桃芍醒腦膠囊對動物行為學(xué)及多巴胺系統(tǒng)的影響*

劉紅淼，楊繼章，李艷玲，張林彥

（1. 河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院，河北 石家莊 050031； 2. 石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)＜石家莊＞有限公司，河北 石家莊 050035）

精神分裂癥主要是由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)多巴胺（DA）功能亢進(jìn)所致，西藥治療精神疾病有一定療效，但不良反應(yīng)較多[1]，無法治愈。精神分裂癥屬中醫(yī)癲狂證范疇，嚴(yán)重影響患者的正常生活及工作，其病因、病機(jī)系氣滯血瘀、痰瘀互結(jié)所致。桃芍醒腦膠囊以經(jīng)典方“癲狂夢醒湯”為處方[2]，由赤芍、桃仁、柴胡、香附、青皮、陳皮、桑白皮、丹參、石菖蒲等組方，適應(yīng)證為治療氣血瘀滯、痰氣郁結(jié)、伴有瘀血內(nèi)阻所致的癲狂證，即精神分裂癥。本研究中參考文獻(xiàn)[3－4]考察了桃芍醒腦膠囊對動物行為學(xué)及腦組織中多巴胺含量的影響，進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，為該膠囊劑注冊醫(yī)院制劑奠定基礎(chǔ)。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

儀器：小鼠跳臺活動記錄儀（上海正宏電源儀器公司）；WGY－10 型熒光分光光度計(jì)（天津市港東科技發(fā)展有限公司）；GJ－1 型光電計(jì)數(shù)儀（天津醫(yī)療器械修配廠）。

試藥：桃芍醒腦膠囊（河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院自制，批號為20180901）；礞石滾痰丸（保定中藥制藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字Z13021937，批號為180512）；苯丙胺（Amp，國家麻醉藥品實(shí)驗(yàn)室）；阿樸嗎啡（Apo，美國Sigma 公司）。

動物：健康昆明種小鼠300 只，體質(zhì)量18 ～20 g，合格證號為1112511911001037 和1100111911013158，雌雄各半，由中國食品藥品檢定研究院提供；健康Wistar大 鼠 60 只，體 質(zhì) 量 140 ～160 g，合 格 證 號 為1100111911004367 和1100111911004675，雌雄各半，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供。飼養(yǎng)條件：SPF屏障系統(tǒng)，室內(nèi)溫度20 ～25 ℃，相對濕度40% ～70%，12 h／12 h 明暗交替照明，動物使用許可證號為SYXK（冀）2016－006。自由飲水，標(biāo)準(zhǔn)飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周。

1.2 方法

1.2.1 小鼠行為學(xué)

足底電刺激法引起的小鼠激怒行為[5]：選取雄性小鼠，將其放入跳臺活動記錄儀中，通50 V 交流電，觀察、選擇3 min 內(nèi)小鼠格斗次數(shù)不少于3 次者50 只，隨機(jī)分為空白對照組（等體積生理鹽水），陽性對照組（礞石滾痰丸2.0 g／kg），桃芍醒腦膠囊高、中、低劑量組（2.0，1.0，0.5 g／kg），各10 只。各組連續(xù)灌胃給藥10 d，末次給藥后45 min，觀察并記錄3 min 內(nèi)小鼠激怒打斗次數(shù)。

懸尾法引起的小鼠“失望”行為[5－6]：按小鼠6 min 內(nèi)不動時間隨機(jī)分組，組別及給藥劑量、給藥時間、給藥方法同上。末次給藥45 min 后，將小鼠尾部用膠布在臺架邊緣固定，頭懸掛向下，記錄累計(jì)6 min 內(nèi)小鼠不動時間。

小鼠平衡運(yùn)動實(shí)驗(yàn)[7]：將小鼠放在平衡棒上（棒長50 cm，直徑0.8 cm），選取在3 min 內(nèi)落下3 次以上的小鼠50 只，隨機(jī)分組，組別及給藥劑量、給藥時間、給藥方法同上。末次給藥45 min 后，觀察小鼠在平衡棒上的落下情況，并記錄小鼠在3 min 內(nèi)的落下次數(shù)。

1.2.2 多巴胺系統(tǒng)功能

對苯丙胺誘導(dǎo)的模型大鼠定型活動的影響[7]：取50 只大鼠，隨機(jī)分為5 組，各10 只，分別為空白對照組，陽性對照組（礞石滾痰丸1.2 g ／ kg），桃芍醒腦膠囊高、中、低劑量組（1.2，0.6，0.3 g／kg），連續(xù)灌胃給藥10 d。末次給藥45 min 后腹腔注射苯丙胺（5 mg／kg），觀察動物的定型活動，每隔10 min 按四級評分法標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行記分。1）動物無定型活動反應(yīng)，與生理鹽水的作用無區(qū)別的記為0 分；2）動物出現(xiàn)不連續(xù)地嗅，常伴有興奮活動癥狀的記為1 分；3）動物連續(xù)地嗅，頭稍有活動，伴有周期性興奮活動癥狀的記為2 分；4）動物連續(xù)地嗅和頭部活動，伴有不連續(xù)地咬、啃和舔的動作，并有短暫的活動期癥狀的記為3 分；5）動物連續(xù)地咬、啃和舔，無興奮活動期，有全身迅速移位癥狀的記為4 分。

對阿樸嗎啡誘導(dǎo)的攀爬模型的影響[7－8]：取50 只小鼠，隨機(jī)分為5 組，各10 只，分為空白對照組，陽性對照組（礞石滾痰丸2.0 g ／ kg），桃芍醒腦膠囊高、中、低劑量組（2.0，1.0，0.5 g／kg），連續(xù)灌胃給藥10 d，末次給藥45 min 后，皮下注射阿樸嗎啡（1.0 mg／kg），小鼠在鐵絲籠內(nèi)適應(yīng)環(huán)境15 min，記錄小鼠在3 min 內(nèi)攀爬落下次數(shù)。

對苯丙胺引起小鼠自主活動模型的影響[5]：取小鼠60 只，隨機(jī)分為空白對照組（灌胃給予等體積的生理鹽水），模型對照組（灌胃給予同體積的生理鹽水），陽性對照組（礞石滾痰丸2.0 g／kg），桃芍醒腦膠囊高、中、低劑量組（2.0，1.0，0.5 g／kg），共6 組，各10 只，連續(xù)給藥10 d。末次給藥45 min 后，除空白對照組外，其余5 組均腹腔注射苯丙胺（6 mg／kg），記錄小鼠在光電計(jì)數(shù)儀活動箱中的自主活動次數(shù)。

對小鼠腦組織中多巴胺含量的影響：在小鼠自發(fā)活動計(jì)數(shù)結(jié)束后，將模型對照組，陽性對照組，桃芍醒腦膠囊高、中、低劑量組小鼠斷頭處死，取小腦，加入預(yù)冷酸性正丁醇溶液中勻漿，混勻1 min，離心（1 500 r／min），取上清液，加入醋酸緩沖液，旋渦混合器上混勻1 min，離心5 min（1 500 r／min），取水相依次加入EDTA、碘試劑，混勻，靜置，加入堿性亞硫酸鈉（新配）、醋酸，煮沸10 min，冷卻，在激發(fā)波長326 nm、發(fā)射波長375 nm 處，采用熒光分光光度計(jì)測定熒光強(qiáng)度，并計(jì)算多巴胺含量[9]。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用One－way ANOVA 的LSD 法分析。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠行為學(xué)變化

與空白對照組相比，桃芍醒腦膠囊高劑量組和陽性對照組均可顯著抑制電刺激引起的小鼠激怒反應(yīng)（P ＜0.05），顯著延長小鼠“失望”不動時間（P ＜0.05）；桃芍醒腦膠囊低、中劑量組對小鼠激怒反應(yīng)均無明顯抑制作用（P ＞0.05），均有延長小鼠“失望”不動時間的趨勢，但無顯著差異（P ＞0.05）。小鼠平衡運(yùn)動實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對照組相比，桃芍醒腦膠囊中劑量組及陽性對照組均可顯著減少平衡落下次數(shù)（P ＜0.05），桃芍醒腦膠囊高、低劑量組的平衡落下次數(shù)有所減少，但均無顯著差異（P ＞0.05）。詳見表1。

表1 桃芍醒腦膠囊對模型小鼠行為學(xué)的影響（±s，n ＝10）

表1 桃芍醒腦膠囊對模型小鼠行為學(xué)的影響（±s，n ＝10）

注：與空白對照組比較，*P ＜0.05。

組別空白對照組陽性對照組桃芍醒腦膠囊低劑量組中劑量組高劑量組3 min 內(nèi)打斗次數(shù)（次）5.2±1.5 2.5±1.3*3.6±1.4 3.5±1.7 2.7±1.7*6 min 內(nèi)“失望”不動時間（min）1.8±0.7 2.9±0.9*1.9±0.8 2.0±0.7 2.8±0.8*3 min 內(nèi)平衡落下次數(shù)（次）3.0±1.5 1.7±1.3*2.6±1.7 1.6±0.7*2.5±1.6

2.2 多巴胺系統(tǒng)功能影響

與空白對照組相比，桃芍醒腦膠囊高劑量組與陽性對照組均可顯著減少大鼠定型活動次數(shù)（P ＜0.05），可顯著減少小鼠的攀爬落下次數(shù)（P ＜0.05）；桃芍醒腦膠囊中、低劑量組均未顯著減少定型活動次數(shù)（P ＞0.05）和攀爬落下次數(shù)（P ＞0.05）；模型對照組小鼠的自主活動次數(shù)顯著增加（P ＜0.05）。與模型對照組相比，桃芍醒腦膠囊高、中、低3 個劑量組均可對抗苯丙胺引起小鼠的興奮作用而減少小鼠的自發(fā)活動次數(shù)，其中桃芍醒腦膠囊高劑量組及陽性對照組均有顯著差異（P ＜0.05），桃芍醒腦膠囊中、低劑量組均無顯著差異（P ＞0.05）；桃芍醒腦膠囊中劑量組和陽性對照組均可顯著降低小鼠腦組織中多巴胺含量（P ＜0.05），桃芍醒腦膠囊高、低劑量組多巴胺含量均無顯著改變（P ＞0.05）。詳見表2。

3 討論

給予實(shí)驗(yàn)動物多巴胺釋放劑苯丙胺，可促進(jìn)胞漿中的多巴胺釋放，且多巴胺受體激動劑阿樸嗎啡可直接激動雙側(cè)的多巴胺受體，均可使動物出現(xiàn)反復(fù)、刻板的行為，如大鼠出現(xiàn)不停地嗅、舔、咬及運(yùn)動增多的定型活動。本研究結(jié)果顯示，桃芍醒腦膠囊能減少小鼠電刺激激怒后的打斗次數(shù)，提高身體協(xié)調(diào)平衡能力，延長小鼠“失望”不動時間，改善模型動物行為學(xué)；并可減少小鼠的攀爬落下次數(shù)，改善大鼠定型活動評分，減少苯丙胺引起的小鼠自主活動次數(shù)，降低小鼠腦組織中多巴胺含量，表明桃芍醒腦膠囊可抑制多巴胺功能亢進(jìn)。

表2 桃芍醒腦膠囊對動物多巴胺系統(tǒng)功能的影響（±s，n ＝10）

表2 桃芍醒腦膠囊對動物多巴胺系統(tǒng)功能的影響（±s，n ＝10）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05；與模型對照組比較，＃P＜0.05。

組別多巴胺（μg／g）空白對照組模型對照組陽性對照組桃芍醒腦膠囊低劑量組中劑量組高劑量組大鼠定型活動評分（分）2.7±0.8 3 min 攀爬落下次數(shù)（分）58.4±20.7 1.5±1.3*1.9±1.4 1.6±1.1 1.5±0.9*39.2±21.5*45.9±25.6 42.9±24.7 37.7±23.2*小鼠自主活動次數(shù)（分）501.8±149.7 796.3±322.5*483.4±292.3＃651.8±338.7 539.7±365.2 488.6±283.4＃4.6±3.0 1.9±1.2＃2.9±1.7 1.8±1.9＃1.9±2.9

在小鼠平衡運(yùn)動和多巴胺含量測定實(shí)驗(yàn)中，桃芍醒腦膠囊中、高劑量組未出現(xiàn)量效關(guān)系，考慮原因可能是桃芍醒腦膠囊具有中藥制劑普遍存在日服用劑量大的特點(diǎn)，動物實(shí)驗(yàn)給藥時不易達(dá)到所需濃度所致。本研究中，小鼠和大鼠的給藥劑量均由臨床推薦劑量折算，高、中、低劑量為2 倍關(guān)系，若劑量倍數(shù)加大，濃度較大，會給灌胃器給藥帶來困難，故設(shè)倍數(shù)跨度為2 倍，可能是造成量效關(guān)系不明顯的原因。

綜上所述，桃芍醒腦膠囊具有鎮(zhèn)靜、安定作用，可抑制多巴胺系統(tǒng)功能亢進(jìn)，有利于對抗精神分裂癥的中樞神經(jīng)系統(tǒng)多巴胺功能。