血紅蛋白電泳聯(lián)合平均紅細胞體積、血清鐵檢測在妊娠婦女地中海貧血篩查中的應(yīng)用*

陳新敏，郭 燕，梁 華，朱鵬宇，羅紅權(quán)，蔣芳菲

1.四川省婦幼保健院·成都醫(yī)學(xué)院附屬婦女兒童醫(yī)院 檢驗科(成都 610041)；2.四川大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院(成都 610064)

地中海貧血是由珠蛋白基因缺失或缺陷導(dǎo)致珠蛋白肽鏈合成缺如或不足而引起的一組溶血性貧血，常見類型有α-地貧、β-地貧[1]。由于本病為遺傳性疾病，尚無法根治；因此，通過婚前、孕前檢查，產(chǎn)前篩查，防止重癥地中海貧血患兒出生是國內(nèi)外公認預(yù)防本病的最有效方法?；驒z測是診斷地中海貧血最可靠的方法[2-3]，但基因檢測技術(shù)要求高，操作復(fù)雜，價格昂貴，不適合大規(guī)模人群的篩查及基層醫(yī)院的廣泛開展。因此，尋找針對地中海貧血更有效的篩查方法顯得尤為重要。國內(nèi)外學(xué)者對血紅蛋白(hemoglobin, Hb)電泳、平均紅細胞體積(mean corpuscular volume, MCV)或/和平均紅細胞血紅蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin, MCH)、紅細胞脆性試驗、血清鐵等單項或多項聯(lián)合檢測用于地中海貧血篩查的應(yīng)用價值進行了較多研究。本研究旨在探討Hb電泳、MCV、血清鐵3項指標(biāo)聯(lián)合檢測在妊娠婦女地中海貧血篩查中的臨床價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2018年1月至2019年5月于四川省婦幼保健院進行孕期檢查的283例妊娠婦女為研究對象，納入標(biāo)準(zhǔn)：1)年齡18～40歲，妊娠11～16周；2)無吸煙、酗酒等嗜好；3)經(jīng)病史詢問、全身及婦科檢查、內(nèi)分泌檢查等均正常；4)無特殊用藥史；5)無嚴重創(chuàng)傷或急性感染性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：1)不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者；2)病例資料收集不完整，影響結(jié)果分析者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有研究對象均知情同意。根據(jù)地中海貧血基因檢測結(jié)果，分為地貧組和非地貧組。地貧組為經(jīng)基因檢測確診為地中海貧血的妊娠婦女，共158例，年齡20～39歲，妊娠11～16周。非地貧組為同期經(jīng)基因檢測為非地中海貧血妊娠婦女，共125例，年齡19～39歲，妊娠11～16周。兩組妊娠婦女年齡、孕周等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性(表1)。

表1 兩組妊娠婦女一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 血常規(guī)分析 EDTA．K2抗凝的靜脈全血2 mL，經(jīng)BC-6700全自動血細胞分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)進行血常規(guī)分析，所有試劑均為配套試劑。采用配套的高、中、低3個濃度全血質(zhì)控物，每日進行室內(nèi)質(zhì)控。本室妊娠婦女Hb參考范圍為≥100 g/L， MCV參考范圍為80～100 fl，本研究以MCV<80 fl為截斷值。

1.2.2 血清鐵含量檢測 未抗凝靜脈全血3 mL，自然凝固后，3 500 r/min，離心半徑10 cm,離心10 min，分離血清用于血清鐵含量檢測。儀器采用AU2700型全自動生化分析儀(美國貝克曼庫爾特公司)，血清鐵檢測試劑盒(亞鐵嗪法)為寧波美康生物科技股份有限公司生產(chǎn)，采用廠家配套的校準(zhǔn)品及美國伯樂公司生產(chǎn)的第三方質(zhì)控品。本室血清鐵參考范圍：女性9～27 μmol/L，本研究以血清鐵<9或>27 μmol/L為截斷值。

1.2.3 Hb電泳分析 采用EDTA.K2抗凝的靜脈全血，經(jīng)V8全自動毛細管電泳儀(美國Helena公司)進行Hb電泳分析，試劑盒采用其配套試劑，嚴格按照儀器說明書進行操作。本室成人正常參考值分別為血紅蛋白A(HbA)：94.5%～97.0%、血紅蛋白A2(HbA2)：2.5%～3.5%、血紅蛋白F(HbF)：<2.0%。若HbA2<2.5%或(和)出現(xiàn)異常血紅蛋白帶(HbH、HbBart′s)，判為疑似α-地中海貧血(α-地貧組)；若HbA2>3.5% 或(和)出現(xiàn)異常血紅蛋白帶(HbF>2.0%)，則判為疑似β-地中海貧血(β-地貧組)；若出現(xiàn)其他異常血紅蛋白帶(如HbE、HbD、HbS、HbJ等)，則判斷為疑似異常血紅蛋白病(異常血紅蛋白病組)。

1.2.4 地中海貧血基因分析 采用深圳益生堂生物企業(yè)有限公司生產(chǎn)的全血基因組提取試劑盒和基因診斷試劑盒，嚴格按試劑盒說明書進行檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，配對資料采用t檢驗，分類資料采用2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α除特別說明外均設(shè)定為0.05。

2 結(jié)果

2.1 MCV、血清鐵、Hb電泳單項和聯(lián)合檢測結(jié)果

研究對象MCV、血清鐵、Hb電泳單項和聯(lián)合檢測結(jié)果顯示，各組中三項平行聯(lián)合檢測的陽性例數(shù)均高于MCV、血清鐵和Hb電泳單項檢測的陽性例數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

表2 研究對象MCV、血清鐵、Hb電泳檢測結(jié)果

2.2 MCV、血清鐵、Hb電泳單項和聯(lián)合檢測在地中海貧血篩查中的應(yīng)用

研究對象MCV、血清鐵、Hb電泳單項和聯(lián)合檢測結(jié)果顯示，三項平行聯(lián)合檢驗的靈敏度為96.20%，高于單項檢驗的靈敏度；三項系列聯(lián)合檢驗的特異度為84.80%，高于單項檢驗的特異度，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

表3 MCV、血清鐵和Hb電泳單項和聯(lián)合檢測在地中海貧血篩查中的應(yīng)用(%)

3 討論

地中海貧血是一組遺傳性的小細胞低色素性貧血，我國南方地區(qū)發(fā)病率較高，目前臨床尚無有效的治療措施。如果夫妻雙方同時為地中海貧血患者，則可能導(dǎo)致中間型、重型地中海貧血患兒出生，從而給家庭和社會帶來沉重的精神壓力和經(jīng)濟負擔(dān)。通過婚前、孕前檢查，產(chǎn)前篩查對人群進行篩查是預(yù)防重癥地中海貧血患兒出生最有效方法[4-5]。雖然基因檢測是診斷地中海貧血最可靠的方法，但由于該方法技術(shù)要求高，操作復(fù)雜，價格昂貴而無法在基層醫(yī)院廣泛開展，且不適合于大規(guī)模人群的篩查，因而，尋找靈敏度和特異度均較高的檢測方法對妊娠婦女進行地中海貧血篩查是我國產(chǎn)前篩查工作的重要組成部分。本研究結(jié)果顯示，選用血常規(guī)MCV、血清鐵聯(lián)合Hb電泳檢測對妊娠婦女地中海貧血的患者進行篩查具有重要的臨床應(yīng)用價值。

地中海貧血大多表現(xiàn)為MCV、MCH降低的小細胞低色素性貧血。本研究結(jié)果顯示，單獨采用MCV篩查地中海貧血的靈敏度較高，為84.17%，若單獨采用紅細胞參數(shù)作為地中海貧血的篩查指標(biāo)時，HBG、MCV、MCH均正常，則患地中海貧血的概率較低，但也不能排除可能會造成某些型別地中海貧血(如靜止型α-地中海貧血)的漏診。另外，MCV篩查地中海貧血的特異性僅為45.60%，因為MCV、MCH降低還可見于缺鐵性貧血、慢性病性貧血等疾病[6]，而且缺鐵性貧血在孕婦中的發(fā)病率較高。世界衛(wèi)生組織調(diào)查顯示，約40%孕婦患有缺鐵性貧血，為了排除缺鐵性貧血，本研究采用了血清鐵含量檢測。篩查地中海貧血時，血清鐵的靈敏度和特異度都較低，其主要目的在于排除MCV降低的缺鐵性貧血[7]。臨床上?？梢姾喜⑷辫F性貧血的地貧患者，若將血清鐵降低的患者排除，也可能會引起漏診。因此，為提高地中海貧血篩查的靈敏度和特異性，有必要選擇多種實驗室檢測方法綜合分析進行篩查。

毛細管電泳是一類以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅(qū)動力的新型液相分離分析技術(shù)，綜合了高效液相色譜和凝膠電泳的特點，且標(biāo)本無需預(yù)處理，省去了紅細胞洗滌及標(biāo)本溶血的過程，具有快速、簡便、高效、靈敏及自動化程度高的特點[8]，適用于臨床大規(guī)模的篩查。地中海貧血患者由于珠蛋白鏈基因異常，導(dǎo)致血液中Hb成分改變，產(chǎn)生α、β鏈的不平衡或合成異常Hb，從而可表現(xiàn)為Hb電泳結(jié)果異常。Hb電泳是篩查地中海貧血常用的方法[9]，本研究采用美國海倫娜公司的V8全自動毛細管電泳儀進行Hb電泳分析，其可有效分離和準(zhǔn)確定量HbA、HbA2、HbF、HbH、Hb bart's、HbS、HbJ等組分。研究結(jié)果顯示，單獨運用Hb電泳篩查地中海貧血，其靈敏度和特異度分別為77.22% 和 67.20%， 較單獨運用MCV、血清鐵的特異度稍高，但靈敏度仍較低。將MCV、血清鐵、Hb電泳3個指標(biāo)聯(lián)合平行檢測，其輔助診斷地中海貧血的靈敏度可升高至96.20%，而將3個指標(biāo)進行聯(lián)合系列檢測，其特異度可提高至84.80%，與國內(nèi)學(xué)者研究結(jié)果較一致[10]?？梢?，將MCV、血清鐵、Hb電泳三者聯(lián)合檢測，可提高輔助診斷的靈敏度，相互彌補單項實驗的不足，從而可降低地中海貧血篩查的誤診率和漏診率。

綜上所述，進行地中海貧血產(chǎn)前篩查時，將血常規(guī)、血清鐵及Hb電泳3個項目聯(lián)合運用，可降低地中海貧血篩查的漏診率和誤診率，且3個檢測項目均操作簡便，易于基層醫(yī)院推廣，具有良好的應(yīng)用價值。本研究雖然將血常規(guī)、血清鐵及Hb電泳三者聯(lián)合應(yīng)用，但最終必須通過基因檢測來確診。