生物檢材中氯胺酮的代謝分布與前處理方法研究

摘 要：氯胺酮本是作為一種麻醉劑，在各種小手術(shù)或診斷操作時(shí)作麻醉用。然而也因此和甲基苯丙胺成為國內(nèi)濫用廣泛的毒品?？焖?、準(zhǔn)確、便利的檢測(cè)方法對(duì)醫(yī)學(xué)研究、打擊犯罪、完善證據(jù)等方面有著重大意義。本文對(duì)目前已有的生物檢材中氯胺酮的分布及前處理方法等進(jìn)行歸納和綜述，并對(duì)新的技術(shù)進(jìn)行了介紹。

關(guān)鍵詞：法醫(yī)毒物學(xué);氯胺酮;分布;前處理

Abstract：ketamine was originally used as an anesthetic in various small operations or diagnostic operations. However， methamphetamine and methamphetamine have been widely abused in China. Rapid， accurate and convenient detection methods are of great significance in medical research， crime fighting and evidence improvement. In this paper， the distribution and pretreatment of ketamine in biological samples were summarized， and the new technology was introduced.

Keywords：forensic toxicology;ketamine;distribution;pretreatment

0 引言

氯胺酮（Ketamine），即K他命，我國部分地區(qū)又稱之為“K粉”。原為苯環(huán)己哌啶的衍生物，用以代替苯環(huán)己哌啶（PCP）從而消除其作為麻醉劑產(chǎn)生的精神性副作用，成為一種新型的麻醉劑。在臨床使用時(shí)，常發(fā)現(xiàn)患者因使用氯胺酮產(chǎn)生幻覺、惡心、情緒不安等副作用，長(zhǎng)期使用也會(huì)讓患者產(chǎn)生精神依賴性[1]。氯胺酮目前在我國濫用趨勢(shì)依然嚴(yán)峻，在這一趨勢(shì)下加強(qiáng)對(duì)氯胺酮的管制和檢測(cè)方法具有重要意義。在過去的幾十年中，研究者開發(fā)了各種分析方法檢測(cè)氯胺酮，包括液相色譜（HPLC）、液相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用法（HPLC-MS）、毛細(xì)管電泳法法、氣相色譜法、氣相色譜--質(zhì)譜聯(lián)用法、酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)法等。

1 氯胺酮人體不同部位的代謝分布狀況

1.1 毛發(fā)中氯胺酮的分布

實(shí)驗(yàn)證明[2-3]，長(zhǎng)期規(guī)律服用氯胺酮（18-20mg/天），便能在毛發(fā)中檢測(cè)到氯胺酮及其代謝物，檢測(cè)結(jié)果按濃度高低依次為脫氫去甲氯胺酮、去甲氯胺酮以及氯胺酮等。如果吸食量減少到2-5mg/天，結(jié)果在毛發(fā)中依然能檢測(cè)到上述三種物質(zhì)。且在毛發(fā)的不同節(jié)段均能檢測(cè)出氯胺酮的存在。實(shí)驗(yàn)結(jié)果能反映出氯胺酮的濫用史，因此現(xiàn)在越來越多的將毛發(fā)作為濫用藥物分析非常重要的檢驗(yàn)材料之一。

1.2 組織中氯胺酮的代謝分布情況

氯胺酮在體內(nèi)起效快[4]，靜脈注射后1min、肌肉注射后5min，血漿中藥物濃度達(dá)到峰值。其進(jìn)入血循環(huán)后大部分進(jìn)入腦組織，然后再分布于全身組織中，主要在肝內(nèi)生物轉(zhuǎn)化成去甲氯胺酮，再經(jīng)脫氫代謝為脫氫去甲氯胺酮。氯胺酮及其兩種代謝物又可進(jìn)行進(jìn)一步的羥基化，形成葡萄糖酸結(jié)合物，最后通過腎臟代謝排出。由于其代謝迅速，有研究表明[5]攝入氯胺酮后同一時(shí)間點(diǎn)內(nèi)各個(gè)組織中的去甲氯胺酮濃度都高于氯胺酮濃度，在腎、脾、肝、尿液、腦中尤其明顯，另一份研究表明[6]大多數(shù)組織在給藥15min后達(dá)到氯胺酮最高濃度，濃度由高到低是肝、腎、腦、心肺和血漿。

1.3 體液中氯胺酮的分布

研究表明[7-8]，氯胺酮進(jìn)入人體后經(jīng)肝臟代謝等過程形成葡萄糖酸的結(jié)合物，85%通過腎臟排泄，4%以原形或去甲氯胺酮排出，4%經(jīng)糞便排出。

72h后，仍能在尿中檢出氯胺酮及其代謝物去甲氯胺酮和脫氫去甲氯胺酮。故尿液也常作為氯胺酮濫用檢測(cè)的檢材之一。

2 氯胺酮的前處理方法

根據(jù)上述氯胺酮的分布情況，在大部分檢測(cè)方法下，檢材都需要進(jìn)行提取濃縮或凈化過程。主要有液液萃取、固相萃取、固相微萃取等。

2.1 液液萃取

根據(jù)研究表明[9-11]，氯胺酮脂溶性較強(qiáng)，易被乙醚、二氯甲烷等溶劑萃取，且萃取劑較易揮發(fā)，姚麗娟[12]等在人用血液檢測(cè)進(jìn)行提取時(shí)，加入pH10.8的緩沖液調(diào)節(jié)pH。文云波[13]等用10%碳酸鈉調(diào)節(jié)尿液檢材的pH。

崔連義[14]介紹了毛發(fā)毒物通過消解的方式釋放其中包含的毒物成分，再通過液液萃取的方式對(duì)目標(biāo)組分進(jìn)行提取。大部分方法[9-14]均通過萃取劑萃取調(diào)節(jié)好pH的檢材樣品后，通過渦旋萃取后，取萃取層進(jìn)行加熱氮吹富集。氯胺酮液液萃取法的回收率一般均高于85%[9-14]。

2.2 固相萃取

固相萃?。⊿PE）是70年代中期出現(xiàn)的技術(shù)，由液固萃取柱和柱液相色譜技術(shù)相結(jié)合。具有設(shè)備簡(jiǎn)單，處理便捷高效、靈活的一種前處理方法。

蘇少明[15]等人用C18固定相柱成功檢驗(yàn)了胃、尿、肝等實(shí)際案件的樣品，利用GC-NPD法測(cè)得的回收率為87.2%。

陳楠[16]使用C18固相柱檢測(cè)尿液中氯胺酮及其代謝物，此法較易取出尿液中的親水雜質(zhì)和色素。

Netto J D[17]等人采用含水性表面和疏水性核心的萃取柱對(duì)人血漿中的氯胺酮進(jìn)行萃取，結(jié)果顯示其檢測(cè)限位1ng/mL，線性范圍為1～100μg/mL。

2.3 固相微萃取

固相微萃?。⊿PME）是一種無溶劑樣品預(yù)處理技術(shù)，發(fā)展于20世紀(jì)90年代。具有方法簡(jiǎn)便快速、靈敏度高，選擇性好，成本低廉等優(yōu)勢(shì)。

莊劍波[18]等人以65μm CW/DVB作為萃取頭，萃取45min做前處理手段獲得較理想的分析效果，最小檢出限為5μg/L。

廖錦煜[19]等用聚二甲基硅氧烷SPME萃取頭頂空萃取20min，用氣相色譜NPD檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量，結(jié)果平均回收率102.6%檢出限1.13ng/mL。

2.4 其他前處理技術(shù)介紹

徐代化[20]等利用超臨界二氧化碳萃取（SFE）技術(shù)，結(jié)合高效液相--串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定毛發(fā)中11中常見精神藥物（包含氯胺酮），通過將剪碎的毛發(fā)樣品在優(yōu)化的SFE條件下萃取，提取液經(jīng)氮吹濃縮，以甲醇定容至100μL后，進(jìn)行HPLC-MS/MSceding。結(jié)果表明，氯胺酮的在2～200ng/mL的范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)大于0.999。

王瑩瑩[21]等基于超聲霧化聯(lián)用快速氣相色譜--聲表面波傳感器檢測(cè)的方式，利用電子的高頻震蕩，將檢材液體結(jié)構(gòu)打散形成氣霧狀，經(jīng)過霧化腔體的帶動(dòng)，進(jìn)入快速氣相色譜及聲表面波傳感器部分，達(dá)到快速檢測(cè)的目的。該法前處理操作簡(jiǎn)單，操作員無需專業(yè)訓(xùn)練。整個(gè)檢測(cè)過程從開始到得出結(jié)論僅需要1min即可完成。

Nathalie A.Desrosiers[22]等利用微波輔助萃取法，將目標(biāo)物轉(zhuǎn)移至介電常數(shù)小、微波吸收能力差的萃取劑中達(dá)到萃取的目的。該方法主要用于骨骼樣本的半定量分析。

另外還有中空纖維膜液相微萃取技術(shù)、分散液相微萃取、液液液三相液相微萃取技術(shù)等針對(duì)不同的生物檢材采取不同的提取凈化手段。

3 結(jié)論

隨著科技水平的不斷進(jìn)步，越來越多的檢測(cè)方法層出不窮，但是無可避免的是生物檢材基質(zhì)復(fù)雜，干擾因素大，含量低等因素限制，檢測(cè)技術(shù)更新?lián)Q代從原來的液相氣相、到現(xiàn)在較為常用的液質(zhì)聯(lián)用方法。科研工作者應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件，方法和目的，生物檢材類型等選擇適宜的方法進(jìn)行考察分析做出選擇，才能更好的完成實(shí)驗(yàn)。

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作者簡(jiǎn)介：

陳旭東（1982- ），男，本科，中級(jí)工程師，從事工作為痕跡鑒定、微量物證鑒定司法鑒定。