長鏈非編碼RNA SchLAH在肝癌患者中的表達及與預(yù)后的關(guān)系

阿麗亞·熱哈提 何方平

原發(fā)性肝癌是常見的惡性程度較高的腫瘤之一，據(jù)全球統(tǒng)計結(jié)果表明，原發(fā)性肝癌在男性惡性腫瘤中的發(fā)病率居第5位，病死率居第2位，在女性惡性腫瘤中的發(fā)病率和病死率分別居第7位和第6位[1]。目前臨床上多采用手術(shù)切除、肝移植和索拉非尼化學(xué)治療等方法治療肝癌，但治療后的復(fù)發(fā)率較高，預(yù)后較差，患者存活率較低[2]。因此，研究肝癌發(fā)生、發(fā)展的分子機制，對于肝癌的診斷和治療策略的選擇至關(guān)重要。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類長度超過200個核苷酸，但無蛋白質(zhì)編碼潛能的RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。隨著對lncRNA研究的深入，越來越多的證據(jù)表明，lncRNA可調(diào)節(jié)一系列重要的病理生理過程，尤其是可參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。值得注意的是，多種腫瘤中均可發(fā)現(xiàn)lncRNA異常表達，這些異常表達的lncRNA可以通過多種機制調(diào)節(jié)基因表達[3]。Ge等[4]研究發(fā)現(xiàn)，SchLAH可能通過與肉瘤融合蛋白(FUS)相互作用，抑制肝癌細胞的轉(zhuǎn)移，提示SchLAH對于治療肝癌具有重要意義。本研究對行肝切除術(shù)的96例患者的肝癌組織和癌旁組織標本進行分析，探討SchLAH在肝癌患者中的表達及與預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 材料

收集2016年6月至2019年6月在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院行肝切除術(shù)的96例患者的肝癌組織和癌旁組織的冰凍標本，并記錄患者的病歷資料?；颊邩吮揪?jīng)病理學(xué)診斷為肝癌。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，入選患者的病歷資料完整。96例肝癌患者中男性50例，女性46例；年齡為36～75歲，平均年齡為(53.16±9.47)歲；腫瘤>5 cm 34例，<5 cm 62例；甲胎蛋白(AFP)<20 μg/L 31例，≥20 μg/L 65例；臨床分期Ⅰ～Ⅱ期 69例，Ⅲ期27例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例，遠處轉(zhuǎn)移4例。

1.2 方法

1.2.1 總RNA提取 取出于液氮中保存的肝癌組織及癌旁組織樣本，快速轉(zhuǎn)入研缽中研磨，注意保持研缽處于低溫狀態(tài)，研磨至粉末狀后加入1 mL Trizol試劑。(1)均漿分相：取1 mL上述裂解過組織的Trizol液，轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，室溫靜置5 min，加入200 μL三氯甲烷，劇烈震蕩混勻，靜置3 min后轉(zhuǎn)移至離心機低溫(4 ℃)離心，10 000 r/min離心15 min。(2)RNA沉淀：離心后取400 μL上層液體轉(zhuǎn)移至另一支EP管中，加入等量異丙醇。靜置15 min后置于離心機低溫(4 ℃)離心，10 000 r/min離心15 min。(3)洗滌沉淀：棄上清液，加入1 mL 75%乙醇后將EP管上下顛倒2次，然后低溫(4 ℃)離心，7 500 r/min離心5 min。棄上清液，于空氣中干燥至RNA沉淀逐漸透明，加入40 μL無RNA 酶水溶解，于-70 ℃保存。

1.2.2 cDNA樣品合成 吸取1 μg總RNA，使用Invitrogen公司的M-MLV Reverse Transcriptase kit進行反轉(zhuǎn)錄。cDNA于-20 ℃保存，作為下一步qRT-PCR的模板。

1.2.3 實時定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測肝癌組織及癌旁組織中SchLAH的表達 實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)試劑購自中山大學(xué)達安基因股份有限公司。根據(jù)模板或引物配置 PCR 反應(yīng)的混合液，嚴格按照實驗步驟進行操作。采用Taqman 探針法檢測SchLAH的表達值，以β-肌動蛋白作為內(nèi)部對照的表達量，相對表達量采用比較CT法(2-△△CT)進行數(shù)據(jù)分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 SchLAH在肝癌組織及癌旁組織中的相對表達量分析

結(jié)果顯示，SchLAH在肝癌組織中的相對表達量為3.13±0.63，顯著低于癌旁組織(5.32±0.42)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 肝癌組織中SchLAH的表達與臨床病理特征的關(guān)系

SchLAH的表達與肝癌患者的性別、年齡、AFP水平、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)，與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。臨床分期為Ⅲ期、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移者的SchLAH相對表達量比臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移者低，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

表1 SchLAH的表達與臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

肝癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，雖然近年來肝癌的治療手段取得了顯著進展，但患者的5年生存率仍然較低[5]。肝癌的發(fā)生是一個復(fù)雜的多步驟過程，其具體的分子機理目前尚不清楚。近年來研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA參與了生物體內(nèi)多種重要的生物學(xué)過程，并且在肝癌的發(fā)生過程中具有重要的調(diào)控作用[6-8]。Chen等[9]研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA lncZic2通過蛋白激酶C底物MARCKS和MARCKSL1驅(qū)動肝癌起始細胞的自我更新，可能成為肝癌治療的潛在靶點。Wang等[10]研究發(fā)現(xiàn)，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)介導(dǎo)的lncRNA可上調(diào)HOXD-AS1，促進肝癌細胞轉(zhuǎn)移，對于肝癌的預(yù)后具有一定意義。因此，探討lncRNA在肝癌中的轉(zhuǎn)移機制有利于促進肝癌的有效診斷及治療的發(fā)展，對提高肝癌患者整體預(yù)后也有重要作用。

隨著研究深入，lncRNA在肝癌細胞轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移中的作用逐漸引起臨床醫(yī)生的重視。lncRNA既可起促癌作用，又可起抑癌作用。鄭清盛等[11]采用Real-time PCR檢測了7種與腫瘤相關(guān)的lncRNA，發(fā)現(xiàn)SNHG5、IGF2AS、PCA3、HIF-α在肝癌組織和癌旁組織中存在差異表達，尤其是lncRNA IGF2AS表達的差異最為顯著，其在肝癌的發(fā)展及預(yù)后研究中有重要意義。邢宏松等[12]的研究發(fā)現(xiàn)，在肝癌細胞中l(wèi)ncRNA NEAT1呈高表達，沉默lncRNA NEAT1表達可抑制肝癌細胞的增殖、遷移和侵襲，其機制可能與調(diào)控miR-211/SATB2信號通路有關(guān)。郭鵬等[13]的研究顯示，lncRNA CCAT2在肝癌組織及細胞系中均呈高表達，可促進細胞增殖及轉(zhuǎn)移。呂細林等[14]的研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA H19通過促進miR-124-3p表達，進而抑制其靶基因Cyclin D1表達，從而抑制肝癌細胞增殖，發(fā)揮抑癌作用。本研究發(fā)現(xiàn)，SchLAH在肝癌組織中的相對表達量顯著低于癌旁組織，提示SchLAH在機體內(nèi)可能發(fā)揮抑癌作用。

肝癌患者經(jīng)治療后的復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率均較高，患者生存率較低，預(yù)后較差。本研究對肝癌組織中SchLAH的表達與臨床病理特征的關(guān)系進行了探討，以期為肝癌的預(yù)后及診療提供新的途徑。本研究結(jié)果顯示， SchLAH的表達與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移有關(guān)，SchLAH低表達可促進腫瘤發(fā)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移。提示SchLAH的表達與患者的預(yù)后密切相關(guān)，其或許可成為一個潛在的、有重要臨床意義的肝癌分子標志物或治療靶點，對于肝癌的診斷、治療及改善預(yù)后具有重要意義。Ge等[4]研究發(fā)現(xiàn)，肝細胞癌中SchLAH的表達普遍下調(diào)，SchLAH的低表達與肝癌患者較短的總生存期顯著相關(guān)，且該研究還提示SchLAH可能通過與FUS相互作用，從而抑制肝癌細胞的轉(zhuǎn)移。本研究的不足之處在于未能進行較長時間的隨訪，SchLAH對預(yù)后的價值還需進一步隨訪研究。

綜上所述，lncRNA SchLAH在肝癌組織中相對低表達，且與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移有關(guān)。