農(nóng)村豬場豬圓環(huán)病毒病的血清學調(diào)查

劉麗云

通過分析云南省永勝縣2016-2018年5個規(guī)模養(yǎng)豬場及部分農(nóng)村散養(yǎng)農(nóng)戶豬圓環(huán)病毒血清流行病學調(diào)查數(shù)據(jù)，結果發(fā)現(xiàn)，抗體陽性率分別為19.84%、15.76%、25.54%，表明在當?shù)匾?guī)模養(yǎng)豬場和散養(yǎng)農(nóng)戶中豬圓環(huán)病毒感染已普遍存在。

豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒2型（PVC-2）引起的豬的一種多系統(tǒng)功能障礙性傳染病（施德蘭等，2009）。PVC-2主要侵害哺乳仔豬和育肥豬，除引起PMWS（仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征）之外還與許多疾病的發(fā)生相關，主要有PDNS（豬皮炎與腎病綜合征）、PRDC（豬呼吸道疾病綜合征）、CT（仔豬先天性震顫）、PVC-2相關性繁殖障礙、PVC-2相關性腸炎等疾病（游一等，2009）。由于該病沒有藥物治療，也沒有可靠的商品疫苗進行免疫預防，目前該病已成為影響?zhàn)B豬生產(chǎn)的重要疾病。為查清永勝縣豬圓環(huán)病毒病的感染情況，2016年-2018年，選擇了縣境內(nèi)5個規(guī)模養(yǎng)豬場及部分農(nóng)村散養(yǎng)戶采集血清樣品，進行了PCV-2血清流行病學調(diào)查，為全縣制定綜合防治措施提供依據(jù)。

一、材料與方法

1、主要試劑、儀器及血清樣本：豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒均購自武漢科前動物生物制品有限公司。試劑盒內(nèi)含有預包被板、血清稀釋板、陰、陽性對照血清、酶結合物、洗滌液、樣品稀釋液、底物、終止液。多道和單道可調(diào)移液器、酶標儀等。

待檢血清：無菌采集豬場及部分散養(yǎng)農(nóng)戶種豬（種公、母豬及后備種豬）、商品豬血清樣本，分離血清，置于冰箱保存待檢。

2、檢測方法? ELISA檢測方法

（1）樣本稀釋：在血清稀釋板中按1：40的體積稀釋待檢血清樣本（195微升樣品稀釋液加5微升待檢血清樣本）。在血清稀釋板中按1：4分別稀釋陽性和陰性血清對照（180微升樣品稀釋液中加60微升對照血清）。

（2）加樣反應：取抗原包被板，每孔加入稀釋好的洗滌液200ul，靜置3分鐘倒掉液體，并在吸水紙上拍干，共計洗滌2次。再分別將稀釋好的待檢血清和對照各取100ul加入到抗原包被板孔中，待檢樣品做一孔。陰性和陽性對照各設2孔。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30分鐘。甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200ul，靜置3秒鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共計洗滌5次。

（3）加酶反應：每孔加入酶結合物100ul，置37℃溫育30分鐘。洗滌5次。切記每次在干凈吸水紙上拍干。

（4）顯色反應：每孔先加入底物A一滴，再加底物B一滴混勻，室溫避光顯色10分鐘。每孔加終止液一滴，10分鐘內(nèi)測定結果。

（5）結果判定：在酶標儀上測各孔OD值。試驗成立的的條件是陽性對照孔平均OD630nm值≥0.7，陰性對照孔平均OD630nm值必須≤0.3。樣品OD630nm值>0.42，判為陽性;樣品OD630nm值介于0.38到0.42之間，判為可疑;樣品OD630nm值<0.38，判為陰性。

二、檢測結果

2016年-2018年，應用ELISA方法共檢測豬血清樣品1570份，其中2016年檢測495份，總陽性感染率21.21%;2017年檢測536份，陽性感染率為16.6%;2018年檢測539份，陽性總感染率為19.67%。（見檢測結果表）

檢測結果表：

三、討論與分析：

1、從總陽性率來看，三年檢測的結果2017年最低，總感染率為16.6%， 2016年最高總感染率達21.21%。與施德蘭等（2009）應用ELISA方法對云南省玉溪市15個規(guī)模豬場豬圓環(huán)病毒2型（PVC-2）檢測總陽性37.47%和與郎洪武等（2000）對全國七省市不同豬群的調(diào)查豬圓環(huán)病毒2型（PVC-2）總感染率42.9%相比，陽性檢出率均較低。說明永勝縣豬圓環(huán)病毒2型（PVC-2）感染率低于屬于同省的玉溪市，比全國部分省市更低。

2、從不同年度來看，2016年總陽性率為21.21%，2017年為16.60%，2018年為19.67%。2018年的總陽性率比2016年下降1.54個百分點，但2018年比2017年上升3.07個百分點，說明永勝縣豬圓環(huán)病毒2型（PVC-2）感染呈波動勢逐年上升的趨勢。

3、從規(guī)模場與農(nóng)村散養(yǎng)戶感染情況來看：2016年規(guī)模場陽性總感染率為30.76%，農(nóng)村散養(yǎng)戶感染率為14.29%;2017年規(guī)模場陽性總感染率為21.48%，農(nóng)村散養(yǎng)戶感染率為12.6%。2018年規(guī)模場陽性總感染率為23.34%，農(nóng)村散養(yǎng)戶感染率為15.48%。從三年檢測的結果看，規(guī)模養(yǎng)殖場總陽性感染率均高于農(nóng)村散養(yǎng)戶，這可能與生豬養(yǎng)殖密度有關。

4、雖然豬群感染單一的（PVC-2）不能引起豬的發(fā)病和死亡，但其能夠破壞豬的免疫系統(tǒng)，從而繼發(fā)感染細菌、病毒和寄生蟲，并影響其它疫苗免疫應答（劉健等），導致高致病性豬藍耳病、豬瘟、豬口蹄疫等重大疫病發(fā)生的風險加大。同時由于（PVC-2）與其他致病因子的協(xié)同作用，加重了其它傳染病臨床表現(xiàn)和病理過程（楊漢春），導致出現(xiàn)較高的死亡率。永勝縣某養(yǎng)豬場2011年曾發(fā)生了一起由豬圓環(huán)病毒2型（PVC-2）與豬傳染性胸膜肺炎混合感染引起豬高死亡率的疫情，對養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟損失。

5、永勝縣豬圓環(huán)病毒病血清學檢測結果呈現(xiàn)逐年上升趨勢，應引起高度重視。建議：一是加強引種檢疫，杜絕外來疫源侵入。在今后的工作中要加大《種畜禽管理條例》的宣傳和執(zhí)行力度，規(guī)范引種行為，杜絕外來疫源的引入。二是改變傳統(tǒng)的養(yǎng)殖方式，推行早期隔離斷奶、多場式生產(chǎn)技術和全進全出管理方式，從養(yǎng)殖方式的轉(zhuǎn)變上提高防病能力。三是嚴格按生豬計劃免疫程序，提高其它疫病的免疫保護率，減少混合或繼發(fā)感染。重點加強豬瘟、高致病性豬藍耳病的免疫，同時加強豬偽狂犬病、豬細小病毒病的免疫工作，提高豬抵抗力，減少與豬圓環(huán)病毒病的協(xié)同作用，從而降低生豬疫病的發(fā)生。四是加強飼養(yǎng)管理，提高生豬抵抗力。改善環(huán)境衛(wèi)生，冬季注意豬舍通風，降低氨氣等不良氣體的濃度，減少環(huán)境應激因素。加強消毒工作，實施嚴格的生物安全措施，避免鼠、飛鳥及其他易感動物接近豬場。五是加強血清學和種公豬精液監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)陽性種豬應及時檢查、隔離、淘汰、清除帶毒豬并凈化豬場盡可能控制此病的橫向傳播。

（作者單位：674200云南省麗江市永勝縣動物疫病預防控制中心）