穿心蓮有效成分的提取與分離研究

馬超，楊靜

（南充市林業(yè)科學(xué)研究所，四川南充 637000）

傳統(tǒng)中藥穿心蓮為爵床科穿心蓮屬植物穿心蓮（Andrographis paniculata Nees）的干燥地上部分，具有清熱解毒、涼血、消腫等作用，用于感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、口舌生瘡、泄瀉痢疾、熱淋澀痛、癰腫瘡?fù)春投旧咭萚1-2]。穿心蓮內(nèi)酯在臨床試用于上呼吸道炎癥和細(xì)菌痢疾療效較好，且副作用較小，是目前抗菌、抗炎、抗鉤端螺旋體的良藥。穿心蓮的主要成分為多種內(nèi)酯類化合物，統(tǒng)稱為穿心蓮總內(nèi)酯?，F(xiàn)在市面上的穿心蓮片多為穿心蓮植物的浸膏所制。

穿心蓮內(nèi)酯的提取方法多種多樣，主要有水提、堿水提和醇提。水提成本較低，但有效成分含量也較低；堿水提操作不當(dāng)極有可能使有效成分變性，因?yàn)榇┬纳徔們?nèi)酯不耐酸堿性；醇提取有效成分含量高，但提取成本高。綜合比較后，進(jìn)一步研究醇提工藝有更加長(zhǎng)遠(yuǎn)的意義[3-8]。

在穿心蓮總內(nèi)酯的分離過程中，可采用液相色譜（HPLC）、高速逆流色譜（HSCCC）、薄層色譜（TLCS）和柱色譜法等。經(jīng)典的硅膠柱色譜分離效能不如HPLC和HSCCC高，但是其操作簡(jiǎn)單，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的要求不高，分離成本相對(duì)較低，且一次性上樣量較大。因此，對(duì)其分離條件和溶劑進(jìn)行探討，并用于穿心蓮內(nèi)酯的粗分離具有廣闊的應(yīng)用前景[9-10]。

1 材料與方法

1.1 儀器及設(shè)備

RE-3000A新型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海市旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀廠家；SHB—Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，北京科偉永興儀器有限公司。

帶活塞20 L廣口瓶、與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀磨口配套的250 mL圓底燒瓶、1000 mL燒杯、橡膠管、抽濾瓶、布氏漏斗、抽濾紙、150 mL錐形瓶、薄層層析缸、硅膠板、點(diǎn)樣毛細(xì)管、鉛筆、小廣口瓶、電熱帽、鑷子、脫脂棉、鐵架臺(tái)、玻璃棒。

1.2 藥品

穿心蓮植物干燥地上部分5 kg；活性炭為分析純，由康宏碳業(yè)提供；碘晶體、200～300目硅膠、丙酮、環(huán)己烷、甲苯、甲醇、氯仿、乙醇（95%）、乙醚、乙酸乙酯、乙丙醇、異戊醇、正丁醇和正己烷均為分析純，由成都市科隆化工試劑廠提供。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 穿心蓮總內(nèi)酯的提取

取穿心蓮地上部分2.5 kg切成小段后，用95%乙醇）分兩次在常溫下浸泡，每次1天，合并提取液備用。將提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至1 L時(shí)，用活性炭脫色去膠質(zhì)，用真空抽濾法將活性炭溶液分離。取溶液繼續(xù)濃縮至小體積且無晶體析出。

1.3.2 尋找總內(nèi)酯各組分粗分離合適的展開劑

取濃縮提取液進(jìn)行薄層層析：首先將硅膠板用玻璃刀切成適當(dāng)寬度，畫上相同寬度的點(diǎn)樣線和溶劑層析底線。

在點(diǎn)樣線上用點(diǎn)樣毛細(xì)管點(diǎn)上少量且相同的提取樣本，分別用丙酮、甲苯、甲醇、氯仿、乙醇、乙醚、乙酸乙酯、異丙醇、異戊醇、正丁醇、正己烷進(jìn)行薄層層析分析，并將這11種溶劑分別標(biāo)記為溶劑1～11。層析過程中，使點(diǎn)樣線到溶劑前沿的距離基本相同，完成后取出風(fēng)干待用。

將小廣口瓶放入電熱帽中，加入兩粒碘晶體，微加熱至碘蒸氣形成，將各層析硅膠板放入廣口瓶中顯色，取出照相記錄。

2 結(jié)果與分析

2.1 總內(nèi)酯各組分粗分離展開結(jié)果

如圖1所示為總內(nèi)酯各溶劑層析圖，對(duì)圖中層析現(xiàn)象進(jìn)行描述，匯總于表1。由表1可知，在分離的過程中，乙酸乙酯是最好的單組分洗脫劑。

圖1 總內(nèi)酯各溶劑層析圖

乙酸乙酯作為單組分洗脫劑，其分離的各組分Rf值（物質(zhì)移動(dòng)的距離和溶劑線距離的比值）如表2所示（點(diǎn)的編號(hào)按照點(diǎn)樣線到溶劑前沿方向依次編號(hào)）。

表1 總內(nèi)酯各溶劑層析現(xiàn)象記錄表

表2 乙酸乙酯層析板上各點(diǎn)的Rf值

另外極性較大的甲醇和非極性較大的氯仿、甲苯以及正己烷配合調(diào)節(jié)極性也可成為洗脫劑。配比不同濃度的非極性溶液做薄層層析，試驗(yàn)得甲醇和氯仿是配比較好的混合洗脫劑，這兩種溶液不同配比下薄層分析結(jié)果如圖2和表3所示。

根據(jù)圖中的分離結(jié)果，各種比例的溶劑分離出的物質(zhì)的Rf值如表4所示（點(diǎn)的編號(hào)按照點(diǎn)樣線到溶劑前沿方向依次編號(hào)）。由表3和表4可知，氯仿、甲醇的最佳比例為8∶1，其分出了6個(gè)較清楚的組分，且彼此距離均勻。

圖2 氯仿甲醇溶液不同配比下層析圖

表3 氯仿甲醇溶液不同配比下層析現(xiàn)象描述

表4 氯仿甲醇溶液不同比例下各點(diǎn)的Rf值

3 硅膠柱色譜分離

3.1 裝柱

將色譜柱1/3體積的硅膠與適量氯仿混合，攪拌以除去空氣泡，徐徐傾入色譜管中，然后再加入氯仿，將附著于管壁的硅膠洗下，使色譜柱表面平整。在色譜柱頂部加入一小部分脫脂棉，并用玻璃棒壓平。再繼續(xù)加入部分氯仿，使其沿色譜柱自然流下，直到液面和柱表面相平。

3.2 試樣的加入

將提取的樣品溶于少量層析時(shí)使用的氯仿中，再沿色譜管壁緩緩加入。

3.3 洗脫

試樣加入后，先加入氯仿進(jìn)行洗脫，當(dāng)樣品進(jìn)入硅膠后，再用氯仿、甲醇比例為8∶1的溶液進(jìn)行洗脫，在層析柱的下端按時(shí)間用試管收集提取液，每分鐘換一支試管。一邊分離一邊檢測(cè)Rf值。當(dāng)檢測(cè)到表4中最大的Rf值時(shí)，則表示組分分離完全，然后用乙酸乙酯洗脫。同樣，每一分鐘換一支試管，一直洗脫至檢測(cè)到表2中最大的Rf值時(shí)，完成洗脫。

3.4 分離物的檢測(cè)

將收集的分離液點(diǎn)樣以相應(yīng)的洗脫劑作溶劑進(jìn)行薄層層析，層析結(jié)果由碘顯色。將Rf值基本一致的分離液合并，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮至小體積，即為相應(yīng)溶劑作洗脫劑的粗分離物。

用氯仿甲醇溶液經(jīng)硅膠柱色譜洗脫出5個(gè)組分，在經(jīng)硅膠板薄層層析時(shí)，各個(gè)組分的Rf值如表5所示，其Rf值與相同同比例下氯仿甲醇薄層層析混合提取物上的各個(gè)組分的Rf值基本一致。

表5 分離組分用洗脫劑做薄層層析的Rf值

在用乙酸乙酯溶液作洗脫劑進(jìn)行洗脫的過程中，出現(xiàn)一個(gè)新的組分，其薄層層析的Rf值為0.13，與乙酸乙酯薄層層析混合物時(shí)，混合物上最靠近點(diǎn)樣線的點(diǎn)的Rf值基本一致。

4 結(jié)論

通過薄層層析的方法對(duì)硅膠柱色譜的提取物進(jìn)行洗脫分離，找到較好的洗脫劑為乙酸乙酯和比例為8∶1的氯仿甲醇溶液。用此混合液作洗脫劑，可以提取物分離5種物質(zhì)，再用乙酸乙酯繼續(xù)洗脫，可分離出單個(gè)組分。