一種保健功能青紅酒30天喂養(yǎng)試驗研究

朱賁峰 趙 立 闞永軍 胡 娟,2

1. 福建省中醫(yī)藥研究院，福建 福州 350003；2. 福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建 福州 350003

藥酒在我國有著悠久的歷史，以酒為載體，利用酒的辛溫行散之性，以達(dá)到通經(jīng)活絡(luò)、暢通血脈、活血散瘀、祛風(fēng)散寒、健脾胃、提精神，以達(dá)引藥上行、助藥物之力的功效。保健酒不同于藥酒，其特點以健體、養(yǎng)生為目的，在滿足消費者嗜好的同時對身體狀態(tài)進(jìn)行調(diào)節(jié)。藥酒用于對疾病的治療，而保健酒則重在對疾病的預(yù)防[1]。

以米粉、米糠、白粉土為基礎(chǔ)配方，加入茯苓、當(dāng)歸、白芷、丁香、柴胡、藿香等數(shù)十味中藥制成藥白曲，并與黃精共同發(fā)酵，研制一款黃精青紅酒。其富含粗多糖和總黃酮等功效成分[2]，具有緩解體力疲勞[3]、輔助降血糖之功效。

本文依據(jù)保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范，進(jìn)行30天喂養(yǎng)試驗，通過檢測白細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白、中性粒細(xì)胞等血液學(xué)指標(biāo)，觀察黃精青紅酒對大鼠造血系統(tǒng)和功能的影響；通過檢測轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白、尿素氮、肌酐、血脂、血糖等血液生化指標(biāo)，觀察黃精青紅酒對大鼠肝、腎損傷及代謝系統(tǒng)的影響。對產(chǎn)品進(jìn)行安全性評價[4]。

1 材料和方法

1.1 樣品 黃精青紅酒，棕黃色液體，澄清透明、無肉眼可見的雜質(zhì)、久置后允許有少量沉淀物，成品酒精濃度(14±1)% vol。樣品常溫保存，樣品標(biāo)示保質(zhì)期24個月，成人人體推薦劑量100 mL/人/日(以60 kg體重計)，因人體推薦劑量大，本實驗室使用為60℃減壓濃縮方法，將受試樣品濃縮為15倍濃縮液作為本次實驗受試樣品，折算成成人人體推薦劑量為6.67 mL/人/日。

1.2 實驗動物 SPF離乳SD大鼠80只，雌雄各半。按體重隨機(jī)分為對照組、高、中、低劑量共4組，每組20只，雌、雄各半。雌性動物初始體重為70～85 g；雄性動物初始體重為74～90 g。

1.3 劑量選擇與受試物給予方式 設(shè)3.33、7.23、11.12 mL/(kg·bw)(低、中、高)三個劑量組，分別相當(dāng)于人體推薦劑量的30、65、100倍。另設(shè)一個溶劑對照為0 mL/kg·bw。15倍濃縮液用50%(v/v)的酒基配制，調(diào)整各劑量組乙醇濃度最終為15%(v/v)。高劑量組用15倍濃縮液11.12 mL+50%(v/v)的酒基6 mL+無菌水2.88 mL，中劑量組用15倍濃縮液7.23 mL+50%(v/v)的酒基6 mL+無菌水6.77 mL，低劑量組用15倍濃縮液3.33 mL+50%(v/v)的酒基6 mL+無菌水10.67 mL，溶劑對照組用50%(v/v)的酒基6 mL+無菌水14 mL，灌胃量為20 mL/ (kg·bw)。

1.4 主要儀器 電子天平、離心機(jī)、全自動生化分析儀、血液分析儀等。

2 試驗方法

各組動物給予基礎(chǔ)飼料，供試品連續(xù)灌胃30天后，禁食隔夜，逐只稱重，10%水合氯醛按3.5 mL/(kg·bw)腹腔注射麻醉，腹主動脈取血測其血液學(xué)指標(biāo)和血液生化指標(biāo)。

2.1 一般情況觀察 每天觀察并記錄動物的一般表現(xiàn)、行為、中毒表現(xiàn)和死亡情況。

2.2 體重 每周稱1次體重，觀察每周體重變化情況。

2.3 血液學(xué)指標(biāo) 取大鼠全血用血液分析儀測定其血紅蛋白含量、紅細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)及其分類等。

2.4 血液生化指標(biāo) 取大鼠血清，用全自動生化分析儀測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、白蛋白、總膽固醇、尿素氮、肌酐、血糖、甘油三酯等。

2.5 統(tǒng)計分析 用SPSS軟件對各實驗原始數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。各項指標(biāo)進(jìn)行方差齊性檢驗，不滿足方差齊要求，用秩和檢驗進(jìn)行統(tǒng)計處理；用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計處理，P﹤0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果與討論

3.1 一般觀察 各組動物一般表現(xiàn)和行為均未見明顯異常、無中毒表現(xiàn)、無死亡。

3.2 黃精青紅酒對大鼠體重的影響 雌、雄性大鼠第0天體重各劑量組與0 mL/(kg·bw)/d組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，即試驗前大鼠的體重在各組間較為均衡。

3.3 黃精青紅酒對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響 大鼠灌胃不同劑量的黃精青紅酒30天，測定血液紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白水平、白細(xì)胞計數(shù)及其分類等指標(biāo)。各項指標(biāo)進(jìn)行方差齊性檢驗，均滿足方差齊要求，用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計處理。由表1、表2可見，各項指標(biāo)各劑量組與空白對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

性別劑量/[mL/(kg·bw)/d]動物數(shù)/只白細(xì)胞計數(shù)/×109/L紅細(xì)胞計數(shù)/×1012/L血紅蛋白/g/L雌0107.0±1.87.1±0.4138±53.33108.1±1.17.1±0.4142±77.23107.6±1.37.2±0.3137±511.12108.2±1.47.2±0.3140±7雄0109.0±1.27.4±0.2147±53.33108.6±1.57.4±0.3150±47.23107.4±3.17.5±0.3150±511.12109.9±2.37.2±0.3146±4

性別劑量/[mL/(kg·bw)/d]動物數(shù)/只淋巴細(xì)胞/%中性細(xì)胞/%單核細(xì)胞/%嗜酸性細(xì)胞/%嗜堿性細(xì)胞/%雌01085.3±3.010.6±2.93.0±0.60.5±0.20.2±0.13.331085.3±2.910.5±2.93.0±0.70.6±0.10.1±0.17.231086.4±2.510.0±2.82.5±0.80.4±0.20.1±0.111.121087.3±2.68.5±2.12.8±0.90.6±0.20.1±0.1雄01085.3±3.210.5±2.52.9±0.80.6±0.20.2±0.13.331084.7±3.110.9±2.63.2±1.30.5±0.10.2±0.17.231084.2±8.711.4±7.83.0±1.20.6±0.20.2±0.411.121083.9±4.011.8±3.32.8±1.00.7±0.70.2±0.1

3.4 黃精青紅酒對大鼠血液生化指標(biāo)的影響 大鼠灌胃不同劑量的黃精青紅酒30天，測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、白蛋白、總膽固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐及血糖的水平。各項指標(biāo)進(jìn)行方差齊性檢驗，雌性大鼠谷草轉(zhuǎn)氨酶不滿足方差齊要求，用秩和檢驗進(jìn)行統(tǒng)計處理；其它指標(biāo)均滿足方差齊要求，用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計處理。由表3、表4可見，雄性大鼠7.23 mL/kg·bw/d組總膽固醇低于空白對照組 (P<0.05)。此項雖有統(tǒng)計學(xué)差異，但數(shù)值在正常值范圍內(nèi)，且無劑量-反應(yīng)關(guān)系，不認(rèn)為具有不良生物學(xué)意義。其它各劑量組各項血液生化指標(biāo)與空白對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

性別劑量/[mL/(kg·bw)/d]動物數(shù)/只谷丙轉(zhuǎn)氨酶/U/L谷草轉(zhuǎn)氨酶/U/L總蛋白/g/L白蛋白/g/L雌01034±6120±4252.4±1.834.1±1.23.331033±4131±854.3±2.234.7±1.37.231031±2115±1253.5±2.134.5±1.111.121030±6118±952.4±1.933.8±0.8雄01045±10146±2351.9±1.333.4±0.73.331041±5142±2251.4±2.733.1±1.67.231039±9139±1953.1±2.133.9±1.311.121041±6147±3052.2±2.633.0±1.4

性別劑量/[mL/(kg·bw)/d]動物數(shù)/只尿素氮/mmol/L肌酐/μmol/L總膽固醇/mmol/L甘油三酯/mmol/L血糖/mmol/L雌0107.14±1.6935±91.94±0.180.38±0.066.78±1.163.33107.69±1.9537±81.80±0.330.32±0.046.59±0.407.23106.15±0.7931±41.86±0.210.34±0.056.47±0.4811.12107.09±1.1432±41.71±0.250.35±0.046.08±0.71雄0105.60±0.8730±61.36±0.280.52±0.196.35±0.773.33105.54±1.0631±41.24±0.110.49±0.086.99±0.557.23104.84±0.6028±51.15±0.14*0.65±0.175.24±1.0511.12105.40±0.5031±41.25±0.180.57±0.146.40±1.54

注：與0g/(kg·bw)/d比較，*P﹤0.05。

4 結(jié)論

黃精青紅酒以3.33 mL/(kg·bw)/d、7.23 mL/(kg·bw)/d、11.12 mL/(kg·bw)/d(相當(dāng)于人體推薦量的30倍、65倍、100倍)的劑量給予大鼠30天，受試動物一般情況良好，體重?zé)o異常改變；血液學(xué)指標(biāo)及生化指標(biāo)結(jié)果顯示，各項指標(biāo)均在正常值范圍內(nèi)。30天喂養(yǎng)試驗，給予動物人體推薦劑量100倍的黃精青紅酒，未觀察到有害作用。