用通竅鼻炎藥粉對(duì)變應(yīng)性鼻炎大鼠進(jìn)行治療的效果探討

陳 卓，任 娜，楚 露，孟凱強(qiáng)，羅秋風(fēng)，張 欣，劉繼平

（陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712046）

變應(yīng)性鼻炎又叫過敏性鼻炎，是指由多種免疫活性細(xì)胞和細(xì)胞因子參與的鼻黏膜非感染性炎癥性病變。相關(guān)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，目前全球已有超過5億人罹患變應(yīng)性鼻炎[1]。此病患者可出現(xiàn)打噴嚏、流鼻涕、鼻塞、鼻癢、眼癢等癥狀。此病雖然不會(huì)威脅患者的生命安全，但可嚴(yán)重影響其生活、工作和學(xué)習(xí)。通竅鼻炎片是一種具有散風(fēng)消炎、宣通鼻竅功效的中藥制劑，常用于治療鼻竇炎和變應(yīng)性鼻炎。本研究以通竅鼻炎片的藥方為基礎(chǔ)，將該藥方中的藥材研磨成粉，探討用通竅鼻炎藥粉對(duì)變應(yīng)性鼻炎大鼠進(jìn)行治療的效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康SD大鼠50只（購自空軍軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物合格證書號(hào)為SCXK2017-0007），其體重為180～220 g。其中，雌性大鼠和雄性大鼠各有25只。

1.2 藥品與試劑

通竅鼻炎藥粉（制法是：取炒蒼耳子120 g、防風(fēng)90 g、黃芪 150 g、白芷 90 g、辛夷 90 g、炒白術(shù) 90 g、薄荷 30 g[2]。將這些藥材研磨成粉，過80目篩，即得到通竅鼻炎藥粉）、卵清蛋白OVA（品牌：BIOSS；貨號(hào)：bs-1304P）、氫氧化鋁（生產(chǎn)企業(yè)：上?？泼羯锟萍加邢薰?；貨號(hào)：A110531）、濃度為0.5%的伊文思藍(lán)染色液（生產(chǎn)企業(yè)：上海振譽(yù)生物科技有限公司；貨號(hào)：BD0365）、大鼠免疫球蛋白E（IgE）試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：南京森貝伽生物科技有限公司；貨號(hào)：SBJ-R0567）。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備

BT224S電子天平（由賽多利斯科學(xué)儀器有限公司制造）、Eon全波長酶標(biāo)儀（由美國Bio-Tek公司制造）、TGL-16M臺(tái)式高速離心機(jī)（由湖南湘儀實(shí)驗(yàn)儀器開發(fā)有限公司制造）、微量移液器（由上海求精生化試劑儀器有限公司制造）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 動(dòng)物分組與造模方法 將50只SD大鼠隨機(jī)分為給藥組（n=20）、對(duì)照組（n=20）和空白組（n=10）。用卵清蛋白和氫氧化鋁為給藥組大鼠與對(duì)照組大鼠建立變應(yīng)性鼻炎大鼠模型，造模過程包括基礎(chǔ)致敏階段和強(qiáng)化致敏階段[3]?；A(chǔ)致敏階段：在0.3 mg的卵清蛋白和30 mg的氫氧化鋁中加入1 ml的生理鹽水，制成混懸液。將該混懸液注入到給藥組大鼠與對(duì)照組大鼠的腹腔內(nèi)，向空白組大鼠的腹腔內(nèi)注入1 ml的生理鹽水，每隔1天注射1次，共注射7次。強(qiáng)化致敏階段：在造模的第14天～第20天，向給藥組大鼠與對(duì)照組大鼠的鼻腔內(nèi)滴入濃度為0.5%的卵清蛋白生理鹽水，每個(gè)鼻孔各滴入0.05 ml，向空白組大鼠的雙側(cè)鼻腔內(nèi)各滴入0.05 ml的生理鹽水，每天滴入1次，共滴入7次。每次致敏后30 min（指向大鼠的腹腔內(nèi)注藥或向其鼻腔內(nèi)滴藥后30 min），注意觀察大鼠打噴嚏、流鼻涕和抓鼻的情況，并采用疊加量化計(jì)分法對(duì)其打噴嚏、流鼻涕和抓鼻情況的嚴(yán)重程度進(jìn)行計(jì)分（每個(gè)癥狀的分值均為0～3分，總分為9分）。若對(duì)照組大鼠與給藥組大鼠上述癥狀的積分超過5分，即表示造模成功[4]。具體的計(jì)分方法詳見表1。

1.4.2 給藥方法 自造模成功的第14天開始，向給藥組大鼠的鼻腔內(nèi)噴入通竅鼻炎藥粉，共用藥7 d。在此期間，持續(xù)向給藥組大鼠與對(duì)照組大鼠的鼻腔內(nèi)滴入卵清蛋白生理鹽水，持續(xù)向空白組大鼠的鼻腔內(nèi)滴入生理鹽水。

表1 大鼠打噴嚏、流鼻涕、抓鼻情況嚴(yán)重程度的計(jì)分方法

1.5 觀察指標(biāo)

造模1～7 d后，觀察三組大鼠打噴嚏、流鼻涕和抓鼻的情況，計(jì)算其上述三項(xiàng)癥狀的積分，具體的計(jì)分方法參照表1。給藥1～7 d后，觀察三組大鼠致敏后30 min內(nèi)打噴嚏的次數(shù)。給藥1～7 d后，觀察三組大鼠打噴嚏、流鼻涕和抓鼻情況，計(jì)算其述三項(xiàng)癥狀的積分，具體的計(jì)分方法參照表1。末次給藥后，在三組大鼠中各選取6只大鼠，抽取其尾靜脈血10 ml。對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行進(jìn)行離心處理，分離出血清，用雙抗夾心法測(cè)定血清中IgE的水平。末次給藥后，在三組大鼠中各選取6只大鼠，摘取其鼻黏膜。用石蠟對(duì)鼻黏膜進(jìn)行包埋，將其制備成直徑為4 μm的鼻黏膜病理切片，并對(duì)切面進(jìn)行染色處理。在光鏡下觀察鼻黏膜病理切片中嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）的數(shù)量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 13.0軟件處理本研究中的數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用%表示，用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 造模1～7 d后三組大鼠的癥狀積分

造模6 d后及7 d后，對(duì)照組大鼠與給藥組大鼠的癥狀積分均≥5分，表示造模成功。詳見表2。

表2 造模1～7 d后三組大鼠的癥狀積分（分）

2.2 給藥1～7 d后三組大鼠致敏后30 min內(nèi)打噴嚏的次數(shù)

給藥1～7 d后，空白組大鼠致敏后30 min內(nèi)打噴嚏的次數(shù)均少于給藥組大鼠與對(duì)照組大鼠。給藥1～7 d后，給藥組大鼠致敏后30 min內(nèi)打噴嚏的次數(shù)均少于對(duì)照組大鼠。從給藥第3天開始，給藥組大鼠致敏后30 min內(nèi)打噴嚏的次數(shù)均穩(wěn)定在20次以內(nèi)。詳見圖1。

2.3 給藥1～7 d后三組大鼠的癥狀積分

給藥1～2 d后，對(duì)照組大鼠與給藥組大鼠的癥狀積分均高于空白組大鼠，P＜0.05。給藥3～7 d后，對(duì)照組大鼠的癥狀積分均高于空白組大鼠與給藥組大鼠，P＜0.05。給藥3～7 d后，空白組大鼠與給藥組大鼠的癥狀積分相比，P＞0.05。詳見表3。

2.4 末次給藥后三組大鼠血清IgE的水平

末次給藥后，對(duì)照組大鼠血清IgE的水平高于空白組大鼠與給藥組大鼠，P＜0.05。末次給藥后，空白組大鼠與給藥組大鼠血清IgE的水平相比，P＞0.05。詳見表4。

2.5 末次給藥后三組大鼠鼻黏膜病理切片中EOS的數(shù)量

末次給藥后，對(duì)照組大鼠與給藥組大鼠鼻黏膜病理切片中EOS的數(shù)量均多于空白組大鼠，P＜0.05。末次給藥后，給藥組大鼠鼻黏膜病理切片中EOS的數(shù)量少于對(duì)照組大鼠，P＞0.05。詳見表5。

表3 給藥1～7 d后三組大鼠的癥狀積分（分，）

表3 給藥1～7 d后三組大鼠的癥狀積分（分，）

注：*與空白組相比，P＜0.05；#與空白組、給藥組相比，P＜0.05；×與空白組相比，P＞0.05。

組別 只數(shù) 給藥1 d后 給藥2 d后 給藥3 d后 給藥4 d后 給藥5 d后 給藥6 d后 給藥7 d后空白組 10 2.00±1.25 2.50±1.43 3.20±1.23 2.70±1.06 2.60±1.60 2.80±1.46 2.90±0.57對(duì)照組 20 6.00±1.26* 5.95±1.10* 6.00±0.86# 6.10±1.33# 6.00±1.34# 6.11±1.24# 6.05±1.39#給藥組 20 6.00±1.03* 5.05±1.82* 2.45±1.32× 2.50±1.24× 2.00±0.79× 3.25±1.57× 3.00±1.81×

表4 末次給藥后三組大鼠血清IgE的水平（ng/ml，）

表4 末次給藥后三組大鼠血清IgE的水平（ng/ml，）

注：*與空白組、給藥組相比，P＜0.05；#與空白組相比，P＞0.05。

組別 只數(shù) 血清IgE空白組 6 2.18±1.31對(duì)照組 6 3.69±1.28*給藥組 6 2.11±1.70#

表5 末次給藥后三組大鼠鼻黏膜病理切片中EOS的數(shù)量（個(gè)，）

表5 末次給藥后三組大鼠鼻黏膜病理切片中EOS的數(shù)量（個(gè)，）

注：*與空白組相比，P＜0.05；#與對(duì)照組相比，P＞0.05。

組別 只數(shù) 鼻黏膜病理切片中EOS的數(shù)量空白組 6 2.00±0.36對(duì)照組 6 4.67±0.58*給藥組 6 4.03±1.15*#

3 討論

人鼻黏膜的表面積約為150 cm2，且鼻黏膜的表面存在大量的微絨毛。臨床研究表明，在對(duì)變應(yīng)性鼻炎患者進(jìn)行治療時(shí)，向其鼻腔內(nèi)給藥可使藥物直接作用于鼻黏膜，能避免藥物在其肝臟內(nèi)出現(xiàn)首過效應(yīng)，進(jìn)而可提高藥物的吸收速度和生物利用度[5]。另外，藥粉還可在患者的鼻黏膜外形成一層隔離防護(hù)膜，能減少外界致敏源與其鼻黏膜發(fā)生直接接觸，進(jìn)而可減輕其過敏反應(yīng)[6]。本研究所用的通竅鼻炎藥粉中，蒼耳子可散風(fēng)除濕、通竅止痛，防風(fēng)可祛風(fēng)止癢，黃芪可補(bǔ)氣、排膿，白芷可活血排膿，辛夷可散風(fēng)寒、通鼻竅，白術(shù)可健脾益氣、燥濕利水，薄荷可疏肝理氣、利咽止癢。上述諸藥合用，可共奏散風(fēng)消炎、宣通鼻竅之功。

綜上所述，用通竅鼻炎藥粉對(duì)變應(yīng)性鼻炎大鼠進(jìn)行治療的效果顯著，能有效地緩解其打噴嚏、流鼻涕等癥狀，降低其血清IgE的水平。