腫痛熏洗液聯(lián)合馬應(yīng)龍痔瘡膏對(duì)大鼠肛門直腸潰瘍模型相關(guān)炎性因子的調(diào)控作用研究

蔣青峰 李五生* 王勤莎 馮予希

（西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院肛腸科，四川 瀘州 646000）

由NF-κB信號(hào)通路及其介導(dǎo)的相關(guān)炎性因子參與全身多器官組織的炎性反應(yīng)[1-4]。大多數(shù)急性肛腸疾病及肛腸疾病術(shù)后，非特異性炎性反應(yīng)是誘發(fā)局部腫痛癥狀的原因之一，目前臨床上針對(duì)這一問(wèn)題的解決辦法較為有限，且多數(shù)西醫(yī)干預(yù)措施存在不良反應(yīng)多、價(jià)格高昂等弊端，因此開(kāi)發(fā)有效地中醫(yī)藥治療方案是很有必要的。在前期臨床觀察中，我們發(fā)現(xiàn)腫痛熏洗液可明顯減輕肛門疾病術(shù)后肛門墜脹及疼痛不適[5]，且在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中初步論證其鎮(zhèn)痛機(jī)制為上調(diào)IL-10，降低PGE2及NO水平[6]。

本研究通過(guò)建立肛門直腸潰瘍模型替代肛腸疾病術(shù)后狀態(tài)，探討通過(guò)腫痛熏洗液及馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏對(duì)NF-κB信號(hào)通路介導(dǎo)的相關(guān)炎性因子血清水平影響，以進(jìn)一步證實(shí)其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物：清潔級(jí)健康雄性SD大鼠42只，體質(zhì)量180～220 g，飼養(yǎng)于西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[自然光照明、濕度（60±10）%、溫度（20±2）℃]，自有攝食飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材：手術(shù)刀、電子天平、數(shù)顯式電熱恒溫水浴鍋（常州諾基儀器有限公司）、離心機(jī)（上海艾研生物科技有限公司）、EP管、酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Rad公司）、37 ℃恒溫箱、移液槍及槍頭。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑：腫痛熏洗液（由西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供）、馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏（馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司 國(guó)藥準(zhǔn)字Z42021920）、0.9%氯化鈉注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司）、水合氯醛（天津市大茂化學(xué)試劑廠）、冰乙酸（實(shí)驗(yàn)室代購(gòu)）、大鼠（Rat）白細(xì)胞介素6（IL-6）、環(huán)氧合酶2（COX-2）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測(cè)試劑盒（以上試劑盒均購(gòu)于上海橋杜生物技術(shù)有限公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 麻醉：將水合氯醛與0.9%氯化鈉注射液稀釋成10%水合氯醛溶液，根據(jù)大鼠體質(zhì)量按250 mg/kg計(jì)算所需藥量，將總藥量1/3行腹腔注射后1 min觀察大鼠麻醉情況，若大鼠無(wú)意識(shí)則不再追加，若大鼠仍可活動(dòng)則繼續(xù)按總量1/3追加，最大劑量為所計(jì)算總量。

1.4.2 造模：麻醉顯效后，用手術(shù)剪刀在齒線后正中線附近做一長(zhǎng)約2 cm、寬約1 cm梭形切口，上達(dá)末斷直腸，下至肛門皮膚，充分止血后用棉簽蘸取冰醋酸涂抹于傷口，以紅腫超過(guò)潰瘍面＞10 mm，伴有大量炎性滲出，潰瘍面＞200 mm2為造模成功標(biāo)志。

1.4.3 給藥：A、B組予腫痛熏洗液25 mL/kg在恒溫水浴過(guò)內(nèi)熏洗20 min[溫度為（37.0±1.0）℃]，每天2次；D組同法與25 mL/kg生理鹽水熏洗；A、C組用0.18 g/kg馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏涂抹于潰瘍面。以上各組按上述方法連續(xù)用藥3 d。

1.4.4 標(biāo)本采集：心臟采血2～3 mL置于EP管中，4 ℃冰箱過(guò)夜，3000 r/min高速離心機(jī)離心10 min，移液槍移取上清液待行ELISA檢測(cè)。

1.4.5 指標(biāo)檢測(cè)：按試劑盒說(shuō)明書(shū)行IL-6、COX-2、TNF-α水平檢測(cè)，在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS21.0軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

A、B、C、D、E組血清IL-6、COX-2、TNF-α水平均高于F組（P＜0.05），A、B、C組均可下調(diào)血清IL-6、COX-2、TNF-α水平，但A組最顯著。見(jiàn)表1。

3 討論

多項(xiàng)研究表明，通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路活性可降低其下游炎性因子TNF-α等的表達(dá)從而減輕如乙酸所致的炎性反應(yīng)[9-10]。手術(shù)創(chuàng)傷導(dǎo)致肛門良性疾病術(shù)后局部腫痛多為非特異性炎癥，與NF-κB信號(hào)通路及其下游致炎因子關(guān)系密切，因而抑制NF-κB信號(hào)通路活化、降低血清IL-6、COX-2、TNF-α等的釋放是解決這一問(wèn)題的辦法之一。

腫痛熏洗液為我院李五生教授多年運(yùn)用于臨床的經(jīng)驗(yàn)方，全方以黃連解毒湯組成藥物（黃連、黃柏、黃芩、梔子）為君藥，以白頭翁、紫花地丁、敗醬草為臣藥，加強(qiáng)君藥之清熱解毒的功效，以苦參、白芷、秦皮為臣藥，以生大黃、當(dāng)歸為佐助藥，以肉桂為反佐藥，以木香為使。諸藥合用，共湊清熱燥濕，瀉火解毒，活血化瘀，消腫止痛的作用[6]。本研究表明，腫痛熏洗液可降低肛門直腸潰瘍模型大鼠血清IL-6、COX-2、TNF-α含量，腫痛熏洗液聯(lián)合馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏最為顯著，這可能是其減輕肛門疾病術(shù)后腫痛的原因之一，為該藥廣泛運(yùn)用于臨床提供了理論基礎(chǔ)。

表1 各組大鼠IL-6、COX-2、TNF-α水平比較（±s）

表1 各組大鼠IL-6、COX-2、TNF-α水平比較（±s）

注：a：與A組比較P＜0.05，b：與B組比較P＜0.05，c：與C組比較P＜0.05，d：與D組比較P＜0.05，e：與E組比較P＜0.05