飯甑青岡葉的化學成分研究

戴天歌， 王亞鳳， 何瑞杰， 李典鵬， 黃永林*

(1.桂林醫(yī)學院，廣西 桂林 541004；2.廣西壯族自治區(qū)中國科學院廣西植物研究所; 廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點實驗室，廣西 桂林 541006)

殼斗科青岡屬植物飯甑青岡(Cyclobalanopsisfleuryi)又稱飯甑稠，常綠喬木，主要分布于中國和越南，生長于海拔500～1 500米的山地密林中，是我國南嶺山地代表樹種，資源豐富[1]。飯甑青岡的樹皮、殼斗中富含多酚類成分，種子中的總多酚高達14.16%，作為天然抗氧化劑，在保健品、化妝品及藥品方面具有很好的開發(fā)應用前景[2]。但是，目前對于飯甑青岡化學成分的研究還未見報道。本課題組曾對飯甑青岡同科植物中多種錐屬植物進行了詳細的化學成分研究，鑒定了黃烷-3-醇類單寧、鞣花單寧、三萜鞣花單寧、沒食子酸單寧等種類豐富的多酚類成分[3]。為了進一步研究殼斗科植物的物質(zhì)基礎(chǔ)，豐富其單寧類成分，本研究對飯甑青岡的化學成分進行了分析，從飯甑青岡葉的乙醇提取物中分離得到10個單體化合物，通過波譜數(shù)據(jù)分析并結(jié)合文獻對照鑒定了化合物結(jié)構(gòu)，以期為飯甑青岡資源的開發(fā)與利用提供理論基礎(chǔ)。

1 實 驗

1.1 原料、試劑與儀器

飯甑青岡葉于2018年9月15日采自廣西壯族自治區(qū)中國科學院廣西植物研究所內(nèi)，經(jīng)曹明研究員鑒定為殼斗科青岡屬植物飯甑青岡(Cyclobalanopsisfleuryi(Hick. et A. Camus) Chun ex Q. F. Zheng)的樹葉，憑證標本保存于廣西壯族自治區(qū)中國科學院廣西植物研究所廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點實驗室。半制備高效液相所用試劑為色譜純，其它試劑均為分析純;水為純凈水；薄層層析顯色劑為1% FeCl3-EtOH溶液。

Brucker Avance 500 MHz超導核磁共振波譜儀，瑞典Bruker公司；LC-MS/IT-TOF液相色譜-質(zhì)譜儀，日本Shimadzu公司；半制備高效液相色譜儀，北京賽譜銳思公司；自動接收儀，日本Advantec公司；F254硅膠薄層板，德國Merck公司。層析填料：Toyopearl Butyl-650C、Toyopearl HW- 40F，日本TOSOH公司；Sephadex LH-20，美國GE公司；MCI gel CHP 20P、Diaion HP20SS，日本Mistubishi Chemical公司；Chromatorex C18，日本Fuji Silysia Chemical公司。

1.2 提取與分離

新鮮飯甑青岡葉4.8 kg，切成碎片后用80%乙醇室溫浸提2次，每次30 L，每次7 d，過濾后合并濾液，減壓濃縮得到浸膏280.3 g。浸膏加水充分溶解后經(jīng)Sephadex LH-20柱層析(10.0 cm×31.0 cm)分離，用甲醇/水梯度洗脫(0～100%，每20%為一個梯度)，每一梯度2 L，經(jīng)TLC檢測合并得到8個流分Fr.1～Fr.8。

Fr.1(8.0 g)經(jīng)HP20SS柱層析得到6個流分(Fr.1.1～Fr.1.6)。其中Fr.1.5(1.4 g)經(jīng)Toyopearl HW- 40F和Sephadex LH-20柱層析分離得到化合物10(6 mg);Fr.2(56.5 g)經(jīng)HP20SS、Sephadex LH-20柱層析純化，再通過半制備高效液相制備得到化合物4(6 mg)。Fr.3(14.9 g)經(jīng)MCI gel CHP 20P柱層析得到6個流分(Fr.3.1～Fr.3.6),Fr.3.6(1.3 g)經(jīng)Sephadex LH-20、HP20SS和Toyopearl HW- 40F柱層析分離，得到化合物7和化合物9(共24 mg，混合物)。Fr.6(18.7 g)經(jīng)Diaion HP20SS柱層析得到8個流分(Fr.6.1～Fr.6.8)，F(xiàn)r.6.1(5.4 g)經(jīng)Sephadex LH-20及Toyopearl HW- 40F柱層析分離得到化合物1(52 mg)和3(11 mg);Fr.6. 4(1.0 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱層析分離得到化合物2(50 mg);Fr.6.5(2.7 g)經(jīng)Sephadex LH-20、Chromatorex C18和Toyopearl HW- 40F柱層析分離得到化合物8(10 mg)。Fr.8(12.5 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱層析得到6個流分(Fr.8.1～Fr.8.6)，F(xiàn)r.8.1(5.0 g)經(jīng)Sephadex LH-20和Toyopearl HW- 40F柱層析分離得到化合物5(34 mg)；Fr.8.6(0.6 g)經(jīng)Toyopearl Butyl- 650C及Sephadex LH-20柱層析分離得到化合物6(5 mg)。

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1～10的結(jié)構(gòu)式如圖1所示。

化合物1：白色無定形粉末；1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 7.07 (2H, s, H-2,6)；13C NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 170.4 (C-7), 146.3 (2C, C-3,5), 139.6 (C- 4), 121.9 (C-1), 110.3 (2C, C-2,6)。以上數(shù)據(jù)與文獻[4]報道對照基本一致，故鑒定化合物1為沒食子酸。

化合物2：白色無定形粉末；1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 7.05 (2H, s, H-2,6), 4.26 (2H, t,J=7.1 Hz,—OCH2), 1.33 (3H, t,J=7.1 Hz,—CH3)；13C NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 168.6 (C-7), 146.4 (2C, C-3,5), 139.6 (C- 4), 121.8 (C-1), 110.1 (2C, C-2,6), 61.7 (—OCH2), 14.6 (—CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道對照基本一致，故鑒定化合物2為沒食子酸乙酯。

化合物3：白色無定形粉末；1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 7.16 (1H, d,J=1.9 Hz, H-2), 6.91 (1H, s, H- 1′), 6.84 (1H, d,J=1.9 Hz, H- 6)；13C NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 170.0(C-7), 168.2(C-7′), 146.7 (C-3), 146.1 (C-5), 143.3 (C-5′), 140.3 (C-3′), 138.8 (2C, C- 4,4′), 133.4 (C-2′), 117.5 (C-1), 112.4 (C-1′), 110.4 (C-2), 109.8 (C- 6′), 109.6 (C- 6)。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]報道對照基本一致，故鑒定化合物3為脫氫雙沒食子酸。

圖1 化合物1～10結(jié)構(gòu)式Fig.1 The structures of compounds 1-10

化合物4：白色無定形粉末；1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 7.54 (1H, d,J=3.1 Hz, H- 6), 7.09 (1H, dd,J=8.8, 3.1 Hz, H- 4), 6.78 (1H, d,J=8.8 Hz, H-3), 4.80 (1H, d,J=7.2 Hz, H-1′), 3.95 (1H, dd,J=11.5, 5.4 Hz, H- 6′- a), 3.61 (1H, m, H-5′), 3.36～3.47 (4H, m, H-2′, 3′, 4′, 6′- b)；13C NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 172.7 (C-7), 158.2 (C-2), 150.4 (C-5), 124.0 (C- 4), 119.3 (C-3), 117.7 (C- 6), 114.4 (C-1), 103.8 (C-1′), 77.7 (C-3′), 77.1 (C-5′), 74.4 (C-2′), 70.7 (C- 4′), 66.6 (C- 6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道對照基本一致，故鑒定化合物4為龍膽酸-5-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物5：白色無定形粉末；1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 7.12 (2H, s, H-2″,6″), 6.41 (2H, s, H-2,6), 4.64 (1H, dd,J=8.2, 3.8 Hz, H-7), 4.42 (1H, m, H-1′), 3.89 (1H, dd,J=2.2， 8.0 Hz， H- 6′- a), 3.75 (1H, dd,J=4.4， 8.2 Hz,H- 6′- b), 3.50 (4H, m, H-2′, 3′, 4′, 5′)；13C NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 168.3 (C-7″), 151.2 (2C, C-3,5), 146.4 (2C, C-3″,5″), 140.8 (C- 4″), 139.9 (C-1), 133.6 (C- 4), 121.3 (C-1″), 110.5 (2C, C-2″,6″), 107.8 (2C, C-2,6), 107.3 (C-1′), 77.5 (C-3′), 76.5 (C-5′), 74.8 (C-2′), 71.2 (C- 4′), 64.9 (C-7), 64.4 (C- 6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道對照基本一致，故鑒定化合物5為克列鞣質(zhì)(cretanin)。

化合物6：白色無定形粉末；1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 8.08 (2H, d,J=9.0 Hz, H-2′, 6′), 6.91 (2H, d,J=9.0 Hz, H-3′, 5′), 6.81 (1H, m, H-3), 6.40 (1H, d,J=2.1 Hz, H-8), 6.18 (1H, d,J=2.0 Hz, H- 6)；13C NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 181.7 (C- 4), 164.2 (C-2), 162.6 (C-7), 161.1 (C- 4′), 159.2 (C-5), 156.9 (C-9), 129.3 (2C, C-2′, 6′), 122.4 (C-1′), 115.0 (2C, C-3′, 5′), 103.2 (C-10), 102.1 (C- 3), 97.9 (C- 6), 93.1 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道對照基本一致，故鑒定化合物6為5, 7, 4′-三羥基黃酮(芹菜素)。

化合物7：黃色結(jié)晶；1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 8.12 (2H, d,J=8.9 Hz, H-2′, 6′), 6.91 (2H, d,J=8.9 Hz, H-3′, 5′), 6.77 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.46 (1H, d,J=2.0 Hz, H- 6), 5.06 (1H, d,J=7.3 Hz, H-1″), 3.94 (1H, dd,J=12.1, 2.3 Hz, H- 6″-a), 3.72 (1H, dd,J=12.3, 5.8 Hz, H- 6″-b), 3.36～3.57 (4H, m, H-2″, 3″, 4″, 5″)；13C NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 177.5 (C- 4), 164.7 (C-7), 162.1 (C-5), 160.7 (C- 4′), 157.7 (C-9), 148.9 (C-2), 137.5 (C-3), 130.9 (2C, C-2′, 6′), 123.6 (C-1′), 116.4 (2C, C-3′, 5′), 106.3 (C-10), 101.7 (C-1″), 100.3 (C- 6), 95.7 (C-8), 78.3 (C-3″), 77.9 (C-5″), 74.8 (C-2″), 71.3 (C- 4″), 62.5 (C- 6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道對照基本一致，故鑒定化合物7為山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物8：黃色無定形粉末；1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 6.96 (1H, d,J=1.9 Hz, H-2′), 6.84 (1H, dd,J=8.2, 1.9 Hz, H-6′), 6.81 (1H, d,J=8.2 Hz, H-5′), 5.92 (1H, d,J=2.1 Hz, H-8), 5.90 (1H, d,J=2.1 Hz, H-6), 5.07 (1H, d,J=10.7 Hz, H-2), 4.57 (1H, d,J=10.7 Hz, H-3), 4.25 (1H, dd,J=9.6, 6.2 Hz, H-5″), 4.06 (1H, d,J=1.7 Hz, H-1″), 3.67 (1H, dd,J=9.6, 3.3 Hz, H-3″), 3.55 (1H, dd,J=3.3, 1.7 Hz, H-2″), 3.34 (1H, m, H- 4″), 1.19 (3H, d,J=6.2 Hz, H- 6″)；13C NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 195.9 (C- 4), 168.6 (C-7), 165.5 (C-5), 164.1 (C-9), 147.3 (C-3′), 146.5 (C- 4′), 129.2 (C-1′), 120.5 (C-6′), 116.4 (C-5′), 115.5 (C-2′), 102.5 (C-10), 102.1 (C-1″), 97.4 (C- 6), 96.3 (C-8), 83.9 (C-2), 78.6 (C-3), 73.8 (C- 4″), 72.2 (C-3″), 71.8 (C-2″), 70.5 (C-5″), 17.8 (C- 6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道對照基本一致，故鑒定化合物8為花旗松素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(落新婦苷)。

化合物9：黃色粉末；1H NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 7.36 (2H, d,J=8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.83 (2H, d,J=8.6 Hz, H-3′, 5′), 6.22 (1H, d,J=2.2 Hz, H-8), 6.19 (1H, d,J=2.2 Hz, H- 6), 5.00 (1H, d,J=11.9 Hz, H-2), 4.96 (1H, d,J=7.4 Hz, H-1″), 4.59 (1H, dd,J=11.9 Hz, H-3), 3.87 (1H, dd,J=12.1, 2.1 Hz, H- 6″-a), 3.68 (1H, dd,J=12.1, 5.4 Hz, H- 6″-b), 3.36～3.47 (4H, m, H-2″, 3″, 4″, 5″);13C NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 199.4 (C- 4), 167.3 (C-7), 164.7 (C-9), 164.2 (C-5), 159.2 (C- 4′), 130.4 (2C, C-2′, 6′), 129.1 (C-1′), 116.2 (2C, C-3′, 5′), 103.5 (C-10), 101.3 (C-1″), 98.3 (C- 6), 97.0 (C-8), 85.1 (C-2), 78.2 (C-5″), 77.8 (C-3″), 74.6 (C-2″), 73.8 (C-3), 71.2 (C- 4″), 62.3 (C- 6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]報道對照基本一致，故鑒定化合物9為香橙素-7-O-β-吡喃葡萄糖苷。

化合物10：白色無定形粉末；1H NMR (500 MHz, 丙酮-d6)δ: 6.70 (2H, s, H-2, 6), 5.13 (1H, d,J=10.4 Hz, H-7), 4.85 (1H, d,J=1.6 Hz, H- 4′), 4.20 (1H, m, H-5′), 3.80 (2H, dd,J=12.0, 6.5 Hz, H- 6′-a), 3.73 (1H, dd,J=12.0, 6.5 Hz, H- 6′-b), 3.71 (6H, s, 3,5-OCH3), 3.59 (1H, m, H-9-a), 3.23 (1H, m, H-9-b), 2.54 (1H, m, H-7)；13C NMR (125 MHz, 丙酮-d6)δ: 175.1 (C-1′), 148.4 (2C, C-3,5), 136.0 (C- 4), 129.3 (C-1), 117.1 (C-3′), 104.7 (2C, C-2,6), 89.7 (C- 4′), 85.6 (C-7), 80.9 (C-2′), 74.4 (C- 6′), 74.0 (C-5′), 57.1 (C-9), 56.5 (2C, 3,5-OCH3), 56.2 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]報道對照基本一致，故鑒定化合物10為苦竹素A。

2.2 討論

植物多酚類物質(zhì)具有水溶性極強、穩(wěn)定性差等特性，在植物中其含量僅次于纖維素、半纖維素和木質(zhì)素[4]?，F(xiàn)代醫(yī)學研究已經(jīng)證明，很多疾病都與過剩的自由基有關(guān)，植物多酚通過清除自由基，對自由基誘發(fā)的生物大分子損傷起到保護作用，維持細胞膜的流動性和蛋白質(zhì)的構(gòu)型構(gòu)象，防止輻射誘發(fā)的DNA斷裂，具有明顯的抗突變(如茶多酚)、抗癌(如鞣花酸、石榴寧)等功效[14-17]。本研究發(fā)現(xiàn)，飯甑青岡葉中含有沒食子酸、酚苷、黃酮等多酚類成分，因而飯甑青岡葉具有開發(fā)成美白、抗氧化、防衰老等功能性產(chǎn)品的潛力。

3 結(jié) 論

利用Sephadex LH-20、MCI gel CHP 20P、Toyopearl HW- 40F、Chromatorex C18等多種柱層析和半制備高效液相色譜分離技術(shù)，對飯甑青岡樹葉80%乙醇提取物進行分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定，首次從殼斗科青岡屬植物飯甑青岡樹葉中分離并鑒定了10個單體化合物，分別為沒食子酸(1)、沒食子酸乙酯(2)、脫氫雙沒食子酸(3)、龍膽酸-5-O-β-D-葡萄糖苷(4)、克列鞣質(zhì)(cretanin，5)、芹菜素(6)、山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(7)、落新婦苷(8)、香橙素-7-O-β-吡喃葡萄糖苷(9)和苦竹素A(10)。所有化合物均為首次從飯甑青岡植物中分離得到。