過(guò)氧化物酶染色在急性髓細(xì)胞白血病中的染色特點(diǎn)及相關(guān)影響因素分析

朱 鳳，馬勤芬，吳偉林，梁建英，朱明清，劉丹丹，陳蘇寧

（蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院，江蘇 蘇州 215006）

急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）是發(fā)生于血液系統(tǒng)的惡性腫瘤，因髓系白血病細(xì)胞惡性克隆性增殖而使骨髓正常造血受抑制[1]。髓過(guò)氧化物酶（MPO）為存在于髓系細(xì)胞中的一種過(guò)氧化氫酶，可利用H2O2為氧源氧化各種底物[2]。過(guò)氧化物酶（POX）染色是利用粒細(xì)胞及部分單核細(xì)胞含有POX，使H2O2的氧釋放出來(lái)，將試劑中的聯(lián)苯胺氧化為聯(lián)苯胺藍(lán)，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合成藍(lán)色顆粒，定位于胞漿中，無(wú)顆粒出現(xiàn)者為陰性反應(yīng)[3]，為鑒別急淋和急非淋白血病的簡(jiǎn)便有效方法之一。為探討AML患者骨髓POX的染色特點(diǎn)及相關(guān)影響因素，本研究對(duì)我院245 例初診AML患者進(jìn)行了分析總結(jié)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 245 例AML均來(lái)自2011年7月—2018年12月蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院門診或病房的初診患者，經(jīng)MICM確診，其中男148 例，女97 例，中位年齡48（10～87）歲，根據(jù)形態(tài)學(xué)分型M0 27 例，M1 43 例，M2 35 例，M3 29例，M4 41 例，M4E0 32 例，M5 38 例[4]。

1.2 方法 觀察245 例骨髓POX染色標(biāo)本中白血病細(xì)胞的POX染色的陽(yáng)性率（強(qiáng)陽(yáng)性率，弱陽(yáng)性率）；并計(jì)算陽(yáng)性病例數(shù)（陽(yáng)性率≥1%即為陽(yáng)性病例）；總結(jié)AML各亞型的POX染色陽(yáng)性特點(diǎn)；觀察骨髓細(xì)胞增生程度；各系列（粒系、紅系、單核系、淋系等）各階段細(xì)胞比例并分析與POX染色結(jié)果的相關(guān)性；其中87 例同時(shí)具有流式MPO檢查的患者，對(duì)比POX染色陽(yáng)性率與MPO陽(yáng)性率的結(jié)果，并對(duì)二者的相關(guān)性進(jìn)行分析。POX陽(yáng)性率計(jì)數(shù)方法為觀察100 個(gè)原幼細(xì)胞中陽(yáng)性顆粒，陽(yáng)性顆粒多而粗大為強(qiáng)陽(yáng)性，陽(yáng)性顆粒少而細(xì)小為弱陽(yáng)性，兩者相加為POX總陽(yáng)性率，計(jì)數(shù)結(jié)果以百分比（%）表示。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 相應(yīng)的數(shù)據(jù)分析及處理軟件為SPSS 18.0，相關(guān)性分析采用秩相關(guān)分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 POX染色在AML（除M6、M7）各亞型中的特點(diǎn) M0中多為陰性且陽(yáng)性率均＜3%；在M1、M2中陽(yáng)性率高且強(qiáng)陽(yáng)性比例明顯高于弱陽(yáng)性比例；在M3中基本為100%強(qiáng)陽(yáng)性；在M4、M5中陽(yáng)性率較M1、M2低，且弱陽(yáng)性比例高于強(qiáng)陽(yáng)性。見表1、表2。

表1 AML（除M6、M7）各亞型中POX染色特點(diǎn)及各系統(tǒng)各階段細(xì)胞比例

表2 急性粒系白血病與急性單核系相關(guān)白血病中POX染色特點(diǎn)及各系統(tǒng)各階段細(xì)胞比例

2.2 POX染色結(jié)果與骨髓各系統(tǒng)各階段細(xì)胞比例的相關(guān)性分析 從表1可見早幼粒細(xì)胞、中晚幼粒細(xì)胞與POX染色陽(yáng)性率存在正相關(guān)關(guān)系；而原幼細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞與POX染色陽(yáng)性率存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。

2.3 POX染色與流式MPO對(duì)比 在M0中POX染色陽(yáng)性例數(shù)為25%（2/8；此兩例病例陽(yáng)性率分別為2%，1.5%，均＜3%），而流式MPO陽(yáng)性例數(shù)為100%（8/8）；POX染色陽(yáng)性百分比為0.44%（＜3%），而流式MPO陽(yáng)性百分比為5.38%（＞3%）。在M1-M5中，除在M5中有2 例POX染色為100%陰性外，其余病例均為陽(yáng)性，其POX陽(yáng)性例數(shù)與MPO陽(yáng)性例數(shù)基本相符；在M1-M5中POX染色陽(yáng)性百分比均高于MPO陽(yáng)性百分比，但差距越來(lái)越小。用SPSS進(jìn)行相關(guān)性分析顯示兩者呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)關(guān)系。見表3。

表3 POX染色與流式MPO對(duì)比

2.4 POX染色陽(yáng)性百分比在粒系相關(guān)白血病及單核系相關(guān)白血病中的特點(diǎn) 粒系相關(guān)白血?。∕1-M3）POX染色陽(yáng)性程度較單核系相關(guān)白血?。∕4、M5）高，超過(guò)50%病例陽(yáng)性率＞90%，尤其M2、M3的患者，80%以上的病例其原幼細(xì)胞的POX陽(yáng)性百分比在90%以上。而單核系相關(guān)白血?。∕4、M5）POX染色陽(yáng)性程度相對(duì)較低，大多數(shù)病例其陽(yáng)性率多集中在10%～50%，僅M4E0的陽(yáng)性百分比相對(duì)高一些，近一半的病例可達(dá)到50%～90%。而M5的病例達(dá)到＞90%陽(yáng)性率的病例很少，僅在5%左右。見表4。

表4 AML（除M6、M7）各亞型POX染色陽(yáng)性強(qiáng)度特點(diǎn)

3 討論

隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，急性白血病的診斷和分型目前已趨完善，從最初的形態(tài)診斷分型（FAB標(biāo)準(zhǔn)）逐步過(guò)渡到結(jié)合形態(tài)、細(xì)胞免疫表型、遺傳及分子生物學(xué)特征的MICM診斷分析體系[5]。形態(tài)學(xué)作為基礎(chǔ)分類其POX染色是區(qū)分急性白血病類型的最主要的化學(xué)染色方法。由結(jié)果（表2、表4）可見，急性粒細(xì)胞相關(guān)白血?。∕1、M2、M3）的POX染色無(wú)論陽(yáng)性病例數(shù)還是陽(yáng)性百分比均高于急性單核系相關(guān)白血病（M4、M5），且前者的強(qiáng)陽(yáng)性比例更高，此結(jié)論與教材及相關(guān)文獻(xiàn)相一致[6]。

目前，隨著多種檢測(cè)技術(shù)的不斷完善，白血病的MICM分型逐漸廣泛應(yīng)用，不同的檢測(cè)方法與既往單純的形態(tài)學(xué)分類互相補(bǔ)充，使白血病的診斷分型更趨準(zhǔn)確完善。流式細(xì)胞儀檢測(cè)中的MPO抗原與形態(tài)學(xué)分型中的POX染色相對(duì)應(yīng)。本文研究對(duì)比發(fā)現(xiàn)AML中除M0外POX染色陽(yáng)性百分比均高于MPO陽(yáng)性百分比且總體趨勢(shì)一致，在相關(guān)性分析中發(fā)現(xiàn)兩者呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)關(guān)系（表3）。但是，值得注意的是M0中骨髓POX染色陽(yáng)性率均＜3%，這與急性淋巴細(xì)胞白血病鑒別有一定困難，主要靠檢驗(yàn)者經(jīng)驗(yàn)診斷，而流式MPO檢測(cè)100%病例為陽(yáng)性（且陽(yáng)性率＞3%），所以M0的診斷流式檢測(cè)更為精準(zhǔn)。

從表2可見紅系、淋系細(xì)胞在急性粒系相關(guān)白血病及急性單核系相關(guān)白血病大部分病例中比例均較低，呈現(xiàn)受到抑制的表現(xiàn)，且二者在此兩類不同亞型的白血病中受抑制程度無(wú)明顯差別。在此兩類白血病中巨核系同樣計(jì)數(shù)不高，增生受抑，但在急性粒系相關(guān)白血病中數(shù)量少于急性單核系相關(guān)白血病，說(shuō)明急性粒系相關(guān)白血病與急性單核系相關(guān)白血病相比，巨核系細(xì)胞受抑更明顯。表2還可見成熟單核細(xì)胞在急性單核系相關(guān)白血病中比例明顯高于急性粒系相關(guān)白血病中比例，由此可見成熟單核細(xì)胞比例增多易見，且其原幼細(xì)胞POX染色以弱陽(yáng)性為主，二者結(jié)合對(duì)鑒別急性粒細(xì)胞白血病與急性單核細(xì)胞白血病具有一定程度的意義。在相關(guān)性分析中（表1），原幼細(xì)胞比例與POX染色呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，分析可能是由于原幼細(xì)胞比例高的患者其細(xì)胞分化程度比較差，白血病細(xì)胞處于更早期的原始階段，其POX尚未形成，活性較低，因此POX陽(yáng)性率反而不高。而早幼粒細(xì)胞比例及中晚幼粒細(xì)胞比例與POX染色呈正相關(guān)關(guān)系，可能是因?yàn)檫@兩類細(xì)胞比例越高，說(shuō)明細(xì)胞分化程度較好，其原幼細(xì)胞POX活性也較高。單核系細(xì)胞中，由于部分單核細(xì)胞POX缺乏或活性較粒細(xì)胞中POX活性低，所以其比例越高POX陽(yáng)性率反而越低，二者呈現(xiàn)了負(fù)相關(guān)關(guān)系。而紅系與POX染色結(jié)果無(wú)相關(guān)性。

總之，POX染色作為白血病形態(tài)學(xué)診斷的必要補(bǔ)充，其在白血病分型中的輔助作用具有重要的意義，每種不同亞型的AML其POX染色具有不同的特點(diǎn)。由此可見，在白血病的形態(tài)學(xué)診斷及分型中，可以不僅僅通過(guò)POX染色的陽(yáng)性率，還可以細(xì)致分析其陽(yáng)性百分比的高低、陽(yáng)性強(qiáng)度，以及參考骨髓中的相應(yīng)系列細(xì)胞的比例等，綜合分析以達(dá)到對(duì)AML準(zhǔn)確分類的目的。而結(jié)合MICM的整合分析使白血病分型更加準(zhǔn)確及完善。