不同方法調(diào)整血小板數(shù)量對血小板聚集功能檢測的影響

劉麗芬，蘇潔慧、張海林

（惠州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 惠州 516001）

血小板功能檢測在臨床相關(guān)疾病的治療中已被廣泛應(yīng)用，通過該項(xiàng)目檢測，能夠?yàn)槌鲅约膊〉脑\斷，以及抗血小板藥物的治療使用提供有效參考[1]。從目前臨床血小板功能檢測的現(xiàn)狀來看，光投射血小板聚集檢測屬于“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是有研究指出該標(biāo)準(zhǔn)并非使用所用人群，因?yàn)榭赡懿糠值貐^(qū)人群血小板數(shù)量正常情況下不足200-250×109/L的標(biāo)準(zhǔn)范圍，并且隨著臨床檢驗(yàn)水平的不斷提高，部分實(shí)驗(yàn)室證實(shí)富血小板血漿中血小板數(shù)量＞100×109/L時(shí)即可進(jìn)行血小板聚集功能檢測[2]。傳統(tǒng)方法對富血小板血漿中的血小板數(shù)量進(jìn)行調(diào)整，往往采用自身乏血小板血漿調(diào)整方方法，近年來有研究發(fā)現(xiàn)乏血小板血漿制備過程中血細(xì)胞內(nèi)容物的釋放可能會對血小板聚集功能產(chǎn)生一定的影響[3]。為進(jìn)一步尋找更好的調(diào)整乏血小板血漿中血小板數(shù)量的方法，本研究針對納入的120例血樣，通過比較分析乏血小板血漿和生理鹽水對血小板聚集功能的影響。現(xiàn)將情況報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入我院檢驗(yàn)科收治的120例體檢健康者的血樣，其中男性血樣62例（51.67%），女性血樣58例（48.33%）。年齡介于20-49歲之間，平均年齡（35.64±7.41）歲，其中20-29歲35例（29.17%），30-39歲45例（37.50%），40-49歲40例（33.33%）。全部血樣所屬受試者，均未服用任何影響血小板功能的藥物，自愿參與本次研究調(diào)查，簽署知情同意書。使用誘導(dǎo)劑情況方面，二磷酸腺苷為誘導(dǎo)劑43例（35.83%），花生四烯酸為誘導(dǎo)劑36例（30.00%），瑞斯托霉素為誘導(dǎo)劑41例（34.17%）。

1.2 方法

1.2.1 儀器設(shè)備和試劑

美國CHRONO-LOG公司，血小板聚集分析儀，型號MODEL700。日本Sysmex公司，全自動血常規(guī)分析儀，型號XE-500。誘導(dǎo)劑二磷酸腺苷、花生四烯酸、瑞斯托霉素均統(tǒng)一購自上海博湖生物科技有限公司。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)操作和方法

標(biāo)本采集前，叮囑受試者禁食禁飲8 h，于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，采集靜脈血5 ml，保存于EDTA抗凝管中，3000 r/min狀態(tài)離心處理，獲得標(biāo)本富血小板血漿。再次離心部分富血小板血漿，從而獲得乏血小板血漿。對富、乏血小板血漿中的血小板數(shù)量進(jìn)行測定，使得乏血小板血漿中的血小板數(shù)量不超過10×109/L。采用乏血小板血漿和生理鹽水，對富血小板血漿中血小板的數(shù)量予以調(diào)整，調(diào)整稀釋倍數(shù)分別為1倍、2倍、4倍，調(diào)整后要求滿足富血小板血漿中血小板數(shù)量不低于100×109/L。以終濃度10 μmol/L二磷酸腺苷、1 mmol/L花生四烯酸、1.5 mg/mL瑞斯托霉素為誘導(dǎo)劑，對調(diào)整前后富血小板血漿中的血小板最大聚集率進(jìn)行測定，分析其中存在的差異。使用富血小板血漿離心制備乏血小板血漿（通過離心富血小板血漿獲?。瑐鹘y(tǒng)離心全血再獲取乏血小板血漿進(jìn)行對比，分析對瑞斯托霉素誘導(dǎo)血小板聚集的影響。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 23.0軟件處理。計(jì)量資料采用（±s）表示，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用n（%）表示，行x2檢驗(yàn)。P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 二磷酸腺苷、花生四烯酸為誘導(dǎo)劑時(shí)乏血小板血漿或生理鹽水調(diào)整乏血小板血漿對血小板最大聚集率的影響

二磷酸腺苷、花生四烯酸為誘導(dǎo)劑，生理鹽水各調(diào)整倍數(shù)的富血小板血漿，其血小板最大聚集率值相較于原富血小板血漿的血小板最大聚集率值，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；乏血小板血漿各調(diào)整倍數(shù)的富血小板血漿，其血小板最大聚集率值均低于原富血小板血漿的血小板最大聚集率值，且調(diào)整倍數(shù)越高，下降趨勢越明顯，在調(diào)整倍數(shù)為2-4倍時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。如表1所示。

2.2 瑞斯托霉素為誘導(dǎo)劑時(shí)乏血小板血漿或生理鹽水調(diào)整乏血小板血漿對血小板最大聚集率的影響

瑞斯托霉素為誘導(dǎo)劑時(shí)，生理鹽水和乏血小板血漿各調(diào)整倍數(shù)的富血小板血漿與原富血小板血漿相 比，其血小板最大聚集率值的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。如表2所示。

2.3 離心全血制備的乏血小板血漿和離心富血小板血漿制備的乏血小板血漿對血小板最大聚集率的影響

2100×g，5min條件下離心全血（或富血小板血漿）制備的乏血小板血漿，各調(diào)整倍數(shù)下的富血小板血漿與原富血小板血漿（100±15）%相比，其血小板最大聚集率值的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。如表3所示。

表1 二磷酸腺苷、花生四烯酸為誘導(dǎo)劑時(shí)乏血小板血漿或生理鹽水調(diào)整乏血小板血漿對血小板最大聚集率的影響

表2 瑞斯托霉素為誘導(dǎo)劑時(shí)乏血小板血漿或生理鹽水調(diào)整乏血小板血漿對血小板最大聚集率的影響

表3 離心全血制備的乏血小板血漿和離心富血小板血漿制備的乏血小板血漿對血小板最大聚集率的影響

3 討 論

本研究中，針對乏血小板血漿制備過程中血細(xì)胞內(nèi)容物釋放對血小板的影響，采用兩步離心法獲取乏血小板血漿：制備富血小板血漿→離心處理獲取乏血小板血漿。研究結(jié)果顯示，不同誘導(dǎo)劑激活的血小板聚集對乏血小板血漿和生理鹽水稀釋作用的反應(yīng)有所差別。二磷酸腺苷、花生四烯酸作為誘導(dǎo)劑激活時(shí)，乏血小板血漿稀釋倍數(shù)低于2倍時(shí)，乏血小板血漿對血小板最大聚集率沒有影響，但隨乏血小板血漿稀釋倍數(shù)增加，二磷酸腺苷、花生四烯酸誘導(dǎo)血小板聚集的血小板最大聚集率值明顯下降，與原富血小板血漿的血小板最大聚集率值 相比差異顯著（P＜0.05）。而與乏血小板血漿稀釋倍數(shù)相同的生理鹽水并未影響血小板最大聚集率值（P＞0.05）。這表明乏血小板血漿影響血小板的聚集功能，并非通過稀釋血小板數(shù)量而導(dǎo)致血小板聚集功能降低，而可能是因?yàn)樵诟咚匐x心富血小板血漿制備乏血小板血漿的過程中，血小板釋放出某些物質(zhì)影響血小板功能，這些物質(zhì)可能來源于血小板顆粒，但由于臨床缺乏相關(guān)報(bào)道，因此仍需進(jìn)一步探究[5]。當(dāng)血小板誘導(dǎo)劑為瑞斯托霉素時(shí)，乏血小板血漿用于調(diào)整富血小板血漿的血小板數(shù)量并不影響血小板的聚集，即使稀釋倍數(shù)達(dá)到4倍之多，仍未表現(xiàn)出其對血小板最大聚集率的影響；反而是生理鹽水在稀釋倍數(shù)僅為2倍時(shí)已體現(xiàn)出抑制血小板聚集的作用，導(dǎo)致稀釋后富血小板血漿的血小板最大聚集率值下降，與原富血小板血漿的血小板最大聚集率值差異不明顯（P＞0.05）。分析原因[6]，可能是由于瑞斯托霉素誘導(dǎo)血小板聚集需要血漿內(nèi)的Von Willebrand因子的參與，生理鹽水對富血小板血漿中 該因子的稀釋，降低了血小板對瑞斯托霉素誘導(dǎo)的聚集反應(yīng)。因此以瑞斯托霉素為誘導(dǎo)劑檢測血小板聚集功能時(shí)，應(yīng)使用乏血小板血漿調(diào)整血小板數(shù)量。

綜上所述，以二磷酸腺苷、花生四烯酸等為激活劑檢測血小板最大聚集率時(shí)，推薦使用生理鹽水；而以瑞斯托霉素為激活劑檢測血小板最大聚集率，推薦使用乏血小板血漿調(diào)整血小板數(shù)量。