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    茶樹鮮葉和鮮花精油成分及清除DPPH自由基能力的比較

    2020-05-21 03:33:29李樹炎徐曉燕王林
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年6期
    關(guān)鍵詞:醇類鮮葉精油

    李樹炎 徐曉燕 王林

    摘要:以江蘇茶博園的福鼎大白茶樹鮮葉和鮮花為研究對象,采用減壓水蒸氣蒸餾法提取鮮花、鮮葉精油,對其成分采用氣相色譜-質(zhì)譜法( GC-MS)進(jìn)行分析,并測試它們對2,2-二苯基-1-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除能力。從茶樹鮮葉精油中共鑒定出21種主要化學(xué)成分,占精油總量的96.58%,其中酯類化合物有6種,醇類化合物有10種,酚類化合物有1種,醛酮類化合物有3種,酸類化合物有1種。從茶樹鮮花精油中共鑒定出25種主要化學(xué)成分,占精油總量的97.88%,其中酯類化合物有5種,醇類化合物有11種,酚類化合物有1種,醛酮類化合物有4種,萜烯類化合物有2種,烷烴類化合物有2種。2種精油成分和相對含量差異明顯,共有組分有12種。結(jié)果表明,茶樹鮮葉和鮮花精油對DPPH自由基具有明顯的清除作用,且濃度越大,清除能力越強(qiáng)。

    關(guān)鍵詞:茶樹鮮葉;茶樹鮮花;精油;減壓水蒸氣蒸餾法;GC-MS;DPPH自由基;主要化學(xué)成分

    中圖分類號: TS225.3? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A? 文章編號:1002-1302(2020)06-0184-05

    植物精油又稱為揮發(fā)油,被譽(yù)為“液體黃金”,是一類存在于植物體中能在常溫下?lián)]發(fā)、具有芳香氣味的油狀液體,可隨水蒸氣蒸餾出來[1]。精油成分比較復(fù)雜,包含脂肪族、芳香族和萜烯類化合物以及它們的含氧衍生物,如醇、醛、酮、醚、酯等,以外還包括含氮和含硫化合物[2]。植物精油廣泛分布于植物體內(nèi),具有一定的抗菌消炎、天然防腐和提高免疫等多種功效,被廣泛應(yīng)用于食品、香料、香精、化妝品及制藥等工業(yè)領(lǐng)域。

    茶樹(Camellia sinensis)是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物。長期以來,茶樹嫩葉的開發(fā)和利用較多,而葉片和花朵的利用率極低。相對于茶樹嫩葉,茶樹葉片和花的生長周期較長,積累了多種活性物質(zhì)與有益成分,適于提取精油。目前對茶樹花精油的研究已有相關(guān)報道,而關(guān)于茶樹葉精油的研究鮮有報道。王麗麗研究發(fā)現(xiàn),新鮮初展茶樹花精油的主要成分為萜烯醇類、芳香醇類、脂肪醇類和芳香酮類化合物,占精油總量的84.1%~95.6%[3]。金玉霞采用超臨界CO2萃取法萃取得到的茶樹花精油主要成分包括十九烷(187%)、二十一烷(12.2%)、二十三烷(4.91%)、甲基丙烯酸乙二醇酯(307%)、植酮(2.99%)、咖啡因(1.68%)、植物醇(1.61%)等,具有明顯的總抗氧化活性,對2,2-二苯基-1-三硝基苯肼(DPPH)自由基具有明顯的清除作用[4]。

    為了充分利用茶樹資源,減少精油成分受到的影響,本研究采用減壓水蒸氣蒸餾法提取精油,對茶樹鮮葉和鮮花的精油主要成分進(jìn)行比較研究,旨在為茶樹葉、花精油的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    研究材料采自江蘇茶博園,品種為福鼎大白,于霜降前后采摘茶樹鮮葉和初展的茶樹鮮花,冷凍保存。

    2,2-二苯基-1-三硝基苯肼(DPPH)、維生素C、氯化鈉、乙醚、乙醇、硫酸鈉,均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,上海越眾儀器設(shè)備有限公司;AX124ZH電子天平,奧豪斯儀器(上海)有限公司;高速萬能粉碎機(jī),上海轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)電器有限公司;HH.S21-4 電熱恒溫水浴鍋,上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司;79-1磁力加熱攪拌器,江蘇金怡儀器科技有限公司;T6型紫外可見分光光度計,北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

    1.4 方法

    1.4.1 試驗時間和地點 試驗從2016年9月至2018年12月在江蘇茶博園和江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程中心進(jìn)行。

    1.4.2 茶樹鮮葉和鮮花精油提取 樣品制備:將茶樹鮮葉、鮮花樣品置于高速粉碎機(jī)內(nèi)粉碎,得到相應(yīng)的粉碎試樣。

    減壓蒸餾提?。簩⒎鬯楹蟮脑嚇影凑? g ∶ 3 mL的比例加入4%的NaCl溶液中浸泡1 h,轉(zhuǎn)入旋蒸儀進(jìn)行減壓蒸餾提取,水浴溫度控制在65~75 ℃,真空度控制在0.03~0.05 MPa,餾出液冷凝后即為純露,當(dāng)餾出液無茶香味或冷凝液滴在玻璃板上無油出現(xiàn)時即可停止蒸餾。

    萃取分離:以無水乙醚為萃取劑,以體積比為 3 ∶ 1 的比例與純露混合均勻,加入適量氯化鈉作破乳劑,于分液漏斗中靜置分層。精油及醚不溶于水浮于分液漏斗的上部,隔夜后將下部溶液放出,收集上部精油和無水乙醚混合物。

    水浴除醚:在(38±1) ℃水浴鍋中蒸發(fā)除去乙醚,得到淡黃色有濃郁香味的精油粗提物,加入適量無水硫酸鈉除去水分,靜置后吸取液體,即為茶樹鮮葉精油和茶樹鮮花精油。

    1.4.3 氣相色譜質(zhì)譜分析條件 儀器:Agilent 7890B-5977A氣質(zhì)聯(lián)用儀,美國安捷倫科技公司;HP-5石英毛細(xì)管柱,30 m×0.25 mm×025 m。

    分析條件:茶樹鮮葉、鮮花精油與乙酸乙酯體積比為1 ∶ 33;進(jìn)樣口溫度為250 ℃,不分流;離子源溫度為230 ℃。升溫程序:起始溫度為50 ℃,保持 3 min;以30 ℃/min升溫速率升溫至70 ℃,保持 2 min;以3 ℃/min升溫速率升溫至80 ℃,保持 2 min;以30 ℃/min升溫速率升溫至115 ℃,保持 2 min;以3 ℃/min升溫速率升溫至146 ℃,保持 2 min;最后以50 ℃/min升溫速率升溫至250 ℃,保持 2 min。

    1.4.4 定性和定量分析 采用氣質(zhì)聯(lián)用儀對茶樹鮮葉、鮮花精油進(jìn)行成分分析,所得質(zhì)譜信息采用儀器配置的NIST譜庫進(jìn)行檢索,各化合物通過保留時間進(jìn)行定性,采用峰面積歸一化法進(jìn)行定量。

    1.4.5 DPPH自由基清除能力測定 分別將茶樹鮮葉、鮮花精油稀釋成不同濃度的乙醇溶液,取各濃度的溶液1 mL與2 mL 2 mmol/L 的DPPH溶液混勻,室溫下避光反應(yīng)15 min,于517 nm下測定吸光度(D1):取各濃度的溶液1 mL與2 mL無水乙醇混勻,室溫下避光反應(yīng)15 min,于517 nm下測定吸光度(D2):取1 mL蒸餾水與2 mL 2 mmol/L DPPH溶液混勻,于517 nm下測定吸光度(D3)。以蒸餾水和無水乙醇混合液為空白對照,1 mg/mL維生素C儲備溶液配制成的梯度溶液為陽性對照,每組平行測定3次,DPPH清除率計算公式如下[5]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 茶樹鮮葉精油成分分析

    本研究從茶樹鮮葉精油中共鑒定出21種主要化學(xué)成分,占精油總量的96.58%,各組分相對含量見表1。

    從表1可以看出,在21種茶樹鮮葉精油主要化學(xué)成分中,醇類化合物有10種,相對含量為4715%,其中,芳香醇有5種,脂肪醇有2種,萜烯醇有3種;酯類化合物有6種,相對含量為4262%;醛酮類化合物有3種,相對含量為548%;酚類化合物有1種,相對含量為1.22%;酸類化合物有1種,相對含量為0.11%。相對含量超過1%的成分有15種,分別是葉醇(26.67%)、丙酸乙酯(21.58%)、乙酸丁酯(10.03%)、反-2-己烯-1-醇(8.36%)、乙酸芳樟酯(8.05%)、植酮(402%)、2-苯乙醇(3.69%)、芳樟醇(2.29%)、橙花醇(2.13%)、苯甲醇(1.45%)、BHT(1.22%)、冬青油(1.10%)、苯乙酮(1.08%)、1-苯乙醇(108%)、異丁酸5-乙烯基-2-呋喃甲酯(101%)。在茶樹鮮葉精油中葉醇含量最高。

    2.2 茶樹鮮花精油成分分析

    本研究從茶樹鮮花精油中共鑒定出25種主要化學(xué)成分,占精油總量的97.88%,各組分相對含量見表2。

    從表2可以看出,在25種茶樹鮮花精油主要化學(xué)成分中,醛酮類化合物有4種,相對含量為5331%;醇類化合物有11種,相對含量為3475%,其中萜烯醇有6種,脂肪醇有3種,芳香醇有2種;酯類化合物有5種,相對含量為3.91%;萜烯化合物有2種, 相對含量為0.57%;烷烴化合物

    有2種,相對含量為5.67%;酚類化合物有1種,相對含量為0.16%。相對含量超過1%的組分有11種,分別是苯乙酮(5229%)、1-苯乙醇(1526%)、2-丁醇(5.53%)、二十三烷(4.47%)、2-己醇(3.86%)、2-苯乙醇(3.52%)、芳樟醇(262%)、乙酸丁酯(1.86%)、丙酸乙酯(1.31%)、二十一烷(1.20%)、桉葉油素(1.07%)。

    2.3 茶樹鮮葉和鮮花精油成分比較

    茶樹鮮葉和鮮花精油成分和相對含量差異明顯。在茶樹鮮葉精油中醇類化合物種類最多,含量最高;在茶樹鮮花精油中醇類化合物種類最多,醛酮類化合物含量最高。

    2種精油的共有組分有12種,分別是丙酸乙酯、乙酸丁酯、葉醇、苯甲醛、苯乙酮、2-苯乙醇、冬青油、植酮、BHT、橙花醇、芳樟醇、1-苯乙醇,相對含量見圖1。其中,丙酸乙酯、乙酸丁酯、苯乙酮、1-苯乙醇、2-苯乙醇、芳樟醇等相對含量均大于1%。

    2.4 DPPH自由基清除能力比較

    DPPH自由基是一種穩(wěn)定的有機(jī)自由基,在 517 nm 處有較強(qiáng)吸收峰,與自由基清除劑以單電子配對后,該吸收峰逐漸消失,吸光值的變化與其接收的電子數(shù)成定量關(guān)系,因此,可以利用分光光度計進(jìn)行定量分析,測定自由基清除劑抗氧化性能強(qiáng)弱[6]。

    不同濃度茶樹鮮葉和鮮花精油清除DPPH自由基的能力見圖2。茶樹鮮葉、鮮花精油對DPPH自由基具有明顯的清除作用,且濃度越大,清除能力越強(qiáng)。相同濃度的茶樹鮮葉、鮮花精油對DPPH自由基清除能力差異不明顯,表明二者的抗氧化活性相似,但均不如維生素C。

    3 討論與結(jié)論

    在茶樹鮮葉精油中含量最高的成分是葉醇,為2667%,葉醇廣泛存在于茉莉花、薄荷、天竺葵、百里香、草莓、葡萄等植物葉片中,但在茶樹鮮葉中含量最多。葉醇具有強(qiáng)烈的綠色嫩葉清香氣味,可作為香料使用,通常只需添加0.5%或更少的葉醇,即可得到顯著的葉草香味[7]。因此,可將茶樹鮮葉精油開發(fā)為調(diào)香物質(zhì)。

    在茶樹鮮花精油中含量最高的成分是苯乙酮,為5229%,其次是1-苯乙醇,為15.26%。苯乙酮是茶樹鮮花的主要香氣物質(zhì),具有強(qiáng)烈的清甜花香和甘草氣息。1-苯乙醇具有淡梔子花香味,帶有少許玫瑰香韻。本研究結(jié)果與王麗麗報道的苯乙酮和 1-苯乙醇等為茶樹鮮花主要香氣成分[3]一致,與茶樹鮮花的感官香氣特征相近。

    在茶樹鮮葉、鮮花精油中種類最多的成分均是醇類化合物。其中2-苯乙醇和芳樟醇在2種精油中的相對含量差異不大,二者均對精油的特征香氣形成具有一定貢獻(xiàn)。2-苯乙醇具有清甜的玫瑰樣花香,被廣泛用于調(diào)配皂用和化妝品香精,亦可用來調(diào)配各種食用香精。芳樟醇有“香料美王” 之譽(yù),香氣類似鈴蘭的花香,可用于香水、香料的調(diào)配,具有抗菌鎮(zhèn)痛等藥理作用,也可作為異植物醇合成前體[8]。

    精油中含多種揮發(fā)性物質(zhì),成分復(fù)雜,這些成分共同作用,使精油具有一定的抗氧化活性。茶樹鮮葉和鮮花精油對DPPH自由基的清除作用與其組分中含有多種抗氧化物質(zhì)有關(guān)。2種精油都含有一種重要的抗氧化劑BHT。BHT有近70年的應(yīng)用歷史,是產(chǎn)量最大、應(yīng)用最廣的酚類抗氧化劑。此外茶樹鮮葉、鮮花精油中還含有植酮等抗氧化物質(zhì)。

    本研究從茶樹鮮葉精油中共鑒定出21種主要化學(xué)成分,其中醇類化合物有10種,酯類化合物有6種,醛酮類化合物有3種,酚類化合物有1種,酸類化合物有1種;從茶樹鮮花中共鑒定出25種化合物,其中酯類化合物有5種,醇類化合物有11種,醛酮類化合物有4種,萜烯類化合物有2種、烷烴類化合物有2種,酚類化合物有1種。2種精油成分和相對含量差異明顯,共有組分有12種。茶樹鮮葉和鮮花精油對DPPH自由基具有明顯的清除作用,量效關(guān)系明顯。本研究為茶樹資源的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了一定的參考。

    參考文獻(xiàn):

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