飼料酵母培養(yǎng)物提高異育銀鯽的抗氧化、免疫能力及CyHV-2病毒攻毒保護能力

孫 飛 呂 昊 郁 濃 葉元土 蔡春芳 吳 萍 石瑤瑤 周文豪 李永娟

(蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院1，蘇州 215123)

(北京英惠爾生物科技有限公司2，北京 100081)

異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)是以原產(chǎn)于黑龍江方正縣雙鳳水庫的方正銀鯽為母本(♀)，江西興國縣的興國紅鯉為父本(♂)，采用人工受精的方式，刺激方正銀鯽的卵雌核發(fā)育而成[1]，是我國淡水養(yǎng)殖主要種類。

在異育銀鯽養(yǎng)殖過程中面臨著諸多問題，其中由飼料油脂氧化帶來的營養(yǎng)性疾病和鯽魚“鰓出血”病給鯽魚養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失。油脂是魚類重要的營養(yǎng)素，不僅可為動物體提供能量、必需脂肪酸等，還是組織細胞的重要組成成分，并且可作為脂溶性營養(yǎng)物質(zhì)的載體，從而提高它們的吸收和利用效率。然而，在儲存過程中，其含有的不飽和脂肪酸在高溫、高濕、光照、金屬離子等環(huán)境條件下極易氧化，產(chǎn)生多種初級和次級氧化物，如過氧化物、醇類、醛類、酮類、烴類、酯類及多聚體等物質(zhì)[2]。這些氧化物被動物攝食后，可破壞其正常生理生化功能，危及健康、影響正常生長發(fā)育，誘發(fā)營養(yǎng)性疾病的發(fā)生[3]。2009年江蘇射陽部分養(yǎng)殖場出現(xiàn)患“鰓出血病”的異育銀鯽，死亡率極高[4]，經(jīng)研究確診，此病為鯉皰疹Ⅱ型病毒(CprinidHerpesvirus 2, CyHV-2)所引起的[5]?；疾■a魚前期出現(xiàn)體色發(fā)黑、離群獨游等癥狀，后期頭、鰓、腹部、魚鰭基部等遍布出血點，解剖發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟嚴重出血，有腹水，大側(cè)肌成血紅色，魚鰾出血點明顯，最典型特征為魚鰓流血不止，此病蔓延迅速，危害巨大。

酵母培養(yǎng)物(Yeast culture，YC)是一類由酵母菌在特定培養(yǎng)基中經(jīng)發(fā)酵、干燥得到的產(chǎn)品，包含了酵母菌體、次級代謝物、殘余的培養(yǎng)基等成分。有報道顯示，酵母類產(chǎn)品可以增強動物生長性能[6, 7]，增強動物機體免疫[8]，提高動物抗病力[9, 10]，并且對動物腸道健康具有正面作用[11]。據(jù)報道酵母源產(chǎn)品可作為飼料原料，并在草魚等魚體上做了相關(guān)實驗，結(jié)果顯示酵母源產(chǎn)品可以替代水產(chǎn)飼料中少量魚粉[12]。

本實驗以異育銀鯽為實驗對象，在含有正常豆油、氧化豆油的日糧中，以酵母培養(yǎng)物等質(zhì)量替代魚粉，經(jīng)過池塘網(wǎng)箱的養(yǎng)殖實驗，探討對異育銀鯽生長性能、魚體健康的影響；同時，以患CyHV-2病異育銀鯽病魚內(nèi)臟組織為致病源進行攻毒實驗。綜合評價飼料酵母培養(yǎng)物在替代魚粉、在維護魚體健康、在氧化油脂損傷情況下的修復(fù)作用，以及在CyHV-2病毒攻毒保護的效果。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗所用酵母培養(yǎng)物由企業(yè)提供，實測常規(guī)成分為水分4.98%，粗蛋白質(zhì)57.79%，粗脂肪1.40%，粗灰分8.57%。

1.2 實驗飼料

基礎(chǔ)飼料原料由企業(yè)提供。實驗用豆油為一級大豆油。氧化豆油制作過程：在正常豆油中添加七水合硫酸亞鐵30 mg/L、五水硫酸銅15 mg/L、30%的過氧化氫600 mg/L 和0.3%的水，混合后，放在(80±2)℃的水浴鍋中，每30 min 充氧氣1 min(循環(huán))，氧化14 d。在異育銀鯽基礎(chǔ)飼料中，豆油作為正對照組(S)、氧化豆油的為負對照組(O)。在含有正常豆油、氧化豆油的基礎(chǔ)飼料中分別添加0%、1%、2%、3%的酵母培養(yǎng)物等質(zhì)量替代魚粉，共8個實驗組，分別命名為S、O、SC1、SC2、SC3、OC1、OC2以及OC3。各組飼料配方見表1。

飼料原料經(jīng)粉碎過60目篩，混合好的原料用小型環(huán)膜制粒機(溫度 65 ℃)制成直徑1.5 mm，長2～3 mm的顆粒狀飼料，水分風(fēng)干至13%左右，置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?，使用前按需要量取出飼料自然解凍后投喂?/p>

1.3 實驗魚與養(yǎng)殖管理

養(yǎng)殖實驗在池塘網(wǎng)箱中進行，池塘面積為40 m×60 m，設(shè)置實驗網(wǎng)箱32個(規(guī)格為1.5 m×1.8 m×1.8 m)。實驗網(wǎng)箱底部設(shè)置微孔增氧機增氧，池塘中間設(shè)置1臺葉輪式增氧機。

表1 實驗飼料組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

注：1預(yù)混料(mg/kg 飼料)：銅5，鐵180，錳35，鋅120，碘0.65，硒0.57，鉀80，維生素A 10，維生素B1 8，維生素B2 8，維生素B6 20，維生素B12 0.1，維生素C 250，維生素D3 4，維生素K3 6，泛酸鈣20，煙酸25，葉酸5，肌醇100。

實驗用異育銀鯽魚種購自企業(yè)選取規(guī)格整齊的異育銀鯽魚種1 440尾，平均質(zhì)量為(7.08±0.01)g。食鹽消毒后，隨機分成8組，每組設(shè)4個重復(fù)，共記32個網(wǎng)箱，每個網(wǎng)箱45尾魚。實驗魚用對照組基礎(chǔ)飼料馴化適應(yīng)，每天早晚各投喂2次，馴化兩周后開始正式投喂。日投喂2次(7:00—9:00，16:30—18:30)，日投喂量為魚種體重的3%～5%，每15 d估算1次魚體增重量，調(diào)整投喂量，正式投喂65 d。每天11:00測試、記錄水溫。每5 d測定水下30 cm處水質(zhì)。整個實驗期間水溫22～34 ℃，溶解氧濃度>5.0 mg/L，pH 8.2 ～ 8.6，氨氮濃度<0.2 mg/L，亞硝酸鹽濃度<0.01 mg/L，硫化物濃度<0.05 mg/L。

1.4 樣品采集

正式養(yǎng)殖實驗結(jié)束后，最后一次飼料投喂24 h后，進行實驗魚采樣工作。養(yǎng)殖實驗結(jié)束，最后一次投喂飼料24 h后，對每個網(wǎng)箱的魚稱重，統(tǒng)計實驗魚數(shù)量、實驗飼料投喂量，計算成活率、特定生長率和飼料系數(shù)。

血清采集用1 mL無菌注射器尾柄靜脈采血，置于2 mL Eppenddorf管中自然凝固4 h，離心(4 ℃，3 500 r/min)10 min后，取上層血清，將同一個網(wǎng)箱中采集的血清混勻后，分裝(每管200 μL)于0.5 mL Eppenddorf管中(每個網(wǎng)箱至少分裝12管血清)，液氮速凍之后置于-80 ℃超低溫冰箱保存，用于分析血清生理生化指標(biāo)以及酶學(xué)指標(biāo)。

全血采集每個網(wǎng)箱隨機選取2尾魚，用2 mL無菌注射器尾柄靜脈采血，置于2 mL帶EDTA抗凝劑的真空采血管中，小心上下顛倒數(shù)次混勻，每個網(wǎng)箱采集2管，當(dāng)日送迏蘇州市九龍醫(yī)院，挑選1管用于血液常規(guī)指標(biāo)測定。

組織切片樣品采集每個網(wǎng)箱隨機選取2尾魚，解剖、分離內(nèi)臟團，分別取大小為4 mm×4 mm的肝胰臟和長度為1 cm左右的中腸，于滅菌的0.75%生理鹽水中洗凈后，置于10%甲醛固定，用于制作組織切片。

1.5 樣品分析

常規(guī)樣品分析飼料樣品用冷凍干燥機干燥至恒重測其水分，之后用于其它指標(biāo)測定；粗蛋白、粗脂肪、灰分、酸價和過氧化值采用國標(biāo)規(guī)定的方法測定。

酶學(xué)指標(biāo)分析超氧化物歧化酶活力(U/mL)、過氧化氫酶活力(U/mL)、丙二醛含量(mmol/mL)、溶菌酶(μg/mL)、二胺氧化酶(U/L)采用南京建成生產(chǎn)的試劑盒測定。

全血指標(biāo)分析血細胞分類計數(shù)(淋巴細胞數(shù)量、單核細胞數(shù)量、粒細胞數(shù)量)采用五分類血細胞分析儀測定。

血清指標(biāo)分析血清的血清免疫球蛋白含量、血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶含量采用雅培C800全自動生化分析儀測定。

組織切片甲醛固定的組織經(jīng)洗滌、酒精梯度脫水、透明、透蠟、石蠟包埋后切片，切片厚5 μm，組織切片經(jīng)酒精梯度復(fù)水后，HE染色，酒精梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，置于光學(xué)顯微鏡下觀察肝、腸組織結(jié)構(gòu)；并采用Nikon COOL-PIX4500型相機進行拍照，Smart-4500軟件進行數(shù)據(jù)量化處理，測量黏膜下層厚度、皺襞間質(zhì)以及絨毛長度。

1.6 攻毒實驗

養(yǎng)殖實驗結(jié)束后，在每個實驗組的3個重復(fù)中隨機選取12尾魚用于CyHV-2病毒攻毒實驗。CyHV-2病毒是在大豐華晨水產(chǎn)養(yǎng)殖公司提供的“鰓出血”癥狀明顯的病魚中，取其肝臟、脾臟、體腎和頭腎制成組織混樣，按1∶9滅菌0.75%生理鹽水制作組織勻漿，反復(fù)凍融3次(使細胞破裂、釋放出病毒)，2 880× g離心10 min，上清液過0.45 μm(帶莢膜的CyHV-2病毒大小在110～200 nm)濾膜除菌，所得的組織液即為病毒液，-80 ℃保存待用。通過預(yù)實驗，確定異育銀鯽的半致死劑量為0.25 mL，攻毒時通過異育銀鯽腹腔注射0.25mLCyHV-2病毒液，統(tǒng)計各組異育銀鯽第8 d的累積死亡尾數(shù)并計算累積死亡率和攻毒保護率。

1.7 計算方法與統(tǒng)計分析

存活率(Survival rate, SR, %)=100×終末魚尾數(shù)/初始魚尾數(shù)；

飼料系數(shù)(Feed conversion ratio, FCR)=尾均攝食量/(終末均重-初始均重)；

特定生長率(Specific growth rate, SGR)=100%×(ln終末尾均重-ln初始尾均重)/飼養(yǎng)天數(shù)；

累積死亡率(Cumulative mortality rate, CMR)=100%×7 d時累積死亡數(shù)量/初始魚尾數(shù)；

攻毒保護率(Attack protection rate, %)=100×(1-實驗組累積死亡率/對照組累計死亡率)；

實驗數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS 22.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理和統(tǒng)計學(xué)分析，組間若有顯著差異，則進行Duncan 氏多重比較，顯著性水平為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 對異育銀鯽生長性能的影響

經(jīng)過65 d的池塘養(yǎng)殖實驗，各實驗組的存活率、特定生長率以及飼料系數(shù)見表3?？梢缘玫揭韵陆Y(jié)果：1)各實驗組存活率無差異。2)與S組比較，SC1、SC2、SC3的特定生長率SGR下降0.28%～1.42%(P>0.05)；氧化豆油O組較S組下降6.53%(P<0.05)；與O組比較，OC1、OC2、OC3組SGR分別提高4.24%、3.94%、4.24%(P<0.05)。3)飼料系數(shù)，SC1、SC2、SC3組的FCR與S組結(jié)果比較差異不顯著(P>0.05)； O組較S組上升16.27%(P<0.05)；與O組比較，OC1、OC2、OC3組FCR分別下降7.77%、6.74%、8.29%(P<0.05)。

結(jié)果表明，飼料中氧化豆油替換正常豆油后，造成異育銀鯽生長性能顯著下降，飼料系數(shù)顯著上升； YC代替飼料中等質(zhì)量1%～3%的魚粉后，異育銀鯽SGR有下降的趨勢，飼料系數(shù)有增加的趨勢，但差異不顯著；在氧化豆油日糧中，在含有12%魚粉的情況下，用1%～3%的酵母培養(yǎng)物等質(zhì)量替代魚粉后，異育銀鯽的生長速度、飼料效率有較好的恢復(fù)效果。

表2 酵母培養(yǎng)物對異育銀鯽生長性能的影響(n=4)

注：表中同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)，下表同。

表3 酵母培養(yǎng)物對異育銀鯽機體抗氧化能力的影響(n=3)

表4 酵母培養(yǎng)物對異育銀鯽機體免疫能力的影響(n=4)

2.2 對異育銀鯽抗氧化能力的影響

由表3可知：1)血清總抗氧化能力(T-AOC)，與S組結(jié)果比較，SC1和SC2組T-AOC上升，其中SC2組差異顯著(P<0.05)，SC3組T-AOC下降(P>0.05)； O組上升(P>0.05)；與O組比較，OC1組T-AOC上升，OC2和OC3組下降(P>0.05)。2)總超氧化物歧化酶(T-SOD)，與S組結(jié)果比較，SC1、SC2、SC3的T-SOD均上升(P<0.05)；O組上升(P>0.05)；與O組結(jié)果比較，OC1、OC2、OC3組T-SOD上升，其中，OC1和OC3差異顯著(P<0.05)。3)血清過氧化氫酶(CAT)，與S組結(jié)果比較，SC1、SC2、SC3的CAT均上升(P<0.05)；O組下降(P<0.05)；與O組結(jié)果比較，OC1、OC2、OC3組CAT均上升(P<0.05)。4)血清丙二醛(MDA)，與S組結(jié)果比較，SC1組下降，SC2、SC3組上升(P>0.05)；O組上升(P<0.05)；與O組結(jié)果比較，OC1、OC2、OC3組MDA均下降(P<0.05)。

結(jié)果顯示，飼料氧化豆油使異育銀鯽抗氧化系統(tǒng)遭到損傷； 1%～3%YC替代等質(zhì)量的魚粉提高了異育銀鯽抗氧化能力；在氧化豆油日糧中， YC使異育銀鯽抗氧化系統(tǒng)恢復(fù)正常。

2.3 對異育銀鯽機體免疫能力的影響

由表4可知：1)血液淋巴細胞含量，與S組結(jié)果比較，SC1、SC2、SC3組的血液淋巴細胞含量無差異；O組與S組結(jié)果比較上升420.03%(P<0.05)；與O組結(jié)果比較，OC1、OC2、OC3組的血液淋巴細胞均下降(P<0.05)；2)血液嗜中性粒細胞，SC1、SC2、SC3組與S組結(jié)果比較無差異；O組與S組結(jié)果比較上升了289.93%(P<0.05)；與O組結(jié)果比較，OC1、OC2、OC3組均下降(P<0.05)。3)血液單核細胞含量，SC1、SC2、SC3組與S組結(jié)果比較均下降(P<0.05)； O組與S組結(jié)果比較上升61.98%(P<0.05)；與O組結(jié)果比較，OC1、OC2、OC3組均下降(P<0.05)。4)血清溶菌酶，SC1、SC2、SC3組與S組結(jié)果比較均下降(P<0.05)；O組與S組結(jié)果比較上升(P>0.05)；與O組結(jié)果比較，OC1、OC2、OC3組均下降(P<0.05)。

結(jié)果顯示：飼料氧化豆油激發(fā)了異育銀鯽的免疫系統(tǒng)；酵母培養(yǎng)物代替飼料中等質(zhì)量魚粉沒有對異育銀鯽免疫系統(tǒng)造成負面影響；酵母培養(yǎng)物可以使異育銀鯽因飼料氧化豆油引起的機體免疫系統(tǒng)應(yīng)激得到緩解。

2.4 對異育銀鯽肝臟轉(zhuǎn)氨酶的影響

由圖1可知：①血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，SC1、SC2、SC3組AST與S組結(jié)果比較均上升，其中SC2、SC3組差異顯著(P<0.05)； O組與S組結(jié)果比較上升15.21%(P<0.05)；與O組結(jié)果比較，OC1、OC2、OC3組AST均下降，其中OC2、OC3組差異顯著(P<0.05)。

由肝臟切片結(jié)果(圖2)可知：豆油S組肝細胞排列整齊，細胞界限明顯“→”，細胞核位于細胞中間位置“↑”；添加YC后，SC1、SC2、SC3組與S組差異不顯著； O組肝細胞排列無序，細胞界線不明顯，細胞結(jié)構(gòu)受損“→”，細胞核發(fā)生聚集“↖”“↙”；與O組結(jié)果比較，添加YC后，OC1、OC2、OC3組肝細胞排列整齊，細胞界限明顯“→”，細胞核位于細胞中間位置“↑”。

圖1 酵母培養(yǎng)物對異育銀鯽肝臟轉(zhuǎn)氨酶的影響

注：異育銀鯽養(yǎng)殖65d后，取肝臟做組織切片，進行光學(xué)顯微鏡觀察，400倍(圖版Ⅰ)。發(fā)現(xiàn)S組肝細胞排列整齊，細胞界限明顯“→”，細胞核位于細胞中間位置“↑”；添加YC后，SC1、SC2以及SC3組與S組差異不顯著；O組肝細胞排列無序，細胞界線不明顯，細胞結(jié)構(gòu)受損“→”，細胞核發(fā)生聚集“↖”“↙”；與O組結(jié)果比較，添加YC后，OC1、OC2以及OC3組肝細胞排列整齊，細胞界限明顯“→”，細胞核位于細胞中間位置“↑”，YC對氧化豆油引起的肝細胞損傷有很好修復(fù)效果。圖2 酵母培養(yǎng)物對異育銀鯽肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響

結(jié)果顯示：飼料氧化豆油可能引起了異育銀鯽肝臟炎癥； YC代替等質(zhì)量魚粉后，異育銀鯽的AST有少許程度的上升，可能是因為機體肝臟出現(xiàn)輕微炎癥；在氧化豆油日糧中， YC代替等質(zhì)量魚粉后，可以修復(fù)飼料氧化油脂對機體肝臟的損傷。

2.5 對異育銀鯽血清二胺氧化酶的影響

由圖3可知：血清二胺氧化酶活力(DOA)，與S組結(jié)果比較，SC3組下降(P>0.05)；O組上升(P<0.05)；與O組結(jié)果比較，OC1、OC2、OC3組均下降，其中OC2、OC3組差異顯著(P<0.05)。

圖3 酵母培養(yǎng)物對異育銀鯽血清二胺氧化酶的影響

各組腸道黏膜下層厚度和皺襞間質(zhì)的量化數(shù)據(jù)見圖4,結(jié)合腸道切片結(jié)果(圖5)：①黏膜下層厚度，與S組比較，SC2、SC3組上升，其中SC2組差異顯著(P<0.05)；O組較S組下降(P>0.05)；OC1、OC3組較O組均上升(P>0.05)。②SC2、SC3組的皺襞間質(zhì)與S組比較均下降(P>0.05)；O組與S組結(jié)果比較上升了100.86%(P<0.05)，OC1、OC2、OC3組與O組結(jié)果比較均下降(P<0.05)。

結(jié)果顯示：飼料氧化豆油使異育銀鯽腸道組織結(jié)構(gòu)受損；1%～3%YC代替等質(zhì)量魚粉后，在一定程度上可以改善異育銀鯽的腸道結(jié)構(gòu)；在氧化豆油日糧中，在1%～3%YC代替等質(zhì)量魚粉后，可以修復(fù)由飼料氧化豆油引起的異育銀鯽腸道炎癥與損傷。

圖4 酵母培養(yǎng)物對異育銀鯽中腸組織結(jié)構(gòu)的影響

注：異育銀鯽養(yǎng)殖65d后，取中腸做組織切片，進行光學(xué)顯微鏡觀察，200倍(圖版：Ⅱ)。與S組中腸組織切片結(jié)果比較，O組腸絨毛短而粗“→”，絨毛間距大，腸壁變薄“↗”，黏膜下層厚度差異不顯著，但皺襞間質(zhì)增大，差異顯著(“ST”表示“黏膜下層厚度”，“FI” 表示“皺襞間質(zhì)”)。與S組結(jié)果比較，添加YC后，SC1、SC2以及SC3組的絨毛長度、絨毛排列稀疏程度、腸壁厚度以及皺襞間質(zhì)差異均不顯著，SC2組的腸道黏膜下層厚度差異顯著；與O組結(jié)果比較，添加YC后，OC1、OC2以及OC3組中腸絨毛長度增長且變細，絨毛排列緊密，腸壁增厚，皺襞間質(zhì)顯著降低，OC1以及OC3組黏膜下層厚度增大,差異顯著(P<0.05)，OC2組與O組差異不顯著。圖5 酵母培養(yǎng)物對異育銀鯽中腸組織結(jié)構(gòu)的影響

表5酵母培養(yǎng)物對異育銀鯽攻毒后累積死亡率和攻毒保護率的影響

項目組別SSC1SC2SC3OOC1OC2OC3攻毒劑量/mL/尾0.250.250.250.250.250.250.250.25攻毒尾數(shù)/尾1212121212121212平均累積死亡數(shù)/尾63.672.3337.335.333.672.67平均累積死亡率/%50.0030.5619.4425.0061.1144.4430.5622.22攻毒保護率/%038.89S61.11S50.00S011.11O38.89O55.56O

注：“S”和“O”表示該攻毒保護率分別以S組和O組為基準(zhǔn)。

2.6 對異育銀鯽累積死亡率和攻毒保護率的影響

各實驗組累積死亡率和攻毒保護率統(tǒng)計見表5。與S組結(jié)果比較，SC1、SC2、SC3組累積死亡率降低，攻毒保護率分別為38.89%、61.11%、50%；與O組結(jié)果比較，OC1、OC2、OC3組相對死亡率降低，攻毒保護率分別為11.11%、38.89%、55.56%。結(jié)果顯示：酵母培養(yǎng)物體現(xiàn)了較好的CYHV-2病毒免疫保護作用。

3 討論

本實驗條件下，酵母培養(yǎng)物替代等質(zhì)量魚粉后，異育銀鯽的生長性能與全魚粉組無顯著差異，表明在含有12%魚粉的異育銀鯽飼料中，用酵母培養(yǎng)物等質(zhì)量替代1%～3%魚粉具有一定的可行性；飼料氧化油脂顯著影響了異育銀鯽的生長性能；在氧化油脂組中以酵母培養(yǎng)物替代等質(zhì)量魚粉后，異育銀鯽生長性能得到改善。

腸道是鯉科魚類消化吸收利用營養(yǎng)物質(zhì)的主要場所，異育銀鯽腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的健康可以在一定程度維護其生長性能。DOA是腸道黏膜上層絨毛細胞中具有高度活性的細胞內(nèi)酶，當(dāng)腸道細胞受損，細胞膜通透性發(fā)生變化時就會大量釋放到血液中，引起DOA增高[13]。飼料中油脂氧化對水產(chǎn)動物的生長性能以及腸道健康造成損害；飼料氧化豆油使異育銀鯽腸道黏膜結(jié)構(gòu)損傷。本實驗結(jié)果顯示：酵母培養(yǎng)物在一定程度上改善了異育銀鯽的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。飼料中的氧化油脂會導(dǎo)致適口性下降，降低攝食量[14]，氧化油脂所含有的初級和次級氧化產(chǎn)物，如過氧化物、丙二醛等能打破機體自由基代謝平衡，使自由基異常增加，破壞抗氧化酶活性，導(dǎo)致魚類產(chǎn)生氧化應(yīng)激損傷[15]，氧化油脂會導(dǎo)致胃腸無食物，出現(xiàn)積水[16]，腸道緊密連接結(jié)構(gòu)打開，腸道通透性變大[17]。在氧化豆油日糧中，1%～3%YC代替等質(zhì)量魚粉后，修復(fù)了由飼料氧化豆油引起的異育銀鯽腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷。此結(jié)果可能由于酵母培養(yǎng)物為腸道微生物提供豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，酵母菌從培養(yǎng)基中吸收營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為自身所需的初級代謝產(chǎn)物，包括小肽、氨基酸、絡(luò)合微量元素、維生素等，以及酵母細胞生長產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，如有機酸、核苷酸、低聚糖等物質(zhì)，可以促進水產(chǎn)動物腸道微生物生長，增加有益菌數(shù)量，調(diào)節(jié)腸道菌群種類和數(shù)量平衡，改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的完整性，從而提高水產(chǎn)動物的生產(chǎn)性能。

魚類是較低等的脊椎動物，非特異性免疫是魚類主要的免疫系統(tǒng)。T-SOD與動物的免疫水平密切相關(guān)，能夠催化氧自由基對分子氧和過氧化氫的歧化反應(yīng)，并且增強吞噬細胞防御能力，它是機體抗氧化防御系統(tǒng)的重要組成部分[18]。本實驗中各實驗組T-SOD活力與對照組比較均上升。酵母培養(yǎng)物能夠提高異育銀鯽T-SOD活性與其含有豐富β-葡聚糖和甘露寡糖密切相關(guān)，其中β-葡聚糖能夠增強血細胞SOD活性，提高抗氧化能力，甘露寡糖本身具有一定的免疫原性，能夠刺激機體的免疫應(yīng)答，增強SOD活性，提高其非特異性免疫力[19-22]。LZM是一種水解 N-乙酰胞壁酸和 N-乙酰葡糖胺酶，它是生物體內(nèi)重要的非特異性免疫因子之一[23]。本實驗中各實驗組LZM與對照組結(jié)果比較均下降。LZM可清除抗菌因子作用后所殘余的細菌細胞壁，增強其他免疫因子的抗菌敏感性，協(xié)同其他免疫因子共同抵制外來病原的入侵，LZM活力提高，其免疫能力也相應(yīng)提高[24]。MDA作為有毒有害的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，其含量升高表明氧自由基產(chǎn)生過多，氧自由基具有很強的氧化性，造成脂質(zhì)過氧化，導(dǎo)致細胞膜流動性降低[25]。本實驗中各實驗組MDA含量均有不同程度下降。結(jié)果表明酵母培養(yǎng)物可以降低異育銀鯽MDA的含量，并且能夠緩解由飼料氧化油脂造成異育銀鯽MDA的上升。

肝臟是動物機體在物質(zhì)能量代謝過程中具有重要而特殊功能的臟器。AST存在于肝細胞線粒體內(nèi)，肝細胞嚴重受損時AST就會進入血液中[26]，因此血清AST常作為判斷肝臟損傷的敏感指標(biāo)。本實驗結(jié)果顯示：正對照各實驗組AST較S組上升，但差異不顯著；結(jié)果提示酵母培養(yǎng)物替代飼料中等質(zhì)量魚粉后可能導(dǎo)致AST少許程度上升；但從異育銀鯽肝臟組織切片結(jié)果來看，SC1、SC2、SC3組與S組無顯著性差異。已有研究表明，飼料添加適量酵母培養(yǎng)物可以有效改善機體肝臟結(jié)構(gòu)[27, 28]，這與本實驗結(jié)果不同，這可能與酵母培養(yǎng)物的添加量有關(guān)。O組與S組結(jié)果比較AST上升，O組切片肝細胞排列無序，細胞界線不明顯，細胞結(jié)構(gòu)受損，細胞核發(fā)生聚集，表明氧化油脂造成異育銀鯽肝臟結(jié)構(gòu)損傷。與O組結(jié)果比較，各負對照實驗組AST下降，肝臟結(jié)構(gòu)有所恢復(fù)，切片肝細胞排列較整齊，細胞界限明顯，細胞核也位于細胞中間位置，表明本實驗條件下酵母培養(yǎng)物修復(fù)了氧化油脂造成的機體肝臟損傷，這與腸道結(jié)果相似。

酵母培養(yǎng)物對水產(chǎn)動物抗病力也有一定的改善作用[9, 10, 29]。本實驗結(jié)果表明酵母培養(yǎng)物體現(xiàn)了較好的CyHV-2病毒免疫保護作用。酵母培養(yǎng)物是如何對CyHV-2病毒起到免疫保護作用的呢？原因可能是酵母培養(yǎng)物提高了異育銀鯽的抗氧化能力和免疫能力。CyHV-2病毒從多種途徑對異育銀鯽產(chǎn)生負面作用。首先，CyHV-2病毒感染的異育銀鯽血清總抗氧化能力顯著降低，丙二醛與總抗氧化能力的比值升高，使機體抗氧化系統(tǒng)遭到破壞[30]；其次CyHV-2病毒感染后，對異育銀鯽免疫組織器官結(jié)構(gòu)，免疫細胞數(shù)量和活力均有顯著影響[5, 31, 32]。本實驗所用酵母培養(yǎng)物含有豐富的 β-葡聚糖和甘露寡糖，可以維護異育銀鯽的抗氧化系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)[19, 22]，這可能是提高異育銀鯽抗CyHV-2病毒的主要原因。

4 結(jié)論

飼料氧化豆油使異育銀鯽機體抗氧化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)處于應(yīng)激狀態(tài)，肝臟和腸道結(jié)構(gòu)受損。飼料YC提升了異育銀鯽免疫防御能力、抗氧化損傷的能力，可修復(fù)由氧化豆油引起的負面作用，對CYHV-2病毒攻毒保護具有較好的效果，1%～3%YC替代等質(zhì)量魚粉具有一定可行性。