絲氨酸蛋白酶1在胃癌組織中的表達(dá)及其影響因素分析

江強(qiáng)

[摘要]目的 探討胃癌患者癌組織中絲氨酸蛋白酶1（HTRA1）的水平變化及其影響因素。方法 選取2016年7月～2019年7月于我院臨床確診的220例胃癌患者作為研究對象，采用免疫組織化學(xué)方法檢測患者胃癌組織及遠(yuǎn)癌組織中的HTRA1表達(dá)情況，并分析HTRA1表達(dá)與胃癌患者臨床特征的關(guān)系。結(jié)果 HTRA1蛋白在胃癌組織中的陽性表達(dá)率（13.18%）低于遠(yuǎn)癌組織（86.82%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;HTRA1蛋白表達(dá)陽性與陰性患者的腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習(xí)慣比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;HTRA1蛋白表達(dá)陽性與陰性患者的年齡、性別、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;Logistic回歸分析結(jié)果顯示，腫瘤直徑（β=0.532，OR=1.873，95%CI 0.372～2.711）、浸潤深度（β=0.837，OR=1.103，95%CI 0.822～2.014）、吸煙史（β=0.486，OR=1.569，95%CI 1.023～2.832）、酗酒史（β=0.590，OR=1.690，95%CI 0.934～3.721）、飲食習(xí)慣（β=0.829，OR=1.552，95%CI 1.032～2.831）均是影響胃癌組織中HTRA1蛋白表達(dá)的獨(dú)立危險因素（P<0.05）。結(jié)論 胃癌中HTRA1蛋白表達(dá)與腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習(xí)慣有關(guān)，腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史、飲食習(xí)慣均是影響胃癌的危險因素。

[關(guān)鍵詞]胃癌;絲氨酸蛋白酶1;相關(guān)因素;預(yù)后

[Abstract] Objective To investigate the changes of serine protease 1 （HTRA1） in gastric cancer patients and the influencing factors. Methods A total of 220 patients with gastric cancer clinically diagnosed in our hospital from July 2016 to July 2019 were selected as study objects. The expression of HTRA1 in gastric cancer and distant cancer was detected by immunohistochemistry， and the relationship between HTRA1 expression and clinical characteristics of gastric cancer was analyzed. Results The positive expression rate of HTRA1 protein in gastric cancer tissues （13.18%） was lower than that in distant cancer tissues （86.82%）， the difference was statistically significant （P>0.05）. The differences in tumor diameter， invasion depth， smoking history， drinking history and mental state between positive and negative HTRA1 protein expression patients were statistically significant （P<0.05）， while the difference in age， gender， tissue differentiation degree， lymph node metastasis and TNM stage between positive and negative HTRA1 protein expression patients were not statistically significant （P>0.05）. Logistic regression analysis showed that tumor diameter （β=0.532， OR=1.873， 95%CI 0.372-2.711）， invasion depth （β=0.837， OR=1.103， 95%CI 0.822-2.014）， smoking history （β=0.486， OR=1.569， 95%CI 1.023-2.832）， drinking history （β=0.590， OR=1.690， 95%CI 0.934-3.721） and mental state （β=0.829， OR=1.552， 95%CI 1.032-2.831） were independent risk factors affecting gastric cancer （P<0.05）. Conclusion HRA1 protein expression in gastric cancer is related to tumor diameter， invasion depth， smoking history， drinking history and mental state. Tumor diameter， invasion depth， smoking history， drinking history and mental state are all risk factors affecting gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer; Serine proteinase 1; Related factors; Prognosis

胃癌是臨床上常見的一種惡性腫瘤，發(fā)病率較高，病死率在惡性腫瘤中居第3位[1]。隨著時代的進(jìn)步，人們生活水平不斷提升，生活方式及飲食習(xí)慣的改變直接導(dǎo)致胃癌的發(fā)病率逐年上升[2]。相關(guān)研究顯示[3]，對于胃癌的治療方法，臨床上大多以5氟尿嘧啶為主的藥物治療。常用藥物有紫杉醇、伊立替康及第三百鉑等，但效果并不能讓患者及醫(yī)師滿意。因此，臨床上開始從胃癌患者體內(nèi)基因和分子水平探討其病情變化[4]。大量研究顯示[5-7]，絲氨酸蛋白酶1（HTRA1）基因在子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、肝癌等多種癌癥中表現(xiàn)為低表達(dá)，提示HTRA1具有腫瘤抑制功能，但在胃癌中未有研究證實(shí)其表達(dá)情況。本研究選取我院收治的220例胃癌患者作為研究對象，旨在探討胃癌患者癌組織中HTRA1水平的表達(dá)情況，并分析其影響因素，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年7月～2019年7月于我院臨床確診的220例胃癌患者作為研究對象，其中男125例，女95例;年齡27～80歲，平均（63.91±7.85）歲;腫瘤直徑<5 cm 的有101例，≥5 cm的有119例;組織分化程度：中或高分化105例，低或未分化115例;浸潤深度：T1～T2 68例，T3～T4 152例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移172例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移48例;TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期88例，Ⅲ～Ⅳ期132例。本研究已經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)，所有患者均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者術(shù)前均未接受過放療或化療[8];②無其他惡性腫瘤病史者;③神志清楚、能進(jìn)行語言溝通交流者;④愿意配合者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神、認(rèn)知有障礙者;②病情不穩(wěn)定或病情急劇惡化者。

1.2觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

采用免疫組化法檢測胃癌及遠(yuǎn)癌組織中的HTRA1蛋白表達(dá)情況，分別對患者的胃癌及遠(yuǎn)癌組織進(jìn)行免疫組化S-P法染色。石蠟切片二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，H2O2室溫孵育20 min滅活內(nèi)源性過氧化物酶，切片抗原修復(fù)后，滴加鼠抗人HTRA1一抗50 μl，4℃過夜，過夜后將切片室溫平衡1 h，加入抗鼠IgG，37℃，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水、透明、封片、鏡檢。兩項(xiàng)的乘積即為該病例的免疫組化評分：0分為陰性（-）;1～4分為弱陽性（+）;5～8分為中度陽性（++）;9～12分為強(qiáng)陽性（+++）。以≥5分判斷為陽性，<5分判斷為陰性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)因素采用Logistic回歸分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1患者胃癌及遠(yuǎn)癌組織中的HTRA1蛋白表達(dá)情況

HTRA1蛋白陽性呈棕褐色顆粒，主要表達(dá)于細(xì)胞核中，HTRA1蛋白在胃癌組織中陽表達(dá)率為13.18%（29/220），而在遠(yuǎn)癌組織中陽性表達(dá)率為86.82%（191/220）?；颊呶赴┙M織中的HTRA1蛋白表達(dá)低于遠(yuǎn)癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2影響胃癌組織中HTRA1蛋白表達(dá)的單因素分析

HTRA1蛋白表達(dá)陽性與陰性患者的患者的腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習(xí)慣比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;HTRA1蛋白表達(dá)陽性與陰性患者的年齡、性別、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.3影響胃癌組織中HTRA1蛋白表達(dá)的因素的Logistic回歸分析

以患者的臨床特征為自變量，胃癌組織中的HTRA1蛋白表達(dá)為應(yīng)變量，最終將腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習(xí)慣納入Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習(xí)慣均是影響胃癌組織中HTRA1蛋白表達(dá)的獨(dú)立危險因素（P<0.05）（表2）。

3討論

胃癌是臨床上消化科常見的惡性腫瘤，發(fā)病率較高，引起胃癌的主要原因是人們的生活習(xí)慣、工作壓力、幽門螺桿菌的感染及飲食習(xí)慣等造成的[9]。相關(guān)研究證明[10-11]，絕大多數(shù)的胃癌患者屬于腺癌，早期胃癌癥狀不明顯，晚期胃癌表現(xiàn)為貧血、消瘦及營養(yǎng)不良等癥狀，且小部分會出現(xiàn)上腹不適、噯氣等特異性癥狀，與胃慢性疾病癥狀較為相似，易被忽略。因此，目前為止我國胃癌的早期診斷率較低。胃癌又為分為早期胃癌和進(jìn)展期胃癌，早期胃癌是指癌組織局限于胃黏膜下層的胃癌，肉眼可分清形態(tài);進(jìn)展期胃癌是指癌組織浸潤深度已超越黏膜下層的胃癌[12]。此外，相關(guān)資料證明[13]，在人們的飲食習(xí)慣中，膳食含有促癌真菌、N-亞硝基化合物、新鮮蔬菜的缺乏、幽門螺旋菌感染及遺傳易感等是胃癌疾病的高發(fā)因素。大量研究顯示，腫瘤的發(fā)生是一個涉及多個癌基因激活和抑癌基因失活的復(fù)雜演講過程[14-16]。

近年來研究證實(shí)[17]，膜蛋白酶與腫瘤的發(fā)生日益密切，如HTRA1等，參與了多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。HTRA1是一個蛋白酶家族成員之一，也是一種具有熱休克蛋白性質(zhì)的膜蛋白酶，在哺乳動類動物里扮演者重要的角色，特別是在消化、凝血和補(bǔ)體系統(tǒng)方面。相關(guān)研究顯示[18]，臨床上HTRA家族同源物有4類，其中包括HTRA1、HTRA2、HTRA3及HTRA4。HTRA同源物均包含1個高度保守的胰酶樣蛋白酶結(jié)構(gòu)域和1個1～2碳末端盤狀同源區(qū)域。研究顯示，盤狀同源區(qū)域是蛋白質(zhì)反應(yīng)模塊，作為多聚體信號復(fù)合物的組織者發(fā)揮重要作用，同時在臨床被作為是激活細(xì)菌和人類HTRA家族成員蛋白酶活性的開關(guān)[19]。此外，據(jù)相關(guān)資料報道[20]，HTRA1基因包含了9個外顯因子，編碼458個氨基酸，定位于染色體10q26.2。HTRA1在宮頸癌、黑色素瘤、子宮內(nèi)膜癌等多種癌癥中表達(dá)水平較低，這提示HTRA1對腫瘤有抑制作用。

本研究結(jié)果顯示，HTRA1蛋白在胃癌組織中的陽性表達(dá)率（13.18%）低于遠(yuǎn)癌組織（86.82%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;HTRA1蛋白表達(dá)陽性與陰性患者的腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習(xí)慣比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示HTRA1可促進(jìn)胃癌的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移，為胃癌預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)。同其他惡性腫瘤一樣，在胃癌的發(fā)展過程中HTRA1起到了至關(guān)重要的作用。Logistic回歸分析結(jié)果顯示，腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史及飲食習(xí)慣均是影響胃癌組織中HTRA1蛋白表達(dá)的獨(dú)立危險因素（P<0.05）。提示HTRA1表達(dá)水平與胃癌發(fā)生關(guān)系密切，且胃癌組織中HTRA1水平表達(dá)與吸煙、酗酒、精神狀態(tài)及飲食習(xí)慣有一定關(guān)系。

綜上所述，胃癌患者體內(nèi)HTRA1水平缺失與腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史、飲食習(xí)慣有關(guān)，且腫瘤直徑、浸潤深度、吸煙史、酗酒史、飲食習(xí)慣均是影響胃癌的獨(dú)立危險因素，通過以上指標(biāo)有助于發(fā)現(xiàn)胃癌治療的新靶點(diǎn)。

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（收稿日期：2019-09-18? 本文編輯：閆? 佩）