• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    T細(xì)胞發(fā)育在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機(jī)制中的作用

    2020-05-09 09:48陳金陳旭艷
    中國現(xiàn)代醫(yī)生 2020年7期
    關(guān)鍵詞:T淋巴細(xì)胞系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機(jī)制

    陳金 陳旭艷

    [摘要] 目的 探討T細(xì)胞發(fā)育在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法 選取2017年9月~2019年8月我院收治的活動期SLE患者120例為病例組,選取同期我院中青年健康體檢者50例為對照組。檢測CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD25+T細(xì)胞百分率,血清TGF-β、IL-10和IL-12水平,分析T細(xì)胞亞群分布特點及活化與SLE活動度評分、TGF-β、IL-10和IL-12水平的相關(guān)性。 結(jié)果 病例組的CD4+、CD4+CD25+T細(xì)胞百分率與對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。病例組的CD8+T細(xì)胞百分率高于對照組(P<0.05),CD4+/CD8+比值低于對照組(P<0.05),CD8+CD25+T細(xì)胞百分率低于對照組(P<0.05),CD4+CD25+/CD8+CD25+比值高于對照組(P<0.05)。病例組的血清TGF-β水平低于對照組(P<0.05),IL-10和IL-12水平高于對照組(P<0.05)。CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD25+與SLE活動度評分、TGF-β水平無明顯相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。CD4+CD25+和CD8+CD25+與血清IL-10和IL-12水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。 結(jié)論 SLE患者存在T細(xì)胞發(fā)育中CD4+、CD8+亞群分布紊亂和活化異常,可能通過細(xì)胞因子TGF-β、IL-10和IL-12參與SLE的發(fā)病機(jī)制。

    [關(guān)鍵詞] 系統(tǒng)性紅斑狼瘡;T淋巴細(xì)胞;CD4+;CD8+;CD25+;發(fā)病機(jī)制

    [中圖分類號] R593.2? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701(2020)07-0011-04

    Effects of T cell development in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus

    CHEN Jin? ?CHEN Xuyan

    Department of Hematology and Rheumatology, the Second Affiliated Hospital of Xiamen Medical College, Xiamen 361101, China

    [Abstract] Objective To investigate the effects of T cell development on the pathogenesis of systemic lupus erythematosus(SLE). Methods A total of 120 active-phase SLE patients admitted in our hospital from September 2017 to August 2019 were enrolled in the SLE group, and 50 healthy participants at young or middle age for physical examinations in the same period were enrolled in the control group. The proportions of CD4+, CD8+, CD4+CD25+ and CD8+CD25+ T cells and serum levels of transforming growth factor β (TGF-β), interlukin-10 (IL-10) and IL-12 were determined. Correlations between the distribution and activation of T-lymphocyte subsets and SLE disease activity index (SLEDAI), serum levels of TGF-β, IL-10 and IL-12 were analyzed. Results There were nonsignificant differences in the proportions of CD4+ T cells and CD4+CD25+ T cells between the SLE group and the control group(P>0.05). The proportion of CD8+ T cells in the SLE group was higher than that in the control group(P<0.05). CD4+/CD8+ ratio in the SLE group was lower than that in the control group(P<0.05). The proportion of CD8+CD25+ T cells in the SLE group was lower than that in the control group(P<0.05). CD4+CD25+/CD8+CD25+ ratio in the SLE group was higher than that in the control group(P<0.05). The serum level of TGF-β was lower and levels of IL-10 and IL-12 were higher in the SLE group than those in the control group(P<0.05). There were nonsignificant correlations between CD4+, CD8+, CD4+CD25+ and CD8+CD25+ and SLEDAI, and between CD4+, CD8+, CD4+CD25+ and CD8+CD25+ and TGF-β levels(P>0.05). CD4+CD25+ and CD8+CD25+ were negatively correlated with serum levels of IL-10 and IL-12(P<0.05). Conclusion The uneven distribution and abnormal activation of CD4+ and CD8+ T-lymphocyte subsets in T cell development in SLE patients can be involved in the pathogenesis of SLE via the regulation of cytokines, such as TGF-β, IL-10 and IL-12.

    [Key words] Systemic lupus erythematosus; T lymphocytes; CD4+; CD8+; CD25+; Pathogenesis

    系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)為慢性、系統(tǒng)性自身免疫疾病,免疫復(fù)合物的形成和沉積是SLE發(fā)病的主要機(jī)制,血清產(chǎn)生多種抗核抗體,通過免疫復(fù)合物等途徑引起各個臟器和組織的炎癥反應(yīng)和血管病變[1-2]。目前研究發(fā)現(xiàn),T細(xì)胞發(fā)育中CD4+、CD8+亞群分布紊亂和活化異常有可能是導(dǎo)致自身免疫疾病的重要原因,SLE患者的CD4+、CD8+T細(xì)胞功能失調(diào),導(dǎo)致B細(xì)胞繼續(xù)活化產(chǎn)生多種自身抗體,使自身免疫持續(xù)存在[3-4]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與相關(guān)細(xì)胞因子如轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、白細(xì)胞介素10(IL-10)和白細(xì)胞介素12(IL-12)等在SLE發(fā)病機(jī)制中的作用是目前臨床研究熱點,但未有確切定論。為探討T細(xì)胞發(fā)育在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機(jī)制中的作用,本研究分別檢測SLE患者與正常人群中的CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD25+T細(xì)胞百分率,血清TGF-β、IL-10和IL-12水平,分析T細(xì)胞亞群分布特點及活化與SLE活動度評分、TGF-β、IL-10和IL-12水平的相關(guān)性,現(xiàn)報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2017年9月~2019年8月我院收治的活動期SLE患者120例為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn):符合SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];根據(jù)SLE活動度評分≥5分為活動期SLE;于我院接受規(guī)范治療。排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他自身免疫系統(tǒng)疾病,如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、硬皮病、結(jié)節(jié)性動脈炎等;合并嚴(yán)重心血管、肝、肺等疾病。其中男14例,女106例,年齡20~45歲,平均(32.46±5.33)歲;平均病程(27.29±10.67)個月;SLE活動度評分為6~24分,平均(14.22±3.69)分。選取同期我院中青年健康體檢者50例為對照組,男10例,女40例,年齡22~42歲,平均(31.86±4.73)歲,排除妊娠期、自身免疫系統(tǒng)疾病、慢性病史。兩組一般資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn),患者簽署知情同意書。

    1.2 方法

    1.2.1 儀器與試劑? 檢測儀器為美國BD公司生產(chǎn)的FACSCalibur流式細(xì)胞儀。主要試劑:熒光染料R-藻紅蛋白標(biāo)記小鼠抗人CD4單克隆抗體、CD8單克隆抗體、CD25單克隆抗體,均為美國BD公司的配套試劑盒。TGF-β試劑盒(上海江萊生物科技有限公司)、IL-10和IL-12試劑盒(武漢默沙克生物科技有限公司)。

    1.2.2 檢測方法? 所有受檢者均于清晨空腹采血,乙二胺四乙酸抗凝,采集后6 h內(nèi)送檢。T細(xì)胞檢測:取外周血標(biāo)本100 μL分別放入檢測管,分別加入CD4、CD8、CD25單克隆抗體。混勻后避光溫育20 min,加入紅細(xì)胞裂解液,混勻加速離心棄上清,加入PBS緩沖液懸浮細(xì)胞,重復(fù)3次離心和加入PBS緩沖液懸浮細(xì)胞。最后經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD25+T細(xì)胞百分率。血清TGF-β、IL-10和IL-12水平檢測:雙抗體夾心ELISA法,將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,輕輕晃動混勻,37℃溫育30 min,重復(fù)5次加速離心和棄上清,酶標(biāo)板孔加入酶標(biāo)試劑50 μL,用封板膠紙封住反應(yīng)孔。重復(fù)溫育和洗滌,最后1次洗滌置厚吸水紙上拍干。再加入顯色劑,震蕩混勻避光顯色15 min。最后加入終止液終止反應(yīng),450 nm波長依序測量吸光度。以上均嚴(yán)格按照說明書操作。

    1.3 評價標(biāo)準(zhǔn)

    SLE病情的判斷依據(jù)SLE活動度評分。其中0~4分為基本無活動,5~9分為輕度活動,10~14分為中度活動,≥15分為重度活動[6]。分析T細(xì)胞與SLE活動度評分的相關(guān)性。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

    采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計分析。滿足正態(tài)分布的計量資料以(x±s)描述,進(jìn)行t檢驗。計數(shù)資料以[n(%)]描述,采用χ2檢驗。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組外周血CD4+和CD8+T細(xì)胞分布比較

    病例組的CD4+T細(xì)胞百分率與對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。病例組的CD8+T細(xì)胞百分率明顯高于對照組(P<0.05),且CD4+/CD8+比值低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

    2.2 兩組外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+T細(xì)胞分布比較

    病例組的CD4+CD25+T細(xì)胞百分率與對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。病例組的CD8+CD25+T細(xì)胞百分率明顯低于對照組(P<0.05),且CD4+CD25+/CD8+CD25+比值高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

    2.3 兩組血清TGF-β、IL-10和IL-12水平比較

    病例組的血清TGF-β水平明顯低于對照組(P<0.05),IL-10和IL-12水平明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

    2.4 T細(xì)胞與SLE活動度評分、TGF-β、IL-10和IL-12水平的相關(guān)性分析

    患者SLE活動度評分為6~24分,平均(14.22±3.69)分,其中輕度活動32例,中度活動49例,重度活動39例。CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD25+與SLE活動度評分、TGF-β水平無明顯相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。CD4+CD25+和CD8+CD25+與血清IL-10和IL-12水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表4。

    3 討論

    T細(xì)胞的發(fā)育與成熟歷經(jīng)從干細(xì)胞到成熟T細(xì)胞再到分化的效應(yīng)T細(xì)胞,在發(fā)育中將增殖、前受體表達(dá)、再增殖、抗原受體表達(dá)、正負(fù)選擇的過程[7]。是否表達(dá)前抗原受體、是否表達(dá)抗原受體、表達(dá)的抗原受體對抗原識別的正選擇與負(fù)選擇是T細(xì)胞的發(fā)育與成熟的重要檢查點。在胸腺中,早期T淋巴細(xì)胞發(fā)育,DP細(xì)胞經(jīng)歷陽性或陰性選擇階段,快速增殖發(fā)育為其表面標(biāo)志為CD4或CD8的單陽性T細(xì)胞。CD4+細(xì)胞,即輔助性T細(xì)胞,可以分泌多種細(xì)胞因子,主要發(fā)揮體液免疫和細(xì)胞免疫的功能。CD8+細(xì)胞,即細(xì)胞毒T細(xì)胞,產(chǎn)生特殊抗原反應(yīng),具有殺傷靶細(xì)胞的功能[8]。CD4+和CD8+T細(xì)胞在胸腺中分化、發(fā)育成熟后,通過淋巴和血液循環(huán)分布到全身的免疫器官和組織中發(fā)揮免疫功能[9]。多項研究提出,其發(fā)病與淋巴亞群的異常分布密切相關(guān)[10-11]。本研究采用流式細(xì)胞儀檢測SLE患者與正常人群的淋巴細(xì)胞亞群CD4+和CD8+T細(xì)胞百分率,結(jié)果顯示,SLE患者的CD8+T細(xì)胞百分率明顯升高,CD4+/CD8+比值明顯降低,提示活動期SLE患者存在T細(xì)胞亞群分布紊亂。這與劉暘等[12]研究結(jié)果相符,該研究表示,SLE患者CD4+ T細(xì)胞明顯降低,CD8+ T細(xì)胞明顯增加,CD4+/CD8+比值明顯降低,認(rèn)為SLE的發(fā)病及病情活動度與T細(xì)胞亞群水平及Th1/Th2平衡紊亂、Th2細(xì)胞占優(yōu)勢有關(guān)。

    T細(xì)胞的抗原活化過程是體液和細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的中心事件,TCR-CD復(fù)合物與抗原肽-MHC復(fù)合物的相互作用起始T細(xì)胞的活化,而T細(xì)胞活化離不開APC表面輔助刺激信號配體與其表面對應(yīng)輔助刺激信號受體相互作用,為T細(xì)胞的活化提供第二信號。近年來研究中,CD25被認(rèn)為是T細(xì)胞的活化標(biāo)志之一,可能與胸腺微環(huán)境中多種分子和相關(guān)信號途徑有關(guān),對維持自身免疫耐受具有重要意義[13-14]。本研究發(fā)現(xiàn),SLE患者的CD8+CD25+T細(xì)胞百分率明顯降低,CD4+CD25+/CD8+CD25+比值明顯升高,提示活動期SLE患者存在T細(xì)胞活化異常。Yin ZJ等[15]研究證實,CD4+CD25+和CD8+CD25+T細(xì)胞參與自身免疫疾病的發(fā)生,與疾病活動和器官受累有關(guān),活動期SLE患者CD4+CD25-Foxp3+T細(xì)胞百分率明顯增加,可以作為SLE活動和器官受累的生物標(biāo)志物。Maraghy N等[16]研究也發(fā)現(xiàn),SLE患者CD4+CD25-Foxp3+T細(xì)胞百分率明顯升高,與SLE活動評分和病程有顯著相關(guān)性,且與腎功能損害和血液系統(tǒng)損害呈正相關(guān)。在本研究中,發(fā)現(xiàn)SLE患者的T細(xì)胞與SLE活動度評分未見明顯相關(guān)性,但由于本研究僅納入活動期SLE患者,缺乏與穩(wěn)定期SLE患者的比較,也未能長期隨訪其病情變化特點,故T細(xì)胞的亞群分布與活化異常與SLE病情嚴(yán)重程度的關(guān)聯(lián)仍待進(jìn)一步探討。

    T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子主要有白細(xì)胞介素、生長因子、趨化因子等。各種細(xì)胞因子一般通過結(jié)合相應(yīng)受體調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化和效應(yīng),對于調(diào)控免疫應(yīng)答具有重要意義。有研究發(fā)現(xiàn),在CD4+CD25+T細(xì)胞中分泌IL-10和IL-12,參與組織炎癥損傷,具有免疫刺激和免疫抑制雙重作用[17]。IL-10也具有單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞依賴,抑制其他細(xì)胞因子合成,促進(jìn)可溶性TNF受體的釋放,在疾病不同階段表現(xiàn)出不同作用。朱強(qiáng)等[18]研究發(fā)現(xiàn),IL-10與TGF-β共同參與了SLE的發(fā)病過程,IL-10的表達(dá)與SLE活動度評分呈正相關(guān),而TGF-β的表達(dá)與SLE活動度呈負(fù)相關(guān)。趙凌等[19]研究表示, CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞與IL-10表達(dá)密切相關(guān),SLE患者誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化后形成的 Treg細(xì)胞以及未轉(zhuǎn)化的CD4+CD25+T細(xì)胞內(nèi)表達(dá)IL-10的水平均顯著高于正常人。本研究發(fā)現(xiàn),SLE患者的血清IL-10和IL-12水平明顯較高,可能與SLE發(fā)病機(jī)制有一定關(guān)聯(lián)。TGF-β是新近發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化的TGF-β超家族,具有抑制淋巴細(xì)胞分化的作用,近年來有關(guān)TGF-β治療自身免疫性疾病有廣闊前景。進(jìn)一步分析T細(xì)胞與TGF-β、IL-10和IL-12水平的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)CD4+CD25+和CD8+CD25+與血清IL-10和IL-12水平呈負(fù)相關(guān),提示調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可能通過細(xì)胞因子TGF-β、IL-10和IL-12參與SLE的發(fā)病機(jī)制。楊舟等[20-22]研究提出,SLE患者CD4+CD25+ Treg及TGF-β水平可隨疾病的進(jìn)展而下調(diào)表達(dá),在預(yù)測患者病情進(jìn)展上有一定價值。

    綜上所述,SLE患者存在T細(xì)胞發(fā)育中CD4+、CD8+亞群分布紊亂和活化異常,可能通過細(xì)胞因子TGF-β、IL-10和IL-12參與SLE的發(fā)病機(jī)制。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] Aringer M,Schneider M.Systemic lupus erythematosus[J].Dtsch Med Wochenschr,2016,141(8):537-543.

    [2] Celhar T,F(xiàn)airhurst AM.Modelling clinical systemic lupus erythematosus: Similarities,differences and success stories[J].Rheumatology,2017,56(1):88-99.

    [3] Ding Y,Liao W,He XJ,et al. Effects of 1,25(OH)2 D3 and vitamin D receptor on peripheral CD4+/CD8+ double-positive T lymphocytes in a mouse model of systemic lupus erythematosus[J].J Cell Mol Med,2017,21(5):975-985.

    [4] Ugarte MF,Sánchez C,Gamboa RV,et al. Circulating CD4+CD28 null and extra-thymic CD4+CD8+ double positive T cells are independently associated with disease damage in systemic lupus erythematosus patients[J]. Lupus,2016,25(3):233-240.

    [5] Vasquez N,Wahezi D,Putterman C.Diagnostic and prognostic tests in systemic lupus erythematosus[J]. Best Pract Res Clin Rheumatol,2017,31(3):351-363.

    [6] Furie R,Wang L,Illei G,et al. Systemic lupus erythematosus(SLE) responder index response is associated with global benefit for patients with SLE[J]. Lupus,2018,27(6):955-962.

    [7] Seo W,Taniuchi I.Transcriptional regulation of early T-cell development in the thymus[J].Eur J Immunol,2016, 46(3):531-538.

    [8] Ling GS,Crawford G,Buang N,et al. C1q restrains autoimmunity and viral infection by regulating CD8+ T cell metabolism[J].Science,2018,360(6388):558-563.

    [9] Poznanski SM,Barra NG,Ashkar AA,et al. Immunometa-bolism of T cells and NK cells:Metabolic control of effector and regulatory function[J]. Inflamm Res,2018,67(10):813-828.

    [10] 路峰,吉恒東,孫華,等.T細(xì)胞亞群、IL-6、IL-18及IFN-γ水平變化與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病的相關(guān)性及可能的作用機(jī)制分析[J].中國醫(yī)學(xué)裝備,2019,16(3):95-98.

    [11] 王麗娟,托婭,白世杰,等.流式細(xì)胞術(shù)對系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人淋巴細(xì)胞亞群的檢測[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2016,38(1):128-131.

    [12] 劉暘,張曉煒,霍麗珍,等.SLE病人T淋巴細(xì)胞亞群功能紊亂的研究[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2015,37(3):225-228.

    [13] 汪瀚,翟原.天然型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在胸腺內(nèi)的分化發(fā)育機(jī)制[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2017,37(1):15-19.

    [14] 陶弋婧,趙娟娟,郭萌萌,等.天然CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在胸腺中發(fā)育的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代免疫學(xué),2015, 35(1):72-76.

    [15] Yin ZJ,Ju BM,Zhu L,et al. Increased CD4+CD25-Foxp3+ T cells in Chinese systemic lupus erythematosus:Correlate with disease activity and organ involvement[J]. Lupus,2018,27(13):2057-2068.

    [16] Maraghy N,Ghaly MS,Dessouki O,et al. CD4+CD25-Foxp3+ T cells as a marker of disease activity and organ damage in systemic lupus erythematosus patients[J]. Arch Med Sci,2018,14(5):1033-1040.

    [17] Alahgholi M,Durmus H,Aysal F,et al. The effect of interleukin(IL)-12 and CD4+ CD25++ T cells on cytokine production of CD4+ responder T cells in patients with myasthenia gravis[J].Clin Exp Immunol,2017,190(2):201-207.

    [18] 朱強(qiáng),朱明華,羅俊,等.IL-10和TGF-β-1在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中的表達(dá)及意義[J].軍事醫(yī)學(xué),2015, 39(4):276-278.

    [19] 趙凌,楊曉帆,周小斌,等.SLE患者CD4+CD25-T細(xì)胞來源的體外誘導(dǎo)型Treg細(xì)胞IL-10表達(dá)特征的初步研究[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2017,37(9):1114-1119.

    (收稿日期:2019-11-11)

    猜你喜歡
    T淋巴細(xì)胞系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機(jī)制
    人RAG2基因5′近端染色質(zhì)結(jié)構(gòu)定量差異分析及可接近區(qū)域轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制研究
    系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并妊娠繼發(fā)血小板減少1例
    肝性心肌病研究進(jìn)展
    痛風(fēng)免疫遺傳學(xué)機(jī)制研究進(jìn)展
    淺析中醫(yī)中風(fēng)病的病因病機(jī)
    霉酚酸酯與環(huán)磷酰胺治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的臨床療效觀察
    系統(tǒng)性紅斑狼瘡的臨床病理研究
    亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 免费少妇av软件| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 亚洲专区字幕在线| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 免费在线观看亚洲国产| 国产精品电影一区二区三区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲视频免费观看视频| 男女下面插进去视频免费观看| 国产麻豆69| 怎么达到女性高潮| 黄色成人免费大全| 波多野结衣av一区二区av| 久久久久久久午夜电影| 制服诱惑二区| 窝窝影院91人妻| 国产99白浆流出| 国产欧美日韩一区二区三| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲av电影不卡..在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| 村上凉子中文字幕在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久午夜亚洲精品久久| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 精品免费久久久久久久清纯| 精品久久蜜臀av无| 黑人操中国人逼视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久久久久久午夜电影| 99在线视频只有这里精品首页| 最近最新中文字幕大全电影3 | 悠悠久久av| 99热只有精品国产| 免费看十八禁软件| 久久伊人香网站| 国产精品国产高清国产av| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 一进一出抽搐动态| 看免费av毛片| 国产av一区二区精品久久| 人成视频在线观看免费观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲av成人av| 一进一出抽搐动态| 成人精品一区二区免费| 精品电影一区二区在线| 亚洲熟妇熟女久久| tocl精华| 一级毛片女人18水好多| 色哟哟哟哟哟哟| 88av欧美| 99久久国产精品久久久| 日日爽夜夜爽网站| 国产99白浆流出| 国产成年人精品一区二区| 青草久久国产| 一级毛片高清免费大全| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲av成人av| av福利片在线| 香蕉久久夜色| 日韩精品免费视频一区二区三区| a级毛片在线看网站| 亚洲国产中文字幕在线视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 男女床上黄色一级片免费看| 午夜老司机福利片| 中文字幕高清在线视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| av有码第一页| 久久草成人影院| 日韩精品中文字幕看吧| av在线播放免费不卡| 男女下面插进去视频免费观看| 校园春色视频在线观看| 9热在线视频观看99| av欧美777| 夜夜爽天天搞| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 99国产综合亚洲精品| 性欧美人与动物交配| 超碰成人久久| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美日韩精品网址| 午夜福利一区二区在线看| 国产精品久久视频播放| 91大片在线观看| 亚洲熟女毛片儿| 免费在线观看完整版高清| 国产色视频综合| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲精品在线观看二区| 久久中文字幕一级| 久久草成人影院| 亚洲色图av天堂| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 波多野结衣高清无吗| or卡值多少钱| 亚洲avbb在线观看| 国产真人三级小视频在线观看| 色综合站精品国产| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲国产精品久久男人天堂| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 露出奶头的视频| 国产区一区二久久| www日本在线高清视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 99在线视频只有这里精品首页| 真人做人爱边吃奶动态| 精品人妻1区二区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 一进一出好大好爽视频| 禁无遮挡网站| 国产1区2区3区精品| 日本五十路高清| 制服丝袜大香蕉在线| 色av中文字幕| 悠悠久久av| 嫩草影院精品99| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美不卡视频在线免费观看 | 男女下面进入的视频免费午夜 | 日本一区二区免费在线视频| 免费无遮挡裸体视频| 1024香蕉在线观看| 麻豆国产av国片精品| 久久久久久久久中文| 亚洲成人精品中文字幕电影| 午夜福利在线观看吧| 国产精品一区二区免费欧美| 此物有八面人人有两片| 一夜夜www| 日本在线视频免费播放| 精品国产亚洲在线| 久久久国产精品麻豆| 欧美黄色淫秽网站| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 日韩欧美一区视频在线观看| 一区在线观看完整版| 色综合婷婷激情| 午夜福利欧美成人| 十八禁人妻一区二区| 一级毛片女人18水好多| 男女午夜视频在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 午夜久久久久精精品| 在线观看www视频免费| 亚洲av电影在线进入| 十分钟在线观看高清视频www| 精品福利观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 久久这里只有精品19| 欧美国产精品va在线观看不卡| 啦啦啦免费观看视频1| a在线观看视频网站| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 波多野结衣高清无吗| 亚洲av熟女| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲精品国产区一区二| 成在线人永久免费视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲人成77777在线视频| 青草久久国产| 麻豆一二三区av精品| 国产精品久久久av美女十八| 国产色视频综合| 91在线观看av| 男女床上黄色一级片免费看| 精品久久久久久成人av| 国产一区二区三区视频了| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲avbb在线观看| 少妇粗大呻吟视频| 欧美激情高清一区二区三区| xxx96com| 啦啦啦免费观看视频1| 久久午夜亚洲精品久久| 中文字幕精品免费在线观看视频| www.999成人在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 黄色成人免费大全| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲精品国产色婷婷电影| 12—13女人毛片做爰片一| 免费观看人在逋| 制服人妻中文乱码| 神马国产精品三级电影在线观看 | 久久中文字幕一级| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 97碰自拍视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 咕卡用的链子| 国产精品久久久久久精品电影 | 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲一区中文字幕在线| 美女午夜性视频免费| 满18在线观看网站| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久狼人影院| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 黄色a级毛片大全视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 在线观看免费视频网站a站| 成人亚洲精品一区在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲av熟女| 欧美乱色亚洲激情| 精品一品国产午夜福利视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 黑丝袜美女国产一区| 久久性视频一级片| 国产av一区在线观看免费| 看免费av毛片| 一区二区三区激情视频| 亚洲少妇的诱惑av| 国产成人精品在线电影| 成年人黄色毛片网站| 精品午夜福利视频在线观看一区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲电影在线观看av| 久热这里只有精品99| 免费观看人在逋| e午夜精品久久久久久久| 午夜日韩欧美国产| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久久久久国产a免费观看| 婷婷丁香在线五月| 亚洲专区中文字幕在线| 中亚洲国语对白在线视频| 色综合婷婷激情| 在线免费观看的www视频| 大码成人一级视频| 国产精品综合久久久久久久免费 | 精品久久久精品久久久| 免费在线观看完整版高清| 婷婷丁香在线五月| 自线自在国产av| 免费看十八禁软件| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 黄色视频不卡| 亚洲一码二码三码区别大吗| 成人永久免费在线观看视频| 国产精品九九99| 日本三级黄在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 男人的好看免费观看在线视频 | 色综合婷婷激情| 1024香蕉在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 69精品国产乱码久久久| 久久 成人 亚洲| 久久天堂一区二区三区四区| 国产伦人伦偷精品视频| e午夜精品久久久久久久| 国产成人欧美| 欧美乱妇无乱码| www日本在线高清视频| 午夜福利免费观看在线| 制服人妻中文乱码| 亚洲国产看品久久| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 一级毛片高清免费大全| 88av欧美| 天堂影院成人在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 人人妻人人澡人人看| 亚洲欧美激情在线| 免费无遮挡裸体视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品一区二区三区四区五区乱码| 一进一出抽搐gif免费好疼| 麻豆av在线久日| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产精品二区激情视频| e午夜精品久久久久久久| 91精品国产国语对白视频| 在线视频色国产色| 青草久久国产| 又紧又爽又黄一区二区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美日本中文国产一区发布| 中文字幕久久专区| 在线免费观看的www视频| www.精华液| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 亚洲国产中文字幕在线视频| 男女下面进入的视频免费午夜 | 最新美女视频免费是黄的| 中文字幕人成人乱码亚洲影| www国产在线视频色| 亚洲精品在线观看二区| 欧美日韩福利视频一区二区| 午夜精品国产一区二区电影| 女警被强在线播放| 亚洲精品在线美女| 午夜福利在线观看吧| 日韩精品中文字幕看吧| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲一区二区三区不卡视频| 色综合站精品国产| 可以在线观看毛片的网站| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲在线自拍视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 成人18禁在线播放| 此物有八面人人有两片| 久久久精品欧美日韩精品| 多毛熟女@视频| 国产xxxxx性猛交| 国产区一区二久久| av中文乱码字幕在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 18禁观看日本| 免费无遮挡裸体视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 最好的美女福利视频网| 三级毛片av免费| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 免费在线观看黄色视频的| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产精华一区二区三区| 女同久久另类99精品国产91| 久久久久国内视频| 国产亚洲av高清不卡| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 成人手机av| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 大型av网站在线播放| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 成人三级做爰电影| 国产在线观看jvid| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产亚洲欧美98| 亚洲精品在线观看二区| 日本vs欧美在线观看视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产麻豆成人av免费视频| 男人舔女人的私密视频| 在线观看日韩欧美| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 91字幕亚洲| 免费在线观看黄色视频的| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 香蕉国产在线看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 天天添夜夜摸| 亚洲av片天天在线观看| 久久中文看片网| 首页视频小说图片口味搜索| 国产成人系列免费观看| 久久草成人影院| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 成人三级做爰电影| 国产高清激情床上av| 国产精品久久电影中文字幕| 国产91精品成人一区二区三区| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲黑人精品在线| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 美女 人体艺术 gogo| av中文乱码字幕在线| 性欧美人与动物交配| 国产xxxxx性猛交| 国产精品久久电影中文字幕| 免费在线观看完整版高清| 国内精品久久久久精免费| 日韩三级视频一区二区三区| 中文字幕高清在线视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 久久亚洲真实| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 两性夫妻黄色片| 欧美亚洲日本最大视频资源| bbb黄色大片| 此物有八面人人有两片| 亚洲成国产人片在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 多毛熟女@视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久青草综合色| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 看片在线看免费视频| 国产av精品麻豆| 欧美国产精品va在线观看不卡| 啪啪无遮挡十八禁网站| 中文亚洲av片在线观看爽| 后天国语完整版免费观看| 男人舔女人的私密视频| 国产成人欧美在线观看| 两个人免费观看高清视频| 欧美久久黑人一区二区| 99在线人妻在线中文字幕| 热re99久久国产66热| 成在线人永久免费视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 午夜福利在线观看吧| 在线观看www视频免费| 日韩有码中文字幕| 亚洲少妇的诱惑av| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲第一青青草原| 国产99久久九九免费精品| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产99白浆流出| 国产麻豆成人av免费视频| 久久久国产欧美日韩av| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美日本视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美日韩黄片免| 免费在线观看黄色视频的| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 18禁观看日本| 久久久国产成人免费| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲午夜理论影院| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 欧美亚洲日本最大视频资源| 99久久精品国产亚洲精品| 搡老岳熟女国产| 中文字幕最新亚洲高清| 女性生殖器流出的白浆| 女性被躁到高潮视频| 最近最新免费中文字幕在线| 精品国产亚洲在线| 一区在线观看完整版| 最好的美女福利视频网| 日本在线视频免费播放| 久久香蕉国产精品| 在线十欧美十亚洲十日本专区| www.www免费av| 精品电影一区二区在线| 老司机福利观看| 日韩欧美三级三区| 看黄色毛片网站| 黄频高清免费视频| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 精品日产1卡2卡| 久久精品国产清高在天天线| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久久国产精品麻豆| 搞女人的毛片| 电影成人av| 不卡一级毛片| 国产亚洲欧美98| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产1区2区3区精品| 日日干狠狠操夜夜爽| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲国产精品sss在线观看| 日本在线视频免费播放| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲av五月六月丁香网| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 精品久久久久久,| 午夜久久久久精精品| 久久久久久大精品| 成人国产综合亚洲| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲美女黄片视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| e午夜精品久久久久久久| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 丰满的人妻完整版| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产一卡二卡三卡精品| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| avwww免费| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产不卡一卡二| 精品午夜福利视频在线观看一区| 一级a爱片免费观看的视频| 中出人妻视频一区二区| 国产一区在线观看成人免费| 成人三级做爰电影| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 18禁国产床啪视频网站| 久久影院123| 99热只有精品国产| 午夜免费鲁丝| 在线免费观看的www视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 欧美日本中文国产一区发布| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲国产欧美网| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美乱色亚洲激情| 人成视频在线观看免费观看| 一级黄色大片毛片| 久久性视频一级片| 午夜视频精品福利| 国产麻豆69| 亚洲美女黄片视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 日本欧美视频一区| 大码成人一级视频| 久久狼人影院| www.熟女人妻精品国产| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 天堂√8在线中文| 窝窝影院91人妻| 亚洲人成77777在线视频| 欧美乱色亚洲激情| 日韩av在线大香蕉| 国产亚洲av高清不卡| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产精品综合久久久久久久免费 | 亚洲专区字幕在线| 男女下面插进去视频免费观看| 一二三四在线观看免费中文在| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 视频在线观看一区二区三区| 最好的美女福利视频网| 亚洲在线自拍视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产成人免费无遮挡视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲精品久久国产高清桃花| 精品国产亚洲在线| 久9热在线精品视频| 乱人伦中国视频| 99久久国产精品久久久| 久久欧美精品欧美久久欧美| 成年女人毛片免费观看观看9| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久久久精品国产欧美久久久| 黄色女人牲交| 亚洲在线自拍视频| or卡值多少钱| 岛国在线观看网站| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲精品国产区一区二| 久久九九热精品免费| 一区福利在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产欧美日韩精品亚洲av| www日本在线高清视频| bbb黄色大片| 亚洲成人国产一区在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 深夜精品福利| 激情在线观看视频在线高清| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 日韩欧美三级三区| 国产精品国产高清国产av| 精品一区二区三区四区五区乱码| 岛国视频午夜一区免费看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 麻豆国产av国片精品| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 高清毛片免费观看视频网站| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产1区2区3区精品| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美在线黄色| 亚洲午夜理论影院| 麻豆国产av国片精品| 丰满的人妻完整版| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 日本一区二区免费在线视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 岛国视频午夜一区免费看|