不同基原土牛膝的性狀顯微比較研究*

方 嵐 ，丁 野 ，王湘波 ，方 磊 △ ，戴 慧 ，彭東明 ，丁 盈

（1.云南省食品藥品審核查驗(yàn)中心，云南 昆明650106；2.湖南省藥品檢驗(yàn)研究院/湖南藥用輔料檢驗(yàn)檢測(cè)中心，湖南 長(zhǎng)沙410001；3.湖南省藥品質(zhì)量評(píng)價(jià)工程技術(shù)研究中心，湖南 長(zhǎng)沙 410001；4.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙410036；5.湖南省食品藥品職業(yè)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙410208）

土牛膝始現(xiàn)于《本草綱目》，“牛膝處處有之，謂之土牛膝”，指各地野生的牛膝，其功效“活血散瘀祛風(fēng)利尿，墜胎”[1]；《圖經(jīng)本草》記載“今福州人單用土牛膝根…云治婦人血塊極效”，而在肖步丹的《嶺南采藥錄》[2]中記載“土牛七別名牛舌大黃，牛舌頭，魚(yú)鱗草。取其須根用之…散血止痛”?！吨袊?guó)植物志》記載“又名倒鉤草，倒梗草”；《全國(guó)中草藥匯編》收載土牛膝的來(lái)源為粗毛牛膝Achyranthes aspera L.的根或全草；《中藥大辭典》和《中國(guó)藥材學(xué)》收載的土牛膝來(lái)源與其一致，藥用全草，又名“牛舌大黃，牛舌頭，魚(yú)鱗草，倒扣草等”[3-6]。在兩廣及西南地區(qū)為民間習(xí)用藥，如瑤藥“五虎九牛十八鉆七十二風(fēng)”中的牛膝風(fēng)[7]，傣藥中的“懷哦囡”[8]，苗藥中的“酒嗓咯咯額?！盵9]等?！稄V西中藥志》記載為根部或其全草入藥[10]；《廣西壯族自治區(qū)瑤藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》收載干燥全草入藥[11]；《廣西特色中草藥資源選編》收載全草入藥[12]。2020版《中國(guó)藥典》四部通則規(guī)定土牛膝來(lái)自莧科植物的粗毛牛膝Achyranthes aspera L.的干燥根及根莖[13]，具有活血散瘀，祛濕利尿等功效[14-15]，含齊墩果酸、牛膝多糖、蛻皮甾酮等組成分[16-18]，用于治療淋病、經(jīng)閉、白喉腫痛、扁桃體炎、咽喉炎、急慢性咽炎、風(fēng)濕關(guān)節(jié)疼痛、尿血等[19-20]?，F(xiàn)代藥理研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，土牛膝水提物可以抑制炎癥早期的毛細(xì)血管擴(kuò)張，減少血小板凝集，抗氧化和利尿等方面作用[21-23]。由于它在民間特別是少數(shù)民族中的應(yīng)用非常廣泛，因此在湖南、貴州、浙江、上海、安徽等13省的藥材標(biāo)準(zhǔn)和炮制規(guī)范中，也收錄了土牛膝的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，但其植物基原卻各不相同?？偨Y(jié)起來(lái)，湖南、貴州的中藥材標(biāo)準(zhǔn)和湖南的中藥飲片炮制規(guī)范其基原是與中國(guó)藥典的四部通則所載土牛膝基原一致；江蘇省中藥飲片炮制規(guī)范1980年版收載的粗毛牛膝Achyranthes aspera L.、野生牛膝Achyranthes bidentata Bl.、柳葉牛膝Achyranthes longifolia（Makino）3 種基原[24]，其余標(biāo)準(zhǔn)收載基原均為野生牛膝。經(jīng)查閱文獻(xiàn)及對(duì)湖南省內(nèi)長(zhǎng)沙、永州及周邊道縣、雙牌、江華等地調(diào)研，3種基原湖南省內(nèi)均有分布，但略有不同，其中牛膝（野生種）Achyranthes bidentata Bl.在全省各地均廣泛分布；粗毛牛膝Achyranthes aspera L.主要分布于道縣、江華等地區(qū)；柳葉牛膝 Achyranthes longifolia（Makino）主要分布于道縣、雙牌和江華等地區(qū)。通過(guò)當(dāng)?shù)厮庌r(nóng)、藥材收購(gòu)站及瑤醫(yī)交流了解，3種基原生長(zhǎng)環(huán)境一致，經(jīng)?？梢?jiàn)同地混生，且各地均存在混用的情況。而現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中并無(wú)3種不同基原的區(qū)分方法。本文對(duì)土牛膝3種不同基原的形態(tài)組織學(xué)進(jìn)行了全面細(xì)致的比較研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器

Canon EOS 5D MarkⅢ相機(jī)，OLYMPUS CX41體視顯微鏡，LeicaDM2500顯微鏡及成像系統(tǒng)。

土牛膝的實(shí)驗(yàn)樣品均為湖南省藥品檢驗(yàn)研究院中藥檢驗(yàn)所在湖南省永州市零陵區(qū)、雙牌縣、道縣及江華瑤族自治縣采集原植物經(jīng)基原鑒定后確定分別為粗毛牛膝、野生牛膝及柳葉牛膝。性狀鑒別分別參考《中國(guó)藥典》及《湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2009年版，橫切片顯微方法取新鮮土牛膝，經(jīng)FAA固定液固定，進(jìn)行常規(guī)石蠟切片，并用番紅—固綠染色裝片[25]；粉末顯微方法參照《中國(guó)藥典》2020年版四部附錄藥材（飲片）顯微制片方法制備。

2 基原鑒定及生藥鑒別

2.1 粗毛牛膝 標(biāo)本（1）為栽培品，采于湖南永州市馬鞍嶺種植基地，標(biāo)本長(zhǎng)約50 cm。經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)王智副教授鑒定為莧科植物土牛膝Achyranthes aspera L.。見(jiàn)圖 1。

圖1 粗毛牛膝標(biāo)本圖

2.2 野生牛膝 標(biāo)本（2）于2018年9月18日采于湖南長(zhǎng)沙市岳麓山，標(biāo)本長(zhǎng)約30cm。經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)王智副教授鑒定為莧科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl.。見(jiàn)圖 2。

圖2 野生牛膝標(biāo)本圖

2.3 柳葉牛膝 標(biāo)本（3）為野生品。本品種與牛膝類似，其區(qū)別在于：野生牛膝的葉片呈現(xiàn)的是披針形或者為寬披針形，長(zhǎng)度在10～20 cm，寬為2～5 cm，葉片的頂端尾部呈尖形；小苞片為針狀，長(zhǎng)度一般為3.5 mm，基部有2耳狀薄片，只有些許緣毛；退化的雄蕊呈現(xiàn)的是方形，葉片的頂端具有不明顯的齒痕。見(jiàn)圖3。

圖3 柳葉牛膝標(biāo)本圖

3 性狀鑒別

3.1 粗毛牛膝 根莖呈圓柱形，直徑在5～10 mm。根莖的表面大多是灰褐色，根莖上端有數(shù)個(gè)殘存的莖基，具節(jié)，節(jié)上著生多數(shù)細(xì)根。主根為長(zhǎng)圓柱形，略有彎曲，直徑3～5 mm，長(zhǎng) 10～15 cm，表面土黃色或淺棕色，能夠看見(jiàn)細(xì)長(zhǎng)的縱皺紋以及側(cè)根痕。根莖質(zhì)地偏硬，不容易被折斷，其斷面具有纖維性；根較柔韌，不易折斷，斷面有排列成數(shù)個(gè)輪環(huán)的點(diǎn)狀維管束。氣微，味微甘，而后微苦澀。見(jiàn)圖4。

圖4 粗毛牛膝性狀圖

3.2 野生牛膝 根呈細(xì)長(zhǎng)圓柱形，長(zhǎng)16～65 cm，直徑0.3～1.2 cm。表面灰黃色或淡棕色，有細(xì)縱皺紋、稀疏的側(cè)根痕及橫長(zhǎng)皮孔樣的突起。質(zhì)脆硬，斷面較平坦，油潤(rùn)而略呈角質(zhì)樣，多數(shù)黃白色點(diǎn)狀維管束散布在較大的中心維管束木質(zhì)部周圍，斷續(xù)排成2～4輪。氣微，味微甜而稍苦澀。見(jiàn)圖5。

圖5 牛膝（野生種）性狀圖

3.3 柳葉牛膝 根較短粗，長(zhǎng)1.8～5.8 cm，直徑1.0～1.6 cm。根扭曲，長(zhǎng) 8～21 cm，直徑 0.3～1.3 cm。表面淺黃褐色，具細(xì)密的縱皺紋及須根痕。質(zhì)硬而稍韌，斷面皮部淺灰褐色，維管束多數(shù)，呈點(diǎn)狀散布成環(huán)。氣微，味微甜。見(jiàn)圖6。

圖6 柳葉牛膝性狀圖

4 顯微鑒別

4.1 根橫切面

4.1.1 粗毛牛膝 木栓層由多列呈扁平狀的細(xì)胞組成，栓內(nèi)層較窄；維管束外韌型，斷續(xù)排列成4～8輪，由結(jié)合組織將其彼此分開(kāi)[26-27]，維管束由內(nèi)向外依次變小，維管束之間以厚壁細(xì)胞輔助相連形成環(huán)狀；向內(nèi)維管束較大，束間結(jié)合組織為薄壁細(xì)胞；木質(zhì)部主要由導(dǎo)管及小的木纖維組成，木質(zhì)部射線較窄，中心次生維管束外韌形，呈2～4角狀排列。薄壁細(xì)胞含有草酸鈣砂晶。見(jiàn)圖7、圖8。

圖7 粗毛牛膝根橫切面

圖8 粗毛牛膝根莖橫切面

4.1.2 野生牛膝 與粗毛牛膝的主要區(qū)別為維管束斷續(xù)排列成2～4輪。見(jiàn)圖9、圖10。

圖9 野生牛膝根橫切面

圖10 野生牛膝根莖橫切面

4.1.3 柳葉牛膝 與粗毛牛膝的主要區(qū)別為維管束斷續(xù)排列成2～3輪，維管束之間間隔較寬。見(jiàn)圖11、圖12。

圖11 柳葉牛膝根橫切面

圖12 柳葉牛膝根莖橫切面

4.2 粉末鑒別 粗毛牛膝的粉末呈現(xiàn)出灰棕色。木纖維形成束狀，有些和導(dǎo)管相交，細(xì)長(zhǎng)，木纖維一端呈斜尖形，直徑在11～23 μm，壁薄，紋孔呈細(xì)縫狀或人字形等，較稀疏，孔溝不明顯；薄壁細(xì)胞中含較多草酸鈣砂晶；具緣紋孔導(dǎo)管或網(wǎng)紋導(dǎo)管可見(jiàn)，直徑約至80μm，壁非木化。

野生牛膝與柳葉牛膝的粉末鑒別與粗毛牛膝一致。見(jiàn)圖13。

圖13 土牛膝粉末顯微

5 結(jié)論與討論

由于土牛膝3種不同基原在各省民間尤其是少數(shù)民族地區(qū)均廣泛使用，功能主治基本一致，但各省市地方中藥材標(biāo)準(zhǔn)及炮制規(guī)范中土牛膝基原卻各不相同，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容也僅有性狀、顯微鑒別及齊墩果酸的薄層色譜鑒別，且性狀與顯微鑒別描述均較簡(jiǎn)單，并不能對(duì)不同基原近似種進(jìn)行有效區(qū)分。本文通過(guò)對(duì)3種不同基原土牛膝的原植物與藥材性狀；橫切面及粉末顯微的全面觀察比較，認(rèn)為3種不同基原從性狀上可以對(duì)原植物進(jìn)行較好的區(qū)分。但在藥材及飲片加工后，柳葉牛膝根及根莖斷面略顯紅色，可以與另外兩個(gè)基原較好的區(qū)分；而粗毛牛膝與牛膝在藥材及飲片性狀上特征較接近，從性狀上不易區(qū)分。通過(guò)對(duì)根及根莖的橫切面與粉末顯微觀察，3種基原粉末顯微組成基本一致，無(wú)差別；而通過(guò)對(duì)橫切面顯微觀察發(fā)現(xiàn)，3種不同基原土牛膝維管束排列方式有區(qū)別：其中粗毛牛膝維管束斷續(xù)排列成4～8輪，維管束由內(nèi)向外依次變小，維管束之間以厚壁細(xì)胞輔助相連形成環(huán)狀；野生牛膝斷續(xù)排列成2～4輪，維管束之間間隔相對(duì)較密；而柳葉牛膝斷續(xù)排列成2～3輪，維管束之間間隔相對(duì)較寬，可以用來(lái)對(duì)3種不同基原進(jìn)行區(qū)分。

本文通過(guò)對(duì)3種不同基原土牛膝藥材的生藥鑒別形態(tài)特征進(jìn)行比較分析與研究，為土牛膝藥材及飲片地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)奠定了基礎(chǔ)。建議后續(xù)對(duì)市場(chǎng)進(jìn)一步調(diào)查，并對(duì)其化學(xué)成分、藥理作用進(jìn)行進(jìn)一步深入研究，以考察是否可以統(tǒng)一基原，擴(kuò)大中藥材來(lái)源。