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    依非韋倫和齊多夫定檢測方法進(jìn)展

    2020-05-18 07:03:48楊浩冉
    生物化工 2020年2期
    關(guān)鍵詞:多夫定量血漿

    楊浩冉

    (兒童發(fā)展與學(xué)習(xí)科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,東南大學(xué) 生物科學(xué)與醫(yī)學(xué)工程學(xué)院,江蘇南京 210096)

    截至2018年底,我國報告的現(xiàn)存活艾滋病病毒(HIV)感染者/病人86萬例,其中,2018年新發(fā)現(xiàn)14.9萬例,死亡3.8萬例,平均每小時新發(fā)現(xiàn)17例[1]。針對這一嚴(yán)峻現(xiàn)狀,我國采用多種藥物聯(lián)合用藥的高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法,以降低HIV感染者和艾滋病者的發(fā)病率和死亡率。越來越多的證據(jù)表明,抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法的依從性對抑制病毒、提高生存率和生活質(zhì)量有著重要的作用。在實(shí)際治療過程中,藥物不良反應(yīng)、服藥困難、社會歧視等許多因素都會影響患者的依從性,無法達(dá)到最佳療效。目前,可以通過檢測不同生物基質(zhì)中抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物的濃度,來評估患者服藥依從性,從而達(dá)到改善治療效果的目的。依非韋倫和齊多夫定是中國一線治療方案中的主要抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物,現(xiàn)有一些研究已經(jīng)建立了依非韋倫和齊多夫定藥物濃度準(zhǔn)確定量的方法。但由于它們選擇的生物基質(zhì)以及依托的檢測技術(shù)不同,各有優(yōu)缺點(diǎn)。本文將從生物基質(zhì)的選取和檢測技術(shù)兩個角度出發(fā),依非韋倫和齊多夫定不同檢測方法的優(yōu)點(diǎn)和不足,為其他抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物濃度的定量研究提供參考。

    1 生物樣品

    選擇生物樣品是藥物濃度檢測研究中重要的環(huán)節(jié),與實(shí)驗(yàn)?zāi)康南嗥ヅ涞纳飿悠犯欣谘芯康拈_展。通過查閱文獻(xiàn),發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有研究已選擇多種生物樣品進(jìn)行依非韋倫和齊多夫定藥物濃度水平的定量檢測?;仡櫖F(xiàn)有研究,發(fā)現(xiàn)選擇的生物樣品可以分為兩大類,一類是液體樣本(以血漿為代表),另一類是固體樣本(以頭發(fā)為代表)。由于血漿中依非韋倫和齊多夫定濃度較高,因此對儀器檢測要求低。但是血漿的采集復(fù)雜,屬于侵入性采集,儲存成本高。血樣藥物濃度反映的是藥物短時間內(nèi)的濃度變化。而頭發(fā)中藥物濃度較低,故對檢測技術(shù)要求高。但頭發(fā)樣品的采集較為簡單,屬于無創(chuàng)采集,且易于儲存。頭發(fā)藥物濃度反映的是藥物長期的濃度變化。因此,從研究目的來看,如果監(jiān)測短時間藥物濃度和服藥依從性,應(yīng)該選用血漿作為生物樣本;如果監(jiān)測長時間藥物濃度和服藥依從性,應(yīng)該選用頭發(fā)作為生物樣本。

    2 檢測技術(shù)

    目前廣泛應(yīng)用于依非韋倫和齊多夫定分析檢測的方法有液相色譜-紫外法(LC-UV)、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS)、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)等。表1展示了不同生物樣品中的依非韋倫和齊多夫定檢測方法的一些重要參數(shù),本文通過比較各種檢測方法的方法驗(yàn)證參數(shù),分析他們的優(yōu)點(diǎn)和不足。

    液相色譜-紫外法可以可以快速分離待測物,再通過待測物質(zhì)對于紫外光的不同吸收波長來測定待測物質(zhì)成分從而達(dá)到定量的目的。許多研究者已經(jīng)將液相色譜-紫外法用于多種待測物的定量分析。由于血漿中藥物濃度水平較高,李燕青等[2]曾采用LC-UV在波長268nm處測定血漿中齊多夫定含量,定量限為50 ng/mL。Nitin等人[3]在血漿中建立了檢測血漿中依非韋倫的LC-UV方法,該方法下檢測依非韋倫定量限為50 ng/mL。液相色譜-紫外法對實(shí)驗(yàn)室的檢測設(shè)備要求較低,操作相對容易上手,檢測的精確度和準(zhǔn)確度較好,但是該方法下定量限比較高,不適合檢測一些殘留濃度較低的生物樣本。

    氣相色譜法是指用氣體作為流動相的色譜法,由于樣品在氣相中傳遞速度快,所以樣品組分在流動相和固定相之間可以瞬間達(dá)到平衡,質(zhì)譜檢測器具有高靈敏選擇性。氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法可將氣相色譜的高效分離能力與質(zhì)譜獨(dú)特的生物靈敏選擇性相結(jié)合,早期常被用來準(zhǔn)確定量血漿中藥物濃度。Patrick等人[4]對人血漿中的依非韋倫和其他藥物進(jìn)行氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測,該方法下依非韋倫的定量限是72 ng/mL,與其他方法相比,定量限較高。GC-MS與LC-UV相比,能夠減少雜峰干擾,同時該方法也具有較好的靈敏度和選擇性。存在的不足之處就是,該方法下部分待測物衍生化過程比較復(fù)雜,定量限也較高。

    由于質(zhì)譜和色譜靈敏度相當(dāng),且色譜可以作為質(zhì)譜的進(jìn)樣系統(tǒng),質(zhì)譜可以作為色譜的檢測儀器,具有分離效果好、響應(yīng)速度快、應(yīng)用領(lǐng)域廣等優(yōu)點(diǎn)。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法成為目前用于定量微量級有機(jī)混合物的最好方法。由于該方法的檢測限較低,所以無論是血漿還是頭發(fā)中,都可選擇LC-MS/MS作為同時檢測的分析方法。張麗軍等人[5]和Valluru等[6]分別建立了血漿中齊多夫定和其他藥物的LC-MS/MS檢測方法,該方法下定量限分別為25 ng/mL和5 ng/mL,回收率也符合檢測標(biāo)準(zhǔn)。Hélène等人[7]建立了檢測血漿中依非韋倫和其他藥物的LC-MS/MS方法,該方法下依非韋倫的定量限為5 ng/mL。盡管頭發(fā)中藥物濃度較低,Chu等人[8]利用LC-MS/MS方法同時準(zhǔn)確定量10mg頭發(fā)中依非韋倫和齊多夫定濃度,該方法下依非韋倫的定量限為36 pg/mg,齊多夫定的定量限為16 pg/mg。此外,Jenna等人[9]建立了0.2mg頭發(fā)中齊多夫定和其他藥物濃度的LC-MS/MS方法,實(shí)現(xiàn)了在更少發(fā)量中的齊多夫定的定量檢測,說明液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法具有高的靈敏度和高特異性。LC-MS/MS表現(xiàn)出較好的檢測性能,因此目前被廣泛用于生物樣品中抗HIV藥物濃度的研究。然而,質(zhì)譜儀目前采購成本和維護(hù)成本均比較昂貴,還沒有在實(shí)驗(yàn)室普及。

    3 結(jié)語

    以上關(guān)于依非韋倫和齊多夫定含量檢測的研究,可以發(fā)現(xiàn)生物樣本的選取在早期以血漿樣本為主,而目前多種生物樣本被共同用于藥物檢測研究,進(jìn)一步來評價服藥依從性。深層次的原因是檢測技術(shù)的發(fā)展,由于早期檢測的定量限較高,研究人員只能選擇藥物濃度較高的血漿作為生物樣本,來評價患者短期的服藥依從性。隨著科技的進(jìn)步,檢測技術(shù)也得到進(jìn)一步提高,以LC-MS/MS方法為代表的檢測技術(shù)降低了儀器檢測的定量限,從而使得研究人員能夠在更多的生物樣本中探究藥物濃度變化。頭發(fā)作為新型生物樣本,由于其自身的無創(chuàng)采集和可反映患者長期服藥情況的優(yōu)點(diǎn),目前被逐漸選作生物樣品用于藥物濃度研究,來評價患者的長期依從性,以此來使患者獲得更好的治療效果。

    表1 生物樣品中依非韋倫和齊多夫定檢測的方法參數(shù)

    本文對于國內(nèi)外依非韋倫和齊多夫定定量檢測方法的研究進(jìn)行了梳理,從生物樣本和檢測技術(shù)兩個方面進(jìn)行比較,闡述了各個選擇的優(yōu)點(diǎn)和不足,為后續(xù)藥物濃度水平檢測研究提供了借鑒。

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