免疫熒光法在呼吸道病毒快速檢驗(yàn)中的應(yīng)用

萬(wàn)紅　王曄　關(guān)碩碩

【摘 要】目的：對(duì)免疫熒光法在呼吸道病毒快速檢驗(yàn)過(guò)程中的應(yīng)用效果進(jìn)行分析。方法：對(duì)來(lái)我院呼吸科進(jìn)行就診的呼吸道感染患者進(jìn)行分析，篩選符合要求的患者155例，使用病毒熒光檢測(cè)試劑盒快速檢驗(yàn)鼻咽分泌物標(biāo)本。結(jié)果：在患者當(dāng)中出現(xiàn)了病毒感染陽(yáng)性人數(shù)為142例，其中，出現(xiàn)副流感病毒I型、II型、III型的病例達(dá)到了4.93%、8.45%、5.63%，而流感病毒A、流感病毒B所占的比例分別達(dá)到了22.54%和15.49%，呼吸道合胞病毒的人所占的比例達(dá)到了14.79%，腺病毒所占的比例達(dá)到了28.17%。結(jié)論：通過(guò)免疫熒光法進(jìn)行呼吸道病毒快速檢驗(yàn)，具有較好的效果，可以推廣使用。

【關(guān)鍵詞】免疫熒光法;呼吸道病毒;快速檢驗(yàn)

【中圖分類號(hào)】R446【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-0019（2020）09--02

在實(shí)踐的過(guò)程中，對(duì)呼吸道病毒進(jìn)行檢測(cè)的方法多種多樣，比如說(shuō)病毒分離培養(yǎng)、電鏡檢測(cè)病毒顆粒及免疫熒光法等。在實(shí)際操作的過(guò)程中，免疫熒光法主要使用患者的免疫熒光抗體或者血清等，在操作的過(guò)程中選材非常方便，而且能夠有效的對(duì)病人進(jìn)行鑒別，消耗的人力、物力相對(duì)較少，因此獲得了廣泛的使用。本文具體對(duì)收治的155例患者為基礎(chǔ)，分析免疫熒光法在呼吸道病毒快速檢驗(yàn)過(guò)程中的具體操作以及應(yīng)用，以供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對(duì)來(lái)我院呼吸科進(jìn)行就診的呼吸道感染患者進(jìn)行分析，了解他們的資料，篩選符合要求的的患者，選擇符合要求的155例患者，使用病毒熒光檢測(cè)試劑盒快速檢驗(yàn)鼻咽分泌物標(biāo)本。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)試劑 主要使用7項(xiàng)病毒熒光檢測(cè)試劑盒，主要有單克隆抗體試劑和熒光標(biāo)志抗體試劑盒等，在檢測(cè)的過(guò)程中能夠?qū)α鞲胁《続、流感病毒B，呼吸道合胞病毒、腺病毒等病毒進(jìn)行有效的檢測(cè)，另外還能對(duì)副流感病毒I型、副流感病毒II型、副流感病毒III型進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 檢測(cè)方法 在收集和處理標(biāo)本的過(guò)程中，首先收集耳、鼻、喉位置的分泌物，主要使用負(fù)壓吸引器進(jìn)行收集，放置在無(wú)菌生理鹽水當(dāng)中。與此同時(shí)在收集的過(guò)程中一定要反復(fù)的捶打分泌物，將其放置到離心管當(dāng)中，在離心管當(dāng)中進(jìn)行離心操作，離心操作時(shí)速度控制在每分鐘500轉(zhuǎn)，另外需要在此轉(zhuǎn)速下控制9分鐘時(shí)間，進(jìn)一步去除上清液，通過(guò)磷酸鹽緩沖液進(jìn)行進(jìn)一步的操作，重復(fù)離心的步驟，去除上層清液，直到上層清液不再粘稠。另外在離心工作完成之后，需要將沉淀放置在磷酸鹽緩沖液當(dāng)中，逐步產(chǎn)生細(xì)胞懸液，在載玻片觀察孔當(dāng)中進(jìn)行病原體的放置，完成風(fēng)干和固定工作。

1.2.3 熒光染色 將20微升的劑量的熒光抗體向樣孔細(xì)胞當(dāng)中滴入，并且在保濕盒當(dāng)中進(jìn)行進(jìn)一步的培育，控制時(shí)間在25分鐘左右，另外使用磷酸鹽緩沖劑多次洗滌播種細(xì)胞，接著使用蒸餾水進(jìn)行洗滌，在完成風(fēng)干之后，在封片上進(jìn)行封固液滴加，蓋上蓋玻片，通過(guò)熒光顯微計(jì)進(jìn)行后續(xù)的觀察。

1.3 診斷原理和判斷依據(jù)

在實(shí)驗(yàn)測(cè)試的過(guò)程中，如果已經(jīng)被熒光標(biāo)志的抗體和對(duì)應(yīng)抗原之間進(jìn)行結(jié)合，則能夠在反應(yīng)后出現(xiàn)復(fù)合物，通過(guò)熒光顯微鏡能夠進(jìn)一步觀察到出現(xiàn)的綠色熒光。所以，如果產(chǎn)生了綠色的熒光，則可以認(rèn)為檢測(cè)值為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

在患者當(dāng)中出現(xiàn)了病毒感染陽(yáng)性人數(shù)為142例，其中，出現(xiàn)副流感病毒I型、II型、III型的病例達(dá)到了4.93%、8.45%、5.63%，而流感病毒A、流感病毒B所占的比例分別達(dá)到了22.54%和15.49%，呼吸道合胞病毒的人所占的比例達(dá)到了14.79%，腺病毒所占的比例達(dá)到了28.17%，具體如下表所示。

3 討論

如果要通過(guò)常規(guī)方式對(duì)微生物進(jìn)行檢查，主要使用的是多層面綜合指標(biāo)，一些常規(guī)檢驗(yàn)雖然可以通過(guò)生物反應(yīng)來(lái)對(duì)部分非病原微生物進(jìn)行排除，但是這種非病原微生物形態(tài)方面和病原微生物比較接近，很容易在實(shí)踐的過(guò)程中出現(xiàn)混淆，所以一定要注意加強(qiáng)快速分離，利用試驗(yàn)的時(shí)候添加別的判定指標(biāo)來(lái)進(jìn)行后續(xù)的判斷工作。

在臨床上，免疫熒光檢測(cè)是非常常見(jiàn)的，逐步開(kāi)始向機(jī)械化、自動(dòng)化的方面發(fā)展，可以通過(guò)脈沖激光光源微型電腦等結(jié)合的方式做出進(jìn)一步的檢測(cè)，由于熒光抗體不會(huì)導(dǎo)致其生長(zhǎng)繁殖受到限制和影響。在一段時(shí)間的孵育之后，除了需要進(jìn)行判定其特性之外，還需要選用熒光菌球來(lái)進(jìn)行后續(xù)的鑒定。然而，在實(shí)踐的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)免疫熒光定量分析往往較為薄弱，如果只是通過(guò)目測(cè)，對(duì)其特異性熒光進(jìn)行評(píng)估往往會(huì)出現(xiàn)偏差，主要使用熒光顯微鏡來(lái)自動(dòng)掃描免疫熒光標(biāo)本，速度控制在每秒400步，距離控制在0.25步。另外熒光信息可以通過(guò)光電倍增管來(lái)進(jìn)一步放大，這樣可以將相關(guān)圖像送入到圖像識(shí)別器當(dāng)中，判斷測(cè)定其參數(shù)，了解微粒的圖形、周長(zhǎng)、熒光長(zhǎng)度等。在研究的過(guò)程中通過(guò)免疫熒光法來(lái)進(jìn)一步檢測(cè)上呼吸道感染患者的分泌物，并且提取相關(guān)細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)的細(xì)胞標(biāo)本和抗體的匹配抗原抗體反應(yīng)，來(lái)對(duì)后續(xù)的病毒種類進(jìn)行辨別。在操作的過(guò)程中結(jié)果非?？焖?，而且準(zhǔn)確性較高，一般情況下這種方式只需要兩個(gè)小時(shí)就能通過(guò)試劑盒或者熒光顯微鏡等快速鑒別病毒種類，在操作過(guò)程中相對(duì)較為簡(jiǎn)單，而且價(jià)格低廉。

總而言之，加快免疫熒光技術(shù)在微生物的快速檢驗(yàn)具有非常重要的意義，和傳統(tǒng)形式相比，該技術(shù)相對(duì)較為成熟，而且應(yīng)用價(jià)值較高，值得進(jìn)行推廣和使用。

參考文獻(xiàn)

潘秀軍， 呂婕， 沈立松.直接免疫熒光法同時(shí)檢測(cè)兒童多種呼吸道病毒抗原的臨床應(yīng)用[J].放射免疫學(xué)雜志， 2009， 22（3）：267-270.

劉鳳霞.快速檢測(cè)在成人呼吸道病毒及非典型病原體檢測(cè)中的應(yīng)用效果[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生， 2015， ;53（22）：113-115.

朱順新， 潘麗華， 曾才秀，等.直接免疫熒光法在多種呼吸道病毒抗原檢測(cè)中的應(yīng)用[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志， 2015（14）：2307-2309.

趙雅 ，劉小濱 ，王林 .九項(xiàng)呼吸道病原體抗體IgM聯(lián)合檢測(cè)在呼吸道感染疾病中的臨床應(yīng)用[C]// 第九屆中國(guó)臨床微生物學(xué)大會(huì)暨微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇論文集.2018.