蛭龍活血通瘀膠囊對大鼠腰椎間盤突出癥模型髓核中PLA2、TNFα、IL-1β 的實驗研究

羅琳，伍光輝

(西南醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院骨傷科，四川 瀘州)

0 引言

腰椎間盤突出癥(lumbar disc herniation，LDH) 是臨床上常見病、高發(fā)病之一，其患病率不斷增長，各種炎癥介質在椎間盤病變導中起著尤為重要的作用，如磷脂酶A2(Phospholipase A2，PLA2)、腫 瘤 壞 死 因 子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白 介素-1β(Interleukins-1，IL-1β)等[1-2]。蛭龍活血通淤膠囊是我院研發(fā)的中藥制劑，具有活血化瘀、鼓舞陽氣、祛風通經等作用[3]，最早用于心腦血管疾病，但隨著藥物的不斷使用，發(fā)現該藥在治療LDH 中也有著良好的療效。但目前針對該藥治療LDH 機制尚不清楚，考慮與能抑制相關炎癥介質活成有關，本實驗通過觀察蛭龍活血通淤膠囊對大鼠LDH 模型髓核組織中PLA2 活性及IL-6、TNF-α 的表達。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選取12 月齡SD 大鼠60 只，體重(250±20g)，由西南醫(yī)科大學實驗動物中心提供。動物生長環(huán)境：清潔級，溫度控制在22℃左右，濕度在65%左右。用隨機數字表法將大鼠平均分成造模組、西藥組、中藥組，每組 20 只，均建立LDH 模型。

1.2 實驗藥物

蛭龍活血通淤膠囊方藥組成：黃芪、水蛭、地龍、桂枝、大血藤等，由西南醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，批號[20091213] ，吲哚美辛腸溶片，廣東華南藥業(yè)集團有限公司，批號[H44020701]。

1.3 建立大鼠LDH 模型

近肛門處切斷大鼠尾椎，取出尾椎其中一個椎間盤中的髓核，并以L4、L5 棘突剝離兩側椎旁肌肉組織，顯露L4、L5 椎板，咬除其右側椎板，并置入之前取出的髓核組織，使其對神經根產生壓迫，制作腰椎間盤突出癥模型，依次縫合傷口。

1.4 觀察指標及測定

采用Elisa 法檢測大鼠中PLA2 活性，通過免疫組化法檢測法檢測TNFα、IL-1β 的表達。

1.5 統(tǒng)計學方法

統(tǒng)計采用軟件SPSS 26.0 分析，計量資料行獨立樣本t 檢驗，() 表示；分類變量行卡方檢驗，當(P＜0.05) 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

見表1、表2。

3 討論

3.1 蛭龍活血通淤膠囊對大鼠腰椎間盤突出癥模型的影響

腰椎間盤突出癥在傳統(tǒng)醫(yī)學中屬于痹癥、腰腿痛等，傳統(tǒng)醫(yī)學認為其發(fā)病機制主要是氣血瘀滯、經絡不通，該病好發(fā)于青壯年，以體力勞動為職業(yè)的患者居多。LDH 的病機包括外因與內因，外因包括勞損、外傷，內應保留肝腎虧虛，筋脈失養(yǎng)，內因與外因導致局部血循受阻，局部經絡、氣血瘀滯，不通則痛，不容則痛[4-5]?！端貑? 刺腰痛篇》中，“衡絡之脈令人腰痛，不可以俯仰…得之舉重傷腰”，仔細的形容了腰椎間盤突出癥的發(fā)病原因、癥狀和體征等。中醫(yī)醫(yī)籍講：“肉里之脈令人腰痛…咳則筋縮急”。古人將腰疼、腿痛共同認為為LDH 的癥狀，而沒有單獨考慮?！督饏T要略》載有：“其人身體重，腰中冷，如坐水中…腰重如帶五千錢”。形象而生動的描述了LDH 的相關癥狀。傳統(tǒng)醫(yī)學認為LDH 癥狀分為四型：即氣滯血瘀型、濕熱痰滯型、風寒濕滯型、肝腎虧虛型。而其中最常見的證型是氣滯血瘀、肝腎虧虛。我院研制的蛭龍活血通淤膠囊具有活血化瘀、祛風通經，鼓舞陽氣等作用[6-8]?，F代研究表明此方在LDH 消除炎癥介質中有著很好的療效，能消除炎癥介質，減輕相關癥狀，起到消炎止痛的作用。

表1 三組髓核組織中PLA2 活性比較

表1 三組髓核組織中PLA2 活性比較

組別 n 造模第7 天 造模第14 天 造模第28 天造模組 20 53±4.17 38±3.12 35±2.11西藥組 20 39±3.45 32±4.16 31±0.17中藥組 20 40±1.26 24±2.32 20±2.21

表2 三組血清 IL-6、TNF-α 濃度比較

表2 三組血清 IL-6、TNF-α 濃度比較

組別 n IL-6(ng/L) TNF-α(ng/L)造模組 20 15.12±2.11 84.14±6.21西藥組 20 14.31±3.32 80.21±7.01中藥組 20 13.01±0.36 72.12±5.36

3.2 蛭龍活血通淤膠囊對大鼠LDH 模型髓核中PLA2、TNFα、IL-1β 的影響

自從炎癥介質PLA2 在LDH 髓核組織中發(fā)現以來，越來越多的研究參與到其中。有研究發(fā)現正常機體內的PLA。機體內的PLA2 主要受到兩種物質的調節(jié)，一種為內源性的抑制物，另一種為激活蛋白促進PLA2 生成。正常情況下，兩組物質處于平衡狀態(tài)，當機體受到各種致病因素后，PLA2 激活造成椎間盤退變。反而，抑制PLA2，可延緩椎間盤退變，減輕相關LDH 癥狀。除了PLA2，其它炎癥介質如TNFα、IL-1β 在LDH 發(fā)展中也產生著關鍵的作用，TNF 在疾病早期發(fā)展階段，能激活機體免疫細胞，促進相關炎性因子的產生和聚集。這些炎癥物質能引起細胞毒性作用，釋放NO、過氧化物酶等，最終引起椎間盤軟骨的破壞，椎體失穩(wěn)，髓核突出或掉出，最終壓迫神經根，引起LDH 一系列的變化[9-11]。本次實驗發(fā)現：制模成功后經大鼠灌胃給藥后第7 天，三組PLA2的活性達到峰值，中藥組與造模組PLA2 差別P＞0.05，西藥組與造模組PLA2 相比P＞0.05：其中中藥組與西藥組PLA2 活性兩組比較P＞0.05，統(tǒng)計學上無差異。于14、28 天時，中、西藥物兩組都能抑制髓核組織中的PLA2 活性，與造模組比較P＜0.05；在造模28 天后，造模組TNFα、IL-1β 高于中、西藥兩組，中藥組TNFα、IL-1β 表達高于西藥組，兩組比較P＜0.05，統(tǒng)計學上有差異。蛭龍活血通淤膠囊可降低LDH 大鼠腰椎間盤突出癥模型髓核PLA2活性及血清IL-6、TNF-α 的表達，能抑制髓核炎癥介質生成，從而發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛藥物類似效果，對緩解腰椎間盤突出癥癥狀及延緩椎間盤退變有明顯作用。