL-1βmRNA則為組成IL-1的相關(guān)多肽基因型，可通過誘導(dǎo)上皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)的增加，促進(jìn)肝細(xì)胞炎性損傷[13]。此外，IL-1βmRNA還能通過調(diào)控樹突狀Ⅲ型淋巴細(xì)胞的功能，從而對(duì)CD4+淋巴細(xì)胞的功能活性產(chǎn)生影響[14]。IL-1βmRNA水平升高可能與NASH患者肝臟局部炎癥所引起的免疫紊亂相關(guān)。本研究亦發(fā)現(xiàn)，NASH與健康人血清HDL水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能與樣本量較少有一定的關(guān)系。

本研究還發(fā)現(xiàn)，NASH患者血清ALT、AST、GGT和內(nèi)脂素水平均顯著高于健康人，而脂聯(lián)素水平顯著低于健康人。既往眾多研究指出，胰島素抵抗在NAFLD 的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要的作用，亦可間接地促進(jìn)NAFLD 發(fā)展成為NASH[15,16]。隨著NASH病變程度的加重，可導(dǎo)致內(nèi)脂素水平升高，脂聯(lián)素水平下降。其中，低脂聯(lián)素血癥是NAFLD相關(guān)病變的重要特征[17]。由于NASH患者存在持續(xù)的肝臟創(chuàng)傷與修復(fù)過程，易引起肝臟代謝紊亂，加之胰島素抵抗，導(dǎo)致血脂蓄積，內(nèi)脂素水平升高，易進(jìn)一步導(dǎo)致肝細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的變性、壞死，使得肝細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積[18]。此外， 在NASH發(fā)作后，肝細(xì)胞脂肪變性加重，激發(fā)機(jī)體的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)，肝細(xì)胞膜上的多價(jià)不飽和脂肪酸和核酸等物質(zhì)可與反應(yīng)性氧化物發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，增加了肝細(xì)胞膜的流動(dòng)性和通透性，使細(xì)胞破裂和凋亡。而且，NASH的產(chǎn)生亦可導(dǎo)致機(jī)體脂肪酸含量增加，使得線粒體內(nèi)的氧化磷酸化反應(yīng)代償性增加，進(jìn)而誘導(dǎo)乙酰輔酶A大量產(chǎn)生，并參與呼吸鏈酶體系的氧化作用和三羧酸循環(huán)等過程，大大增加了反應(yīng)性氧化物的含量，可進(jìn)一步損壞線粒體微結(jié)構(gòu)，使其功能出現(xiàn)障礙，促進(jìn)肝細(xì)胞缺氧、凋亡，從而進(jìn)一步破壞肝臟細(xì)胞的正常功能，導(dǎo)致血清ALT、AST和GGT水平升高[19,20]。NASH患者在肝細(xì)胞損傷和膽汁淤積等多種因素作用下，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞壞死和炎癥可導(dǎo)致膠原在合成增加的同時(shí)減少其分解，亦能激活人體的免疫系統(tǒng)，使得T淋巴亞群各組成的比例發(fā)生改變，導(dǎo)致機(jī)體炎癥因子的分泌出現(xiàn)紊亂。因此，NASH患者在肝功能指標(biāo)異常增加的同時(shí)，相關(guān)的炎癥因子，如sCD163和IL-1βmRNA水平均升高[21, 22]。此外， NASH患者sCD163和IL-1βmRNA水平均較高，提示其與內(nèi)脂素和脂聯(lián)素等共同組成特征性的血清學(xué)表現(xiàn)，其水平檢測(cè)可作為NASH患者臨床診斷和預(yù)后判斷的指標(biāo)之一，值得討論。

綜上所述，NASH患者存在肝功能指標(biāo)異常和血糖血脂代謝紊亂，血清sCD163、IL-1βmRNA、內(nèi)脂素和脂聯(lián)素呈現(xiàn)特征性變化。隨著NASH患者病情的加重，各項(xiàng)肝功能指標(biāo)水平顯著升高。在今后的臨床研究中，是否可將sCD163、IL-1βmRNA、內(nèi)脂素和脂聯(lián)素水平檢測(cè)作為NASH患者臨床診斷和預(yù)后判斷的指標(biāo)，需要進(jìn)一步驗(yàn)證。由于本研究未涉及單純性脂肪肝和脂肪性肝硬化患者，他們血清這些指標(biāo)的變化將為本研究的意義提供重要的參考。在對(duì)照組的選擇方面，健康人的匹配也是十分困難的，一些生活史資料的獲得可能更多的屬于主觀性的，也需要嚴(yán)格的篩選確定。