兩種結(jié)核菌培養(yǎng)基培養(yǎng)抗酸桿菌評(píng)價(jià)研究

李昌錦，楊 潔*

（聯(lián)勤保障部隊(duì)第900醫(yī)院梅峰院區(qū)檢驗(yàn)科，福建 福州 350001）

結(jié)核病一種傳染病，盡管病情進(jìn)展較慢，但是實(shí)際上依然是嚴(yán)重威脅著患者的健康。現(xiàn)階段，在對(duì)結(jié)核病診斷過程中，主要是采用分離培養(yǎng)抗酸桿菌的方式，不僅僅是為了早期發(fā)現(xiàn)，也是為了促進(jìn)治療。在選擇合適的結(jié)核菌培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，如何選擇陽(yáng)性率高且污染率低的培養(yǎng)基，近些年來始終是結(jié)核病診斷的重點(diǎn)[1]。那么，我院通過對(duì)兩種結(jié)核菌培養(yǎng)基培養(yǎng)抗酸桿菌評(píng)價(jià)，在探究中大有收獲?，F(xiàn)在把我院對(duì)兩種結(jié)核菌培養(yǎng)基培養(yǎng)抗酸桿菌的評(píng)價(jià)情況報(bào)告如下：

1 資料和方法

1.1 一般資料

以我院收治疑似肺結(jié)核患者的50份痰標(biāo)本作為研究對(duì)象，同時(shí)選擇20份H37Rv標(biāo)準(zhǔn)菌株。實(shí)驗(yàn)中自制的羅氏培養(yǎng)基的主要成分有新鮮雞卵液、6%孔雀綠、甘油、磷酸二氫鉀、枸櫞酸鎂、蒸餾水等，參照《臨床技術(shù)操作規(guī)范結(jié)核病分冊(cè)》進(jìn)行配制。

1.2 方法

首先，液化痰標(biāo)本，視標(biāo)本性狀，加入1-2倍體積的消化液（N-乙酰-L-半胱氨酸-4%氫氧化鈉）在渦旋振蕩器上振蕩1分鐘，使痰標(biāo)本充分勻化，室溫靜置15分鐘后分別于實(shí)驗(yàn)室自制的羅氏培養(yǎng)基與貝索羅氏培養(yǎng)基中進(jìn)行接種，接種量為0.1ml，接種后來回晃動(dòng)，使標(biāo)本均勻鋪于斜面上，每份標(biāo)本接種兩支培養(yǎng)基。其次，H37Rv標(biāo)準(zhǔn)菌株用生理鹽水在磨菌管中制備1麥?zhǔn)蠞岫?，按上述方法接種培養(yǎng)基。接種后斜面向上于37℃孵育箱中平放24小時(shí)后，檢查培養(yǎng)基污染情況，擰緊瓶蓋，將培養(yǎng)基豎直放置，37℃繼續(xù)培養(yǎng)。接種后第三天、第七天各觀察一次，此后每周觀察一次，如有菌落生長(zhǎng)，則進(jìn)行抗酸染色涂片鏡檢以鑒別污染或分枝桿菌生長(zhǎng)。最后，當(dāng)確定為抗酸桿菌時(shí)，就以培養(yǎng)為陽(yáng)性作為判斷。當(dāng)連續(xù)五十六天無菌落生長(zhǎng)，就以陰性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩種培養(yǎng)基上抗酸桿菌的陽(yáng)性率、污染率及生長(zhǎng)時(shí)間，同時(shí)也觀察兩種培養(yǎng)基上標(biāo)準(zhǔn)菌株的生長(zhǎng)時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0，計(jì)量資料主要是用t來檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料主要是用x2來檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩種結(jié)核菌培養(yǎng)基的陽(yáng)性率與污染率比較

貝索羅氏培養(yǎng)基的陽(yáng)性率為16%，實(shí)驗(yàn)室自制的羅氏培養(yǎng)基陽(yáng)性率為16%，兩組培養(yǎng)基的陽(yáng)性率進(jìn)行比較，P＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；實(shí)驗(yàn)室自制的羅氏培養(yǎng)基的污染率（12%）高于貝索羅氏培養(yǎng)基的污染率（2%），P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 兩種結(jié)核菌培養(yǎng)基的陽(yáng)性率與污染率

2.2 兩種結(jié)核菌培養(yǎng)基的生長(zhǎng)時(shí)間比較

貝索羅氏培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)室自制的羅氏培養(yǎng)基的痰標(biāo)本培養(yǎng)時(shí)間比較，P＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩種培養(yǎng)基比較，貝索羅氏培養(yǎng)基中標(biāo)準(zhǔn)菌株的生長(zhǎng)時(shí)間較短，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表2 兩種結(jié)核菌培養(yǎng)基的生長(zhǎng)時(shí)間比較

3 討 論

分枝桿菌培養(yǎng)并進(jìn)行菌種鑒定是結(jié)核病病原學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，是確定結(jié)核病診斷和化療方案的重要依據(jù)。由于抗酸桿菌在分離培養(yǎng)過程中，常常會(huì)受到諸多因素的影響，導(dǎo)致污染率大幅度增高，痰標(biāo)本前處理液沉渣是培養(yǎng)污染率高的主要原因之一[2]，這時(shí)候就要為抗酸桿菌的培養(yǎng)選擇最適合的培養(yǎng)基與采用正確的操作技術(shù)[3]。張皎月[4]在研究中表明，結(jié)核病具有傳染性，該疾病的早期發(fā)現(xiàn)意義重大。在對(duì)結(jié)核病中痰標(biāo)本中抗酸桿菌分離培養(yǎng)時(shí)，貝索羅氏培養(yǎng)基的污染率相對(duì)較好，這主要是：一、貝索羅氏培養(yǎng)基添加成分更多，二、可能是由于自制的羅氏培養(yǎng)基滅菌效果不佳。痰標(biāo)本前處理是影響陽(yáng)性率與污染率的重要因素，痰液成分復(fù)雜，含有的菌量大且廣，前處理可殺滅雜菌控制污染率，同時(shí)為了盡可能保存分枝桿菌的活力，前處理過程應(yīng)不超過20分鐘。張永強(qiáng)[5]等在研究中強(qiáng)調(diào)，在抗酸桿菌的培養(yǎng)過程中，采用貝索羅氏培養(yǎng)基去培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)菌株的時(shí)候，標(biāo)準(zhǔn)菌株的生長(zhǎng)時(shí)間就會(huì)大大縮短，至少，生長(zhǎng)時(shí)間會(huì)大大小于自制的羅氏培養(yǎng)基。

對(duì)此，我院通過對(duì)抗酸桿菌進(jìn)行貝索羅氏培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)室自制的羅氏培養(yǎng)基進(jìn)行分離和培養(yǎng)，研究結(jié)果表明，貝索羅氏培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)室自制的羅氏培養(yǎng)基的陽(yáng)性率比較，P＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)室自制的羅氏培養(yǎng)基的污染率是12%，高于貝索羅氏培養(yǎng)基的污染率（2%），P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。貝索羅氏培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)室自制的羅氏培養(yǎng)基的痰標(biāo)本培養(yǎng)時(shí)間比較，P＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩組培養(yǎng)基中，貝索羅氏培養(yǎng)基中標(biāo)準(zhǔn)菌株的生長(zhǎng)時(shí)間較短，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明，貝索羅氏培養(yǎng)基應(yīng)用過程中抗污染能力更強(qiáng)，更加適合日益復(fù)雜的臨床標(biāo)本，也更適用于標(biāo)準(zhǔn)菌株的傳代培養(yǎng)。

綜上所述，貝索羅氏培養(yǎng)基在培養(yǎng)抗酸桿菌上體現(xiàn)了較好的效果，且污染率低，值得在臨床上推廣應(yīng)用。