2種培養(yǎng)基對乳粉中沙門氏菌的定量檢測比較

程瀟 劉娟娟 賈貞 徐晨 安虹

摘要 為了掌握食品中沙門氏菌的定量檢測方法，對比不同種類培養(yǎng)基對食品中沙門氏菌定量檢驗(yàn)結(jié)果的差異，參考國家權(quán)威部門提供的乳粉中沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值實(shí)施方案及GB 4789.4-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》的要求對3份沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品進(jìn)行沙門氏菌的定量檢測。結(jié)果顯示，使用XLD培養(yǎng)基和沙門顯色培養(yǎng)基，在沒有其他干擾菌的情況下，均可對沙門氏菌進(jìn)行有效的計(jì)數(shù)。

關(guān)鍵詞 沙門氏菌;定量檢測;XLD培養(yǎng)基;沙門顯色培養(yǎng)基

中圖分類號：TS252.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號：2095-3305（2020）02-121-03

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2020.02.048

Comparison of Quantitative Detection of Salmo-nella in Milk Powder by using Two Kinds of Medium

CHENG Xiao? et al（Anhui Provincial Institute for Food and Drug Control，China National Center for Quality Supervision and Test of Agricultural-Avocation Processed Food，Hefei，Anhui 230051）

Abstract In order to master the quantitative detection method of Salmonella in food and compare the results of different kinds of culture media for the quantitative detection of Salmonella in food，refer to the implementation plan of the value determination of Salmonella in milk powder provided by the national authority and GB 4789.4-2016 National Food Safety Standard-Food Microbiological Examination：Salmonella，three samples of reference materials of Salmonella were detected quantitatively. The results showed that using XLD medium and Salmonella chromogenic medium could count Salmonella effectively without other interfering bacteria.

Key words? ?Salmonella;Quantitative detection; XLD medium; Salmonella chromogenic medium

沙門氏菌是一種無芽孢、無莢膜、需氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性菌，易存在于家禽、肉及蛋等食品中，是食品中分布比較廣、危害程度嚴(yán)重的食源性致病微生物，可以引起惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉及發(fā)熱等疾病[1]。由于沙門氏菌具有種類繁多、對外界抵抗力較強(qiáng)、對營養(yǎng)要求不高等特點(diǎn)，導(dǎo)致沙門氏菌成為引起食物中毒的主要致病菌，所以檢驗(yàn)食品中的沙門氏菌對保障人民身體健康具有重要意義。

沙門氏菌的檢測有多種方法，目前我國主要采用國家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.4《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》對食品中的沙門氏菌進(jìn)行檢驗(yàn)，此外還頒布有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)和團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)等其他檢測標(biāo)準(zhǔn)，基本上這些方法都是對沙門氏菌進(jìn)行定性檢測。筆者主要通過對3份沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品進(jìn)行定量檢測并對結(jié)果進(jìn)行分析，為食品中沙門氏菌的定量分析提供一定依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

沙門氏菌的定量檢測樣品為國家權(quán)威部門提供的3份標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)樣品。

1.2 試劑與儀器

木糖耐氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD）、磷酸鹽緩沖液（PBS）、營養(yǎng)瓊脂、沙門氏菌干制生化鑒定試劑盒均使用北京陸橋技術(shù)股份有限公司產(chǎn)品;沙門顯色培養(yǎng)基使用法國科瑪嘉產(chǎn)品，沙門氏菌屬診斷O及H血清使用寧波天潤生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，所有試劑均為筆者所在實(shí)驗(yàn)室合格供應(yīng)方提供并在有效期內(nèi)。

移液器 Eppendorf research plus（德國Eppendorf公司）、MSC1.8型生物安全柜（賽默飛世爾科技有限公司）、 恒溫培養(yǎng)箱（德國賓得）、5050型全自動(dòng)高壓蒸汽滅菌鍋（以色列騰氏公司）。

1.3 檢測方法

檢驗(yàn)方法主要依據(jù)沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值實(shí)施方案以及GB 4789.4-2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》的要求進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 使用XLD培養(yǎng)基進(jìn)行接種檢驗(yàn)結(jié)果

分別將1號、2號、3號3份樣品按照實(shí)施方案的要求從-20℃冰箱中取出，在22℃的環(huán)境下平衡30 min，接著在生物安全柜中用4.5 ml無菌蒸餾水進(jìn)行復(fù)溶并用漩渦振蕩器充分振蕩后制備成1∶10樣品勻液，再用移液器吸取1∶10樣品勻液1 ml，緩慢注入盛有9 ml無菌稀釋液中制成1∶100樣品勻液，繼續(xù)使用此種方法制成1∶1 000稀釋梯度樣品勻液。每個(gè)稀釋梯度分別吸取1 ml樣品勻液以0.3、0.3、0.4 ml接種量加入3塊XLD平板后，用一次性無菌L型涂布棒進(jìn)行涂布，每份樣品各接種3次重復(fù)，同時(shí)取1 ml稀釋液以0.3、0.3、0.4 ml接種量加入3塊XLD平板做空白對照。接種后分別按要求將平板倒置于36℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果（圖1為部分結(jié)果）。從圖1可以看出，使用XLD平板進(jìn)行涂布可以對沙門氏菌進(jìn)行有效的分離。

2.2 使用XLD培養(yǎng)基進(jìn)行接種的計(jì)數(shù)結(jié)果分析

選擇在同一稀釋度3塊平板，并將所有典型菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，之后隨機(jī)挑選10個(gè)特征菌落，進(jìn)行生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定。結(jié)果確認(rèn)后，對沙門氏菌菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)（表1～3）。

結(jié)果表明，3份樣品在1∶10和1∶100 2種稀釋度的情況下存在明顯的梯度差異，并且3次平行結(jié)果表現(xiàn)出很好的重復(fù)性，但是在1∶1 000的稀釋度下，由于稀釋度太低，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)較大的偏差。

2.3 使用沙門顯色培養(yǎng)基進(jìn)行接種檢驗(yàn)結(jié)果

使用“2.1”中制備的1∶100、1∶1 000 2種樣品勻液（由于樣品量原因1∶10樣品勻液未進(jìn)行沙門顯色培養(yǎng)基的接種），分別吸取1 ml樣品勻液以0.3、0.3、0.4 ml接種量加入3塊沙門顯色平板后，用一次性無菌L型涂布棒進(jìn)行涂布，每份樣品各接種3次重復(fù)，同時(shí)取1 ml稀釋液以0.3、0.3、0.4 ml接種量加入3塊沙門顯色平板做空白對照。接種后分別按要求將平板倒置于36℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果（圖2為部分結(jié)果）。從圖2可以看出，使用沙門顯色平板進(jìn)行涂布可以對沙門氏菌進(jìn)行有效的分離，且由于沙門氏菌在沙門顯色培養(yǎng)基上為淡紫色菌落，而其他非沙門氏菌在沙門顯色培養(yǎng)基上為藍(lán)色或無色菌落，所以使用沙門顯色培養(yǎng)基可以得到更加直觀的結(jié)果。

2.4 使用沙門顯色培養(yǎng)基進(jìn)行接種的計(jì)數(shù)結(jié)果分析

選擇在同一稀釋度3塊平板，并將所有典型菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，之后隨機(jī)挑選10個(gè)特征菌落，進(jìn)行生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定。結(jié)果確認(rèn)后，對沙門氏菌菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)（表4～6）。

結(jié)果表明，3份樣品在1∶10和1∶100 2種稀釋度的情況下存在明顯的梯度差異，且3次平行結(jié)果重復(fù)性好，同樣在1∶1 000的稀釋度下，由于稀釋度太低，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)一定的偏差。

3 討論

目前，由于國標(biāo)中未見對食品中沙門氏菌的定量檢測有要求，所以現(xiàn)行的食品中沙門氏菌的檢測方法都是基于定性的檢測方法，這樣在一定程度上就沒有辦法充分了解食品受到沙門氏菌污染的程度狀況。

試驗(yàn)結(jié)果表明，此次標(biāo)準(zhǔn)樣品中沙門氏菌的濃度在103～104范圍內(nèi)，使用XLD平板和沙門顯色平板的檢測結(jié)果基本一致。由于試驗(yàn)中使用的是疏水性的一次性涂布棒，且每毫升菌液的涂布只使用1根涂布棒，所以因涂布棒造成的損失比較小，結(jié)果更加接近理論值。此外，此次提供的樣本中基本沒有其他雜菌的干擾，所以在結(jié)果的判定上比較直觀，然而在日常的檢測過程中，由于樣品中可能存在著各種類型的雜菌，這時(shí)如果采用沙門顯色平板進(jìn)行涂布分離，可以通過顏色的區(qū)別直接觀察結(jié)果，相對于使用XLD平板進(jìn)行計(jì)數(shù)可能會(huì)更加簡單，但是有研究表明部分假單胞菌在沙門顯色培養(yǎng)基上存在和沙門氏菌同樣的表現(xiàn)形態(tài)[2]，所以在進(jìn)行沙門氏菌定量檢測時(shí)最好選擇多種方法，這樣可以最大程度地避免漏檢的可能。此外，王曉英等[3]研究表明在食物中雜菌污染嚴(yán)重或沙門菌水平較低的情況下，平板法不能準(zhǔn)確進(jìn)行沙門菌計(jì)數(shù)，選擇MPN方法進(jìn)行定量檢測更加準(zhǔn)確，所以在檢測過程中需要對不同來源的食品提前預(yù)估被污染的情況，從而選擇合適的方法以及合理的稀釋度對沙門氏菌進(jìn)行定量檢測分析。

該次試驗(yàn)表明，在沒有其他干擾菌的情況下，無論使用XLD培養(yǎng)基還是沙門顯色培養(yǎng)基，都可以對沙門氏菌進(jìn)行有效的分離計(jì)數(shù)。

參考文獻(xiàn)

[1] B-UMLER A J，HARGIS B M，TSOLIS R M. Tracing the origins of Salmonella out-breaks[J]，Science，2000（287）：50.

[2] 王萍，董貴軍，喬勇升，等.顯色培養(yǎng)基上沙門氏菌及干擾菌的分離鑒定[J].食品研究與開發(fā)，2017，38（12）：158-161.

[3] 王曉英，余東敏，劉秀梅.涂布平板計(jì)數(shù)法與MPN法定量檢測禽肉和蛋中沙門菌的比較[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2005，17（2）：106-108.

責(zé)任編輯：鄭丹丹