稻曲病田間簡(jiǎn)易接種方法

張俊喜 成曉松 葛兆建

摘要：介紹一種簡(jiǎn)易稻曲病田間接種方法（厚垣孢子直接噴霧），包括菌源的采集保存、水稻種植過(guò)程、接種體制備、接種實(shí)施過(guò)程以及最終接種效果，為水稻新品種對(duì)稻曲病的抗性田間鑒定、殺菌劑新品種對(duì)稻曲病的田間藥效試驗(yàn)提供一種簡(jiǎn)易可行的操作方法，從而為水稻生產(chǎn)上新品種、新藥劑的選擇提供保障。

關(guān)鍵詞：稻曲病;田間接種;厚垣孢子;殺菌劑;鑒定

中圖分類號(hào)：S435.111.4+6? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A? 文章編號(hào)：1002-1302（2020）06-0107-03

水稻稻曲病是由稻綠核菌[有性態(tài)：Villosiclava virens （Nakata） E. Tanaka & C. Tanaka;無(wú)性態(tài)：Ustilaginoidea virens（Cooke）Takah.]引起的水稻穗部谷粒病害，是一種全球性的真菌病害，在亞洲、美洲、非洲等許多國(guó)家和地區(qū)均有較大面積發(fā)生，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，病穗率可達(dá)40%以上。近年來(lái)，由于水稻耕作制度和生產(chǎn)技術(shù)條件發(fā)生較大變化，我國(guó)稻曲病發(fā)生日趨加重，已從次要病害上升為主要病害。穗粒發(fā)病后內(nèi)部菌絲體膨大，呈現(xiàn)大于穗粒多倍的稻曲球，不但影響水稻產(chǎn)量和稻米品質(zhì)，而且含有對(duì)人、畜劇毒的稻曲菌毒素，對(duì)動(dòng)物球形分子蛋白具有抑制效應(yīng)，能夠引起老鼠的肝臟、腎臟和膀胱細(xì)胞壞死。稻曲病不僅影響農(nóng)作物水稻產(chǎn)量，而且對(duì)人類健康構(gòu)成了重大負(fù)面影響[1-2]。

稻曲病的發(fā)生規(guī)律尚未完全清楚，對(duì)發(fā)生溫度都有相佐觀點(diǎn)。對(duì)稻曲病的研究已有較長(zhǎng)時(shí)間，近年來(lái)國(guó)家、省、市（區(qū)）立項(xiàng)研究主要在致病菌類型及分子機(jī)制等方面有階段性結(jié)論，但生產(chǎn)上如何采取切實(shí)可行的高效防控措施還沒(méi)有定論。達(dá)成共識(shí)的是不同水稻品種抗病性和不同殺菌劑品種對(duì)稻曲病的防控效果具有明顯差異。筆者開(kāi)展稻曲病田間簡(jiǎn)易接種方法研究，為水稻新品種推廣應(yīng)用、殺菌劑新品種篩選提供保障。

1 材料與方法

1.1 稻曲球采集保存

2014年、2017年江蘇省鹽城市大面積生產(chǎn)上水稻稻曲病發(fā)生極少，尋找發(fā)病重的田塊采集稻曲球（表1），為下年試驗(yàn)作準(zhǔn)備，各采集300粒稻曲球帶入江蘇沿海地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所（鹽城市亭湖區(qū)）工作室自然晾干，裝入塑料袋于室內(nèi)常溫下保存。

1.2 水稻種植

為提高試驗(yàn)接種效果，于2015年選擇高感稻曲病的鹽稻10號(hào)[3-4]，2018年選擇生產(chǎn)上常見(jiàn)發(fā)生稻曲病的南粳9108[5-6]，作為供試水稻品種，2～3本栽插，常規(guī)肥水管理，其他見(jiàn)表2。

1.3 接種體制備和接種

各試驗(yàn)取上年采集保存的300粒稻曲球，裝入550 mL塑料瓶中，加入清水浸泡，反復(fù)振蕩至見(jiàn)穗粒露出為止。用2～3層紗布過(guò)濾，濾掉稻谷殘?jiān)推渌s質(zhì)，將含有厚垣孢子的懸浮液灌裝進(jìn)2.0 L“市下牌”噴霧器中，兌水到正常水位后到田間噴灑。噴灑階段每隔30～40 s時(shí)間晃動(dòng)1次噴霧裝置，使溶液中厚垣孢子均勻散開(kāi)（表3）。

1.4 對(duì)照區(qū)設(shè)置

各試驗(yàn)均設(shè)不接種（厚垣孢子液）、水稻全生育期不用藥、單用殺蟲(chóng)劑、選擇性用不同殺菌劑等處理為對(duì)照區(qū)。

1.5 調(diào)查方法

在接種稻曲病菌50 d后至收獲前，每區(qū)對(duì)角線選取3點(diǎn)，分別記載病穗數(shù)量、病穗病粒數(shù)和對(duì)應(yīng)級(jí)別，計(jì)算病穗率和病情指數(shù)。稻曲病病情分級(jí)采用標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)，未見(jiàn)稻曲球;1級(jí)，每穗1個(gè)稻曲球;2級(jí)，每穗2個(gè)稻曲球;3級(jí)，每穗3～5個(gè)稻曲球;4級(jí)，每穗6～9個(gè)稻曲球;5級(jí)，每穗10個(gè)以上稻曲球。

1.6 氣象數(shù)據(jù)

2015年、2018年和常年7月下旬至8月下旬平均氣溫、降水見(jiàn)表4。

2 結(jié)果與分析

接種稻曲病厚垣孢子液50 d后調(diào)查發(fā)現(xiàn)，接種區(qū)稻曲病發(fā)病明顯，其對(duì)照區(qū)病穗率、病情指數(shù)為0，均未發(fā)病，發(fā)病結(jié)果見(jiàn)表5。

3 結(jié)論與討論

上述2個(gè)年度3組試驗(yàn)區(qū)相鄰還種植有鹽稻1173、淮稻5號(hào)等20個(gè)抗稻瘟病監(jiān)測(cè)品種，從調(diào)查結(jié)果來(lái)看，非接種稻曲病孢子液區(qū)水稻稻曲病的發(fā)生率極低，說(shuō)明這2年綜合條件對(duì)稻曲病的自然發(fā)生極為不利。不采取措施， 在自然條件下田間鑒定不同水稻品種對(duì)稻曲病的抗性、殺菌劑對(duì)稻曲病的防控效果是不準(zhǔn)確的。但在特定水稻生育期（破口前20 d左右）噴灑含有稻曲病厚垣孢子的懸浮液，無(wú)需其他特別條件，即可引起水稻稻曲病的發(fā)生，即能在田間鑒定不同水稻品種對(duì)稻曲病的抗病水平和新殺菌劑對(duì)稻曲病的防控效果，可信度高。不需要強(qiáng)調(diào)分離病菌、培養(yǎng)菌株，也不必強(qiáng)求溫濕度條件控制和采用特殊的保存方式，一切順應(yīng)自然環(huán)境，常規(guī)操作即可。此接種方法操作簡(jiǎn)便、工作強(qiáng)度不大、勞力成本低廉，且準(zhǔn)確性、可靠性好，不會(huì)因噴霧接種影響水稻的正常生長(zhǎng)發(fā)育，是其他接種方法所不及的。

張君成等研究證實(shí)，利用稻曲病分生孢子與菌絲體混合液接種，可引起水稻稻曲病大發(fā)生，而接種當(dāng)年新鮮厚垣孢子，其發(fā)病率極低;利用上年保存于-20 ℃的厚垣孢子接種，不能引起稻田病害發(fā)生[7-8]。楊秀娟等研究證明，多種來(lái)源的厚垣孢子于水稻孕穗期接種多次也不能致使病害發(fā)生[9]。伏榮桃等研究證明，接種上年保存的稻曲病厚垣孢子，同樣不能引起病害發(fā)生[10]。王國(guó)良研究表明，在室內(nèi)26 ℃和在高濕條件下處理老熟稻曲病厚垣孢子20 d即可打破休眠，而田間抗性鑒定情況未見(jiàn)報(bào)道[11]。多位專家學(xué)者的研究表明，稻曲病厚垣孢子簡(jiǎn)便接種一般難以獲得成功，極大地制約了研究人員進(jìn)行水稻品種稻曲病的田間抗性鑒定。

筆者根據(jù)多年的研究和實(shí)踐，結(jié)合他人研究成果（厚垣孢子特性），在田間提前接種，可使稻曲病菌厚垣孢子在自然條件下解除休眠而萌發(fā)，產(chǎn)生分生孢子、菌絲于水稻孕穗破口適宜浸染期入侵，進(jìn)而促使稻曲病發(fā)生。筆者仍有疑慮的是，接種區(qū)發(fā)生稻曲病而相鄰小區(qū)未見(jiàn)發(fā)病，分生孢子和菌絲在自然環(huán)境中難道漂移50 cm的距離都沒(méi)有嗎，此試驗(yàn)過(guò)程中是否產(chǎn)生分生孢子和菌絲方可浸染，分生孢子和菌絲是否為浸染的必經(jīng)過(guò)程等，值得進(jìn)一步研究。

盡管已有研究表明，稻曲病菌產(chǎn)生的厚垣孢子是水稻發(fā)生稻曲病最重要的初侵染源[12]，但其浸染規(guī)律仍須進(jìn)一步研究。本研究介紹的接種方法，2017年在福建省農(nóng)科院試驗(yàn)田應(yīng)用未取得成功，其操作方法和影響因素值得進(jìn)一步研究。

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