γ干擾素基因多態(tài)性在子癇前期患者中的表達(dá)及對妊娠結(jié)局的影響

高 星，孫偉紅

承德市中心醫(yī)院 婦產(chǎn)科 (承德市 067000)

子癇前期是妊娠20周后首次出現(xiàn)的血壓升高、蛋白尿，臨床多表現(xiàn)為惡心嘔吐、上腹部不適、眼花頭痛等，嚴(yán)重者可引起抽搐、昏迷等[1]。子癇前期病因復(fù)雜，好發(fā)于初產(chǎn)婦，能引起較為嚴(yán)重的母兒并發(fā)癥，影響患者健康生活[2]。既往研究[3]表明，子癇前期的發(fā)生是一個多因素過程，常伴有遺傳、環(huán)境因素的共同參與，具有較為明顯的家族遺傳性傾向，但臨床上對于其發(fā)病機制尚未明確。γ干擾素(IFN-γ)基因是子癇前期患者中重要的基因編碼，能產(chǎn)生較為重要的IFN-γ炎癥因子，直接參與機體細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)[4-5]。國內(nèi)學(xué)者研究[6]表明，IFN-γ基因多態(tài)性中，rs2430561位點發(fā)生突變能增加子癇前期發(fā)生率，但是對妊娠結(jié)局的影響研究較少。本研究以子癇前期患者和健康孕檢的妊娠者作為研究對象，探討IFN-γ基因多態(tài)性在子癇前期患者中的表達(dá)及其對妊娠結(jié)局的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2017年6月至2018年10月承德市中心醫(yī)院子癇前期患者71例為試驗組，年齡23～38(27.63±3.41)歲；病程1～4(2.41±0.39)月；體重指數(shù)(BMI)23～29(25.62±3.23) kg/m2?；颊咧校醍a(chǎn)婦45例，經(jīng)產(chǎn)婦26例。納入標(biāo)準(zhǔn)：1)均符合《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版中子癇前期診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，患者妊娠20周后收縮壓≥140 mm Hg，舒張壓≥90 mm Hg，部分患者可伴有24 h尿蛋白定量≥0.3 g；2)意識清楚，能與醫(yī)生進行溝通、交流。選擇同期健康孕檢的妊娠患者69例為對照組，年齡22～39(28.11±3.43)歲；BMI 22～30(25.77±3.29) kg/m2。其中，初產(chǎn)婦36例，經(jīng)產(chǎn)婦33例。

1.2 方法

1.2.1 IFN-γ基因多態(tài)性測定 1)DNA基因提取。試驗組入院后首次取外周空腹靜脈血3 mL，對照組正常孕檢當(dāng)天取外周空腹靜脈血3 mL，3 500 r/min，離心半徑50 cm，離心35 min，血清分離后，加入三羥甲基氨基甲烷緩沖液、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、蛋白酶K等進行過夜孵育，溫度設(shè)定為37 ℃；向獲得的溶液中加入苯酚和Tris緩沖液，離心后獲得沉淀物，并向沉淀物中加入乙酸鈉、乙醇等，完成DNA基因提取，放置在-70 ℃冰箱中，備用。2)IFN-γ基因SNP位點測定。查閱美國生物技術(shù)信息中心數(shù)據(jù)庫，初步確定rs2069705、rs1861493、rs2193050、rs2430561及rs2069718部位的位點，并借助專用軟件完成相關(guān)引物設(shè)計(引物設(shè)計均由上海生工生物工程股份有限公司合成)(表1)。設(shè)置PCR參數(shù)：95 ℃ 預(yù)變性5 min，95 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共進行40個循環(huán)，最后72 ℃終延伸5 min。采用單堿基延伸法PCR擴增IFN-γ基因SNP位點[8-9]。

表1 引物設(shè)計與合成

1.2.2 SNP位點的基因型測定 利用單堿基延伸法分析IFN-γ基因5個SNP位點的基因型，將IFN-γ基因中rs2430561位點的AT+TT/AA定義為顯性模型，TT/AT+AA基因定義為隱性模型，凸顯遺傳的變化規(guī)律[10]。

1.2.3 不同血清標(biāo)本中IFN-γ水平測定 取上述分離的血清標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定兩組不同基因型下IFN-γ水平，利用3550型酶標(biāo)儀在450 nm下完成吸光度值測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，完成不同血清標(biāo)本中IFN-γ水平測定[11]。

1.2.4 妊娠結(jié)局 記錄兩組胎死宮內(nèi)、新生兒窒息、新生兒透明膜病、肝功能損害、急性心衰及彌散性血管內(nèi)溶血(DIC)發(fā)生率。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件處理，定性資料采用例數(shù)(%)表示，行2檢驗，定量資料采用表示，行t檢驗，檢驗水準(zhǔn)α除特殊說明外均設(shè)定為0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組IFN-γ基因中基因型比較

試驗組子癇前期患者SNP基因位點rs2069705、rs1861493、rs2193050及rs2069718基因頻率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；試驗組子癇前期患者SNP基因位點rs2430561中AA、AT基因頻率低于對照組(P<0.05)，TT基因頻率高于對照組(P<0.05)(表2)。

表2 兩組IFN-γ基因中基因型比較[n(%)]

2.2 兩組IFN-γ基因中等位基因頻率比較

試驗組子癇前期患者rs2069705中A、G基因頻率和rs1861493、rs2193050、rs2069718中G、A基因頻率與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；試驗組rs2430561中A等位基因頻率低于對照組(P<0.05)，T等位基因高于對照組(P<0.05)(表3)。

表3 兩組IFN-γ基因中等位基因頻率比較[n(%)]

2.3 兩組不同基因型下IFN-γ水平比較

試驗組與對照組AA基因位點下IFN-γ水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；試驗組TT、AT、AT+AA基因位點下IFN-γ水平高于對照組(P<0.05)(表4)。

表4 兩組不同基因型下IFN-γ水平比較

2.4 兩組妊娠結(jié)局比較

試驗組子癇前期患者胎死宮內(nèi)、新生兒窒息、新生兒透明膜病、肝功能損害、急性心衰及DIC發(fā)生率高于對照組(P<0.05)(表5)。

表5 兩組妊娠結(jié)局比較[n(%)]

3 討論

子癇前期是妊娠期特有的疾病，臨床對于其發(fā)病機制尚未明確，普遍認(rèn)為與高血壓、蛋白尿等有關(guān)，且隨著患者病情的不斷發(fā)展，將會引起身體器官功能障礙。國外學(xué)者[12]以重度子癇前期患者116例、正常孕婦107例及未孕女性56例作為對象，完成IFN-γ基因位點測定，結(jié)果表明，IFN-γ基因在重度子癇前期患者中基因頻率較高。本研究中，試驗組子癇前期患者SNP基因位點rs2069705、rs1861493、rs2193050及rs2069718基因頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；試驗組子癇前期患者SNP基因位點rs2430561中AA、AT基因頻率低于對照組(P<0.05)，TT基因頻率高于對照組(P<0.05)；試驗組rs2430561中，A等位基因頻率低于對照組(P<0.05)，T等位基因頻率高于對照組(P<0.05)，說明IFN-γ基因中rs2430561位點在子癇前期患者中基因頻率較高，可能直接參與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展。國內(nèi)學(xué)者[13]研究表明，子癇前期病因復(fù)雜，發(fā)生時常伴有母體免疫缺陷、體液免疫增強，導(dǎo)致Th1/Th2發(fā)生免疫失衡，且子癇前期患者免疫應(yīng)答以Th1型細(xì)胞因子為主，持續(xù)的Th1表達(dá)異常將會引起Th1/Th2發(fā)生免疫失衡，影響滋養(yǎng)細(xì)胞增殖與細(xì)胞浸潤障礙，引起血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，延緩胎盤生長發(fā)育，影響妊娠結(jié)局。IFN-γ基因主要定位于染色體12q15中，能在人體內(nèi)產(chǎn)生相對重要的免疫調(diào)節(jié)蛋白IFN-γ。國內(nèi)研究[14]表明，IFN-γ由Th1細(xì)胞分泌產(chǎn)生，且在子癇前期患者多呈高表達(dá)，能抑制Th2細(xì)胞分化，促進細(xì)胞活性、增殖，從而進一步損害胎盤組織，影響母嬰結(jié)局。本研究中，試驗組與對照組AA基因位點下IFN-γ水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，試驗組TT、AT、AT+AA基因位點下IFN-γ水平高于對照組(P<0.05)，說明IFN-γ基因中不同基因位點下IFN-γ水平存在明顯的差異性，能直接參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。國內(nèi)學(xué)者[15]進行了一次動物實驗，給予小鼠注射過量的IFN-γ后，大大增加流產(chǎn)概率，部分大鼠宮內(nèi)發(fā)展遲緩。同時，IFN-γ能與腫瘤壞死因子-α相互作用，促進細(xì)胞活化、增殖，損害胎盤組織，抑制小鼠胚胎生長、發(fā)育。本研究中，試驗組子癇前期患者胎死宮內(nèi)、新生兒窒息、新生兒透明膜病、肝功能損害、急性心衰及DIC發(fā)生率均高于對照組(P<0.05)，說明IFN-γ基因多態(tài)性能影響子癇前期母嬰結(jié)局，對伴有IFN-γ基因多態(tài)性的子癇前期患者可能會增加母嬰不良結(jié)局發(fā)生率，影響母嬰健康；因此，臨床上對于確診的子癇前期患者應(yīng)加強IFN-γ基因多態(tài)性測定，預(yù)測母嬰結(jié)局，對于高風(fēng)險、高危患者，可盡早終止妊娠。

綜上所述，IFN-γ基因中rs2430561位點是子癇前期的易感基因位點，并且不同基因型下患者血清IFN-γ均呈高表達(dá)，能影響患者妊娠結(jié)局。