25%咪鮮胺·稻瘟酰胺微囊懸浮-懸浮劑的高效液相色譜分析

潘 靜，劉潤峰，高敬雨

（北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司，北京 102206）

咪鮮胺（prochloraz）化學(xué)名稱：N-丙基-N-[2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙基]咪唑-1-甲酰胺，是一種廣譜性殺菌劑，廣泛用于治療和鏟除由尾孢屬、核腔菌屬、喙孢屬、核盤菌屬、鐮孢屬及白粉菌、炭疽菌等致病菌所引起的油料作物、谷類、熱帶和亞熱帶水果、觀賞植物、蔬菜及各種經(jīng)濟(jì)作物的病害，也用于種子、苗木處理及防治收獲后水果貯存期的病害[1]。我國自20世紀(jì)90年代開始對咪鮮胺進(jìn)行廣泛的藥效試驗，其對花生褐斑病、油菜菌核病、茶炭疽病等都有明顯的防效，且用量較低[2]。稻瘟酰胺（fenoxanil）化學(xué)名稱：N-(1-氰基-1，2-二甲基丙基)-2-(2，4-二氯苯氧基)丙酰胺，屬黑色素生物合成抑制劑[3]。稻瘟酰胺是一種用于防治水稻稻瘟病的苯氧酰胺類殺菌劑[4]，作用機(jī)制新穎，在葉面和水下施用時防治稻瘟病效果極佳。25%咪鮮胺·稻瘟酰胺囊懸浮-懸浮劑對水稻稻瘟病有較好的防治效果[5]。咪鮮胺和稻瘟酰胺單劑的分析方法已有報道，但兩者復(fù)配劑型的分析方法未見報道[6]。本文采用高效液相色譜的反相法對25%咪鮮胺·稻瘟酰胺微囊懸浮-懸浮劑進(jìn)行了測定，旨在探索檢測咪鮮胺和稻瘟酰胺復(fù)配制劑的理論方法。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

1260高效液相色譜儀，具可變波長紫外檢測器，帶自動進(jìn)樣裝置和色譜數(shù)據(jù)處理工作站，美國安捷倫公司；過濾器：濾膜孔徑0.45 μm。

1.2 試劑

乙腈，色譜純；冰乙酸，分析純；水，新蒸二次蒸餾水；咪鮮胺標(biāo)樣（≥98.0%）、稻瘟酰胺標(biāo)樣（≥98.0%）、25%咪鮮胺·稻瘟酰胺微囊懸浮-懸浮劑（15%咪鮮胺＋10%稻瘟酰胺），北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司。

1.3 色譜操作條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C8色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測波長230 nm；流動相：乙腈＋0.3%冰乙酸水溶液（體積比為72∶28）；流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量：5 μL，柱溫：23～27℃。

在上述色譜操作條件下，咪鮮胺的保留時間約為5.1 min；稻瘟酰胺的保留時間約為6.1 min（圖1、圖2）。

圖1 咪鮮胺、稻瘟酰胺標(biāo)準(zhǔn)樣品的高效液相色譜圖

圖2 25%咪鮮胺·稻瘟酰胺微囊懸浮-懸浮劑的高效液相色譜圖

1.4 溶液配制

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取含咪鮮胺0.015 g、稻瘟酰胺0.010 g的標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.000 02 g），置于同一50 mL的容量瓶中，加入適量的乙腈溶解，超聲脫氣10 min，使標(biāo)樣全部溶解，冷至室溫后，用流動相定容、搖勻后備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取咪鮮胺0.015 g、稻瘟酰胺0.010 g（精確至0.000 02 g），置于50 mL容量瓶中，加入適量乙腈溶解，并超聲脫氣10 min，使試樣全部溶解，冷卻至室溫，用流動相定容、搖勻后，用孔徑為0.45 μm有機(jī)系濾膜過濾后備用。

1.5 測定方法

按以上色譜操作條件，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計算各針相對響應(yīng)值，直至相鄰兩針咪鮮胺（稻瘟酰胺）響應(yīng)值相對變化小于1.5%時，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。用外標(biāo)法計算各自含量。

1.6 計算方法

將測得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中的咪鮮胺（稻瘟酰胺）峰面積分別進(jìn)行平均。被試物中各檢測成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按式（1）計算。

式中：A1為標(biāo)樣溶液中咪鮮胺（稻瘟酰胺）峰面積平均值，mAU·s；A2為試樣溶液中咪鮮胺（稻瘟酰胺）峰面積平均值，mAU·s；m1為標(biāo)樣溶液中咪鮮胺（稻瘟酰胺）的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中咪鮮胺（稻瘟酰胺）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果分析

2.1 檢測波長的選擇

檢測波長是影響紫外吸收的因素，波長的選擇決定峰面積和峰高的大小。分別對咪鮮胺和稻瘟酰胺標(biāo)樣溶液進(jìn)行紫外掃描，得到相應(yīng)的吸收波長。咪鮮胺和稻瘟酰胺在200 nm附近均有最大紫外吸收，但稻瘟酰胺在230 nm處還有一較大紫外吸收，而且在200 nm的波長下雜質(zhì)的響應(yīng)值較多，對咪鮮胺和稻瘟酰胺會有一定的干擾，綜合多種因素考慮，最終決定咪鮮胺、稻瘟酰胺的檢測波長為230 nm。兩者紫外吸收光譜圖見圖3。

圖3 咪鮮胺和稻瘟酰胺紫外掃描圖

2.2 流動相的選擇

經(jīng)過多次試驗，分別以甲醇＋水和乙腈＋水及甲醇＋冰乙酸水溶液和乙腈＋冰乙酸水溶液等的配比作為流動相進(jìn)行，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用乙腈＋0.3%冰乙酸水溶液（體積比為72∶28）作為流動相，流速為1.0 mL/min時，分離效果好，出峰時間短，且峰形較尖銳、對稱。綜合以上因素，最終選定乙腈＋0.3%冰乙酸水溶液（體積比為72∶28）作為流動相。

2.3 分析方法的線性關(guān)系曲線

稱取咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)品約0.077 16 g、稻瘟酰胺標(biāo)準(zhǔn)品約0.050 36 g置于同一50 mL容量瓶中，用適量乙腈溶解、流動相定容，用移液管分別量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL溶液于6個10 mL容量瓶中，乙腈定容，配制咪鮮胺、稻瘟酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液。待儀器穩(wěn)定后，在上述色譜條件下，按濃度從低到高的順序進(jìn)樣，每個濃度進(jìn)樣兩次。以進(jìn)樣的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得咪鮮胺線性方程y=9.639 6x-9.304 7，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.999 2，表明線性關(guān)系良好（圖4）；稻瘟酰胺線性方程y=9.580 1x-38.785 4，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.999 4，表明線性關(guān)系良好（圖5）。

2.4 分析方法的精密度

選取一個有代表性的25%咪鮮胺·稻瘟酰胺微囊懸浮-懸浮劑試樣，在上述色譜操作條件下，對其有效成分（咪鮮胺、稻瘟酰胺）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行測定，計算標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表1。由表1可見咪鮮胺和稻瘟酰胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.14和0.08，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.93%和0.81%，表明該方法的精密度好。

2.5 分析方法的準(zhǔn)確度

在已知含量的樣品中加入不同質(zhì)量的咪鮮胺、稻瘟酰胺的標(biāo)樣，按上述色譜操作條件進(jìn)行5次測定，計算其各自回收率，結(jié)果見表2。咪鮮胺平均回收率為99.72%；稻瘟酰胺平均回收率為99.36%，表明此方法具有較高的準(zhǔn)確度。

圖4 咪鮮胺線性關(guān)系圖

圖5 稻瘟酰胺線性關(guān)系圖

表1 25%咪鮮胺·稻瘟酰胺微囊懸浮-懸浮劑精密度測定

表2 25%咪鮮胺·稻瘟酰胺微囊懸浮-懸浮劑準(zhǔn)確度測定

3 結(jié) 論

本文提出了25%咪鮮胺·稻瘟酰胺微囊懸浮-懸浮劑中有效成分咪鮮胺、稻瘟酰胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)的高效液相色譜分析方法，該方法既可以檢測咪鮮胺與稻瘟酰胺的復(fù)配劑型的制劑，還可以檢測咪鮮胺、稻瘟酰胺單個劑型的制劑，也適用于咪鮮胺、稻瘟酰胺原藥的檢測。此方法具有操作容易、速度快、分離好的優(yōu)點，精密度和準(zhǔn)確度較高，是咪鮮胺和稻瘟酰胺復(fù)配制劑檢測的理想方法。