辛弗林分子印跡聚合物的制備及其在固相萃取中的應(yīng)用

李 玲，蘇學(xué)素*，張耀海，焦必寧，劉金濤，董家吏

（1.西南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，重慶 400715；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑桔研究所（西南大學(xué)柑桔研究所），農(nóng)業(yè)農(nóng)村部柑桔產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室，重慶 400712）

辛弗林是一種生物堿，是麻黃屬植物的主要活性成分，我國(guó)每年至少有5.5萬(wàn) t的辛弗林急待開(kāi)發(fā)和利用[1]。Pellati等[2]研究發(fā)現(xiàn)辛弗林可提高新陳代謝、氧化脂肪，是一些減肥藥物的有效成分，在治療因肥胖引起的輕度和中度抑郁癥中顯示了良好的療效。胡源祥等[3]研究表明枳實(shí)中的辛弗林對(duì)腸胃運(yùn)動(dòng)具有調(diào)節(jié)作用，肯定了辛弗林為枳實(shí)作用于胃腸運(yùn)動(dòng)的有效成分之一。除此以外，辛弗林具有擴(kuò)張氣管和支氣管、收縮血管、升高血壓的作用，臨床用于治療支氣管哮喘以及手術(shù)和麻醉過(guò)程中出現(xiàn)的低血壓、虛脫、休克、體位性低血壓等癥狀[4-6]。隨著研究的深入和美國(guó)、加拿大、澳大利亞和新西蘭等國(guó)家相繼禁止銷售含有麻黃和麻黃堿的膳食補(bǔ)充劑后[7]，辛弗林由于結(jié)構(gòu)與麻黃堿相似，在食品、藥品、飲料等保健行業(yè)顯示出了極大的應(yīng)用潛力[8-9]。巨大的應(yīng)用潛力和良好的生理活性導(dǎo)致辛弗林的需求量不斷增加，它的開(kāi)發(fā)和利用受到了極大的關(guān)注，提取和純化更是近些年研究的熱點(diǎn)之一。目前辛弗林的分離純化方法主要有超臨界提取法[10]、微波提取法[11]、真空氣流提取法[12]、大孔樹(shù)脂吸附法[13]、反膠束提取法[14]、溶劑提取法[15-16]、煎煮法[17]等，但這些技術(shù)普遍存在提取率低、純度低、有機(jī)溶劑消耗量大、工藝繁瑣等缺點(diǎn)，而且對(duì)辛弗林的提取和純化不具有特異性，因此，開(kāi)發(fā)經(jīng)濟(jì)、高效、簡(jiǎn)潔的提純化辛弗林的方法尤為重要。

分子印跡固相萃?。╯olid phase extraction，SPE）技術(shù)是一種有望在生物工程、臨床醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品工業(yè)等行業(yè)形成產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用的新型SPE技術(shù)[18-19]。分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymer，MIPs）一般具有特定的結(jié)合位點(diǎn)，這些位點(diǎn)可以選擇性地識(shí)別模板分子或與模板分子結(jié)構(gòu)相似的化合物，具有高選擇性、化學(xué)和物理穩(wěn)定性、可重復(fù)使用性和低成本制備性等優(yōu)點(diǎn)[20-22]。由于其突出的優(yōu)勢(shì)，MIPs在食品分析、藥物分析、藥物輸送、SPE等領(lǐng)域顯示出良好的應(yīng)用前景。Ghasemi等[23]利用分子印跡技術(shù)制造具有特定納米空腔的聚砜膜，從純凈溶液和紫杉樹(shù)提取物中選擇性分離和富集紫杉醇；Zhang Jiawei等[24]利用合成的MIPs為特定的吸附劑，首次從檸檬汁中去除檸檬苦素，然后將含有檸檬苦素的MIPs直接制成水溶性凝膠治療小鼠的炎癥；Xie Jing等[25]制備了毛蕊花素MIPs，通過(guò)SPE程序使用毛蕊花素分子印跡材料用于扣除雌激素受體中的類黃酮糖苷配基。目前合成分子印跡的方法主要有沉淀聚合法、本體聚合法、懸浮聚合法、原位聚合法、表面印跡法、溶脹聚合法等。本體聚合法由于在制備過(guò)程中聚合物內(nèi)部的印跡孔穴經(jīng)過(guò)研磨可能被破壞，在一定程度上會(huì)降低MIPs的選擇性和吸附性，原位聚合法聚合程度難以控制，溶脹聚合法制備工藝繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，懸浮聚合法受溶劑影響大，表面印跡法過(guò)程復(fù)雜且需要載體材料[26-27]。由于沉淀聚合法制備過(guò)程簡(jiǎn)單、成本低、產(chǎn)率和印跡效果好，因此本實(shí)驗(yàn)采用沉淀聚合法制備辛弗林MIPs，測(cè)定MIPs的吸附性和選擇性，并利用MIPs對(duì)枳實(shí)粗粉中的辛弗林進(jìn)行SPE研究，以期為辛弗林的提取和純化提供一種高效、經(jīng)濟(jì)的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

辛弗林標(biāo)準(zhǔn)品、甲基丙烯酸（methacrylic acid，MAA）、偶氮二異丁腈（azobisisobutyronitrile，AIBN） 上海泰坦科技股份有限公司；丙烯酸羥乙酯（2-hydroxyethyl acrylate，HEA） 上海源葉生物科技有限公司；丙烯酰胺 重慶姣姣商貿(mào)有限公司；乙二醇二甲基丙烯酸羥乙酯（ethyleneglycol dimethacrylate，EGDMA） 上海騰懷生物科技有限公司；甲醇重慶躍翔化工有限公司；乙酸 上海麥瑞爾化學(xué)科技有限公司；乙腈 上海阿拉丁生化科技有限公司；乙酸乙酯（ethyl acetate，EA） 西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司；實(shí)驗(yàn)試劑均為色譜純，水均為超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀 安捷倫科技有限公司；SZCL-3A數(shù)顯智能控溫磁力攪拌器 鄭州科泰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；SB-5200D超聲波清洗器 寧波新芝生物科技有限公司；TM-1810紫外分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；旋渦機(jī) 重慶瑞麗電子儀器設(shè)備有限公司；純水機(jī) 法國(guó)MilliQ公司；CZX-GFC.101-2-BS電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海博泰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；梅特勒AB304-S/FACT電子天平 上海志榮電子科技有限公司；IECCL31R臺(tái)式冷凍離心機(jī) 德國(guó)Thermo Fisher公司；SPE柱 美國(guó)Agilent科技有限公司；Sμpelco真空SPE裝置 上海楚定分析儀器有限公司；SM8010型掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope，SEM）日本Hitachi公司。

1.3 方法

1.3.1 MIPs的制備和表征

1.3.1.1 沉淀聚合法制備MIPs

以MIPs2為例，使用沉淀聚合法制備MIPs2時(shí)，在加入0.22 mmol MAA和0.18 mmol HEA作為雙功能單體的條件下，準(zhǔn)確稱取0.1 mmol模板分子（辛弗林）溶于10.0 mL致孔劑（乙腈）中，加入20 mmol交聯(lián)劑EGDMA，超聲30 min靜置過(guò)夜，再加入0.2 mmol引發(fā)劑AIBN，超聲處理30 min通氮?dú)獬?0 min后置于60 ℃恒溫水浴中反應(yīng)24 h得聚合物。用甲醇-乙酸8∶2（V/V）混合溶液索氏提取除去聚合物中的模板分子及未反應(yīng)的單體，再用甲醇溶液洗脫除去剩余的乙酸分子，將反應(yīng)所得固體顆粒用丙酮反復(fù)沉降除去細(xì)小粒子，過(guò)濾，干燥得辛弗林MIPs。非印跡聚合物（non-imprinted polymer，NIPs）的合成方法與MIPs合成方法一致，只是在合成時(shí)不加入模板分子。

1.3.1.2 MIPs形態(tài)表征

利用SEM對(duì)合成的MIPs2進(jìn)行形貌表征。首先將待測(cè)的樣品均勻涂覆到導(dǎo)電膠上，然后采用離子濺射儀對(duì)MIPs進(jìn)行噴金30 s后，室溫下進(jìn)行SEM測(cè)試。

1.3.2 吸附實(shí)驗(yàn)

1.3.2.1 靜態(tài)吸附

準(zhǔn)確稱取10 mg MIPs和NIPs于10 mL離心管中，加入100 mg/L的辛弗林標(biāo)準(zhǔn)液，搖床恒溫振蕩2 h，10 000 r/min高速離心5 min，取出上清液，氮?dú)獯蹈珊笥眉状紡?fù)溶至1 mL，過(guò)0.22 μm濾膜，用HPLC測(cè)定其濃度并計(jì)算吸附量和印跡因子（IF），公式如下：

式中：Q為MIPs對(duì)辛弗林的吸附量/（μmol/g）；Qc為溶液中辛弗林的初始質(zhì)量濃度/（mg/L）；Qe為吸附平衡時(shí)辛弗林的質(zhì)量濃度/（mg/L）；V為辛弗林溶液的體積/mL；m為加入的MIPs的質(zhì)量/mg；QMIP為MIPs對(duì)辛弗林的吸附量/（μmol/g）；QNIP為NIPs對(duì)辛弗林的吸附量/（μmol/g）。

1.3.2.2 吸附等溫線和Scatchard模型考察

準(zhǔn)確稱取10 mg MIPs2，加入不同濃度的辛弗林標(biāo)準(zhǔn)液，搖床恒溫振蕩2 h，10 000 r/min高速離心10 min，取出上清液，氮?dú)獯蹈珊笥眉状紡?fù)溶至1 mL，過(guò)0.22 μm濾膜，用HPLC測(cè)定并計(jì)算其濃度。應(yīng)用Scatchard模型以Q/Ce對(duì)Q作圖，根據(jù)線性關(guān)系的斜率和截距可求得吸附平衡常數(shù)Kd和最大表觀結(jié)合量Qmax。如式（3）所示：

式中：Ce為吸附平衡時(shí)的濃度。

1.3.2.3 吸附動(dòng)力學(xué)

準(zhǔn)確稱取10 mg MIPs2，分別加入100 mg/L的辛弗林標(biāo)準(zhǔn)液，搖床恒溫振蕩吸附10、20、30 min后10 000 r/min高速離心10 min，取出上清液，氮?dú)獯蹈珊笥眉状紡?fù)溶至1 mL，過(guò)0.22 μm濾膜，用HPLC測(cè)定其濃度。采用準(zhǔn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程和準(zhǔn)二級(jí)動(dòng)力學(xué)方程研究MIPs2對(duì)辛弗林的吸附速率和吸附機(jī)理。

準(zhǔn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程式：

式中：Qe為平衡時(shí)吸附量/（μmol/g）；Qt為測(cè)量時(shí)間為t時(shí)的吸附量/（μmol/g）；t為時(shí)間/min；k1為一級(jí)動(dòng)力學(xué)常數(shù)；k2為二級(jí)動(dòng)力學(xué)常數(shù)。

1.3.2.4 選擇性吸附

稱取3 份10 mg的MIPs2放入10 mL離心管中，分別加入100 mg/L的辛弗林、酪胺、大麥芽堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，于室溫下恒溫振蕩2 h，10 000 r/min高速離心10 min，取出上清液，氮?dú)獯蹈珊笥眉状紡?fù)溶到1 mL，溶液過(guò)0.22 μm濾膜，用HPLC測(cè)定其濃度。3 種被測(cè)物結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖 1 辛弗林、酪胺、大麥芽堿結(jié)構(gòu)Fig. 1 Structures of synephrine, tyramine and maltine

1.3.3 分子印跡SPE

用MIPs2作填充材料制備分子印跡SPE柱。準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量MIPs2溶于2 mL丙酮，裝入SPE柱（Agilent，3 mL）中，用篩板壓嚴(yán)實(shí)。依次用甲醇、乙腈、水各2 mL對(duì)SPE柱進(jìn)行活化，然后加入一定體積的枳實(shí)粗粉提取液吸附一定時(shí)間后，進(jìn)行淋洗和洗脫，分別收集上樣液、淋洗液、洗脫液，濃縮至干，再用甲醇復(fù)溶，進(jìn)行HPLC分析。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及圖表繪制

實(shí)驗(yàn)采用Excel對(duì)測(cè)量結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算，用Origin進(jìn)行圖表的繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 MIPs制備條件的優(yōu)化

2.1.1 模板分子和功能單體的相互作用

功能單體能否與模板分子相互作用形成穩(wěn)定的聚合物是MIPs能否具有高選擇性和高吸附性的關(guān)鍵點(diǎn)。本研究利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定辛弗林與不同的功能單體MAA、HEA、丙烯酰胺（acrylamide，AM）、MAAHEA的混合溶液預(yù)聚合后紫外最大吸收峰的變化情況。如圖2所示，當(dāng)功能單體為MAA-HEA時(shí)，預(yù)聚合物的紫外最大吸收峰發(fā)生了較明顯的紅移，可能原因是辛弗林雖然同時(shí)具有弱酸性和弱堿性，但其堿性大于酸性所以更易于與具有弱酸性的MAA結(jié)合，而加入HEA具有穩(wěn)定分子間作用力的用途[28]，所以預(yù)聚合物發(fā)生了相對(duì)明顯的紅移。故本研究選擇MAA-HEA作為雙功能單體。

圖 2 辛弗林與不同功能單體預(yù)聚合后紫外波長(zhǎng)變化Fig. 2 Change in maximum ultraviolet absorption wavelength after prepolymerization of synephrine with different functional monomers

圖 3 辛弗林與不同比例MAA-HEA預(yù)聚合后紫外波長(zhǎng)變化Fig. 3 Change in maximum ultraviolet absorption wavelength in synephrine after prepolymerization with different ratios of MAA to HEA

圖 4 不同濃度功能單體與模板分子作用紫外吸收值差異Fig. 4 Comparison of UV absorption values of complexes between functional monomers at different concentrations and template molecules

模板分子與功能單體的比例同樣影響MIPs的選擇性和吸附性，同理利用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)辛弗林與MAAHEA在不同的物質(zhì)的量之比（1∶0、1∶2、1∶4、1∶6）預(yù)聚合后最大吸收峰的變化，從圖3可以看出，當(dāng)辛弗林與功能單體的比例為1∶4時(shí)，紫外最大吸收發(fā)生了較顯著的紅移，所以模板分子與MAA-HEA的最佳比例為1∶4。為了進(jìn)一步探究辛弗林與功能單體的結(jié)合機(jī)理，參照文獻(xiàn)[29]固定辛弗林的濃度為0.1 mmol/L，從0.05～1 mmol逐漸增加功能單體的濃度，在紫外分光光度計(jì)上測(cè)得混合溶液的吸光度，從而繪制出紫外吸光度差光譜圖4，在理論上，模板分子（T）與功能單體（M）形成復(fù)合物的過(guò)程，可以用下式表示：

式中：k為結(jié)合常數(shù)，n＝1、2、3……。

由于功能單體的濃度（b0）遠(yuǎn)大于模板分子的濃度（a0），因此復(fù)合物的濃度（c）可推導(dǎo)為：

由于功能單體與模板分子以及其主客體復(fù)合物最大吸收在234 nm波長(zhǎng)處，所以功能單體與模板分子在甲醇溶液中作用前后吸光度差ΔA可表示為：

式中：A0為開(kāi)始時(shí)的吸光度；A為平衡時(shí)的吸光度；?ξ為波長(zhǎng)差/nm；b0為功能單體質(zhì)量濃度/（mg/L）；K為結(jié)合速率常數(shù)；ΔξC為復(fù)合物波長(zhǎng)變化/nm；a0為模板分子質(zhì)量濃度/（mg/L）；l為平衡時(shí)波長(zhǎng)/nm。

以ΔA/b0n對(duì)ΔA作圖可以推導(dǎo)出n值，從而得知在甲醇溶液中一個(gè)模板分子的周圍有幾個(gè)功能單體與其作用，從而揭示分子印跡作用機(jī)理。

從圖5可以看出，當(dāng)n＝2時(shí)，ΔA/b0n對(duì)ΔA作圖是一條直線（R2＝0.913 1），說(shuō)明在研究的濃度范圍內(nèi)主客體主要存在形式為1 個(gè)辛弗林分子與2 個(gè)MAA-HEA發(fā)生作用。但是單獨(dú)通過(guò)氫鍵識(shí)別是不穩(wěn)定的，因?yàn)榭臻g效應(yīng)也可能對(duì)識(shí)別有很大作用。

圖 5 ΔA/b0 n與ΔA在234 nm波長(zhǎng)處的關(guān)系Fig. 5 Plots of ΔA/b0 n versus ΔA at 234 nm

功能單體和模板分子間的結(jié)合強(qiáng)度、聚合物形態(tài)結(jié)構(gòu)以及動(dòng)力學(xué)性質(zhì)取決于溶劑的種類及用量，本研究測(cè)定了不同種類溶劑和同一溶劑不同體積對(duì)聚合物吸附量的影響。引發(fā)劑也是影響聚合物吸附量的一個(gè)重要因素，參照文獻(xiàn)[30]關(guān)于辛弗林MIPs的研究，引發(fā)劑的量應(yīng)為功能單體和交聯(lián)劑質(zhì)量的1%，但是在本研究中按照此比例卻不能得到MIPs，所以本研究探討引發(fā)劑用量對(duì)辛弗林MIPs吸附量的影響，結(jié)果見(jiàn)表1。制備辛弗林MIPs的最優(yōu)條件為當(dāng)辛弗林為0.1 mmol，功能單體MAA（0.22 mmol）-HEA（0.18 mmol），致孔劑為乙腈且體積為10 mL、引發(fā)劑為AIBN且用量為32.0 mg、EDGMA為交聯(lián)劑且用量為20 mmol時(shí)，聚合物的吸附效果最好。

表 1 MIPs的制備條件及吸附性能Table 1 Preparation conditions of MIPs and corresponding adsorption capacity

2.1.3 SEM分析

取少量MIPs2和NIPs2通過(guò)SEM對(duì)聚合物的形貌進(jìn)行表征，如圖6所示。MIPs2結(jié)構(gòu)疏松，具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的孔道，模板分子可通過(guò)這些孔道進(jìn)入“預(yù)定”的孔穴，并與之發(fā)生相互識(shí)別。網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)使聚合物在SPE過(guò)程中具有較大比表面積與較低流動(dòng)阻力，這些優(yōu)點(diǎn)有助于增強(qiáng)其在樣品中特異性吸附性能。而NIPs2結(jié)構(gòu)致密，尺寸結(jié)構(gòu)均一、空穴較少，導(dǎo)致相應(yīng)的吸附能力降低。

圖 6 MIPs2 （a）和NIPs2（b）SEM圖Fig. 6 Scanning electron microscopic images of MIPs2 (a) and NIPs2 (b)

2.2 聚合物靜態(tài)吸附

2.2.1 MIPs和NIPs的識(shí)別屬性

25 ℃條件下MIPs2和NIPs2的吸附等溫線結(jié)果如圖7a所示（多次測(cè)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果），隨著溶液中辛弗林質(zhì)量濃度的增大，MIPs2和NIPs2對(duì)辛弗林的吸附量均逐漸升高，但MIPs2吸附量的增加幅度顯著大于NIPs2，表明MIPs的吸附性能顯著強(qiáng)于NIPs。結(jié)合圖7b Scatchard模型討論MIPs的吸附特性，對(duì)于MIPs2，以Q/Ce對(duì)Q作圖呈現(xiàn)兩條不同斜率的直線，說(shuō)明MIPs對(duì)辛弗林的吸附存在2 種不同的結(jié)合位點(diǎn)（高親和力結(jié)合位點(diǎn)和低親和力結(jié)合位點(diǎn)）。其中，高親和力結(jié)合位點(diǎn)的存在反映出MIPs2對(duì)辛弗林的特異性吸附，NIPs2對(duì)辛弗林的結(jié)合能力遠(yuǎn)低于MIPs2，這意味著NIPs2不具有與辛弗林匹配的特異性結(jié)合位點(diǎn)，并且僅具有差的非特異性吸附。通過(guò)分子印跡實(shí)現(xiàn)MIPs2的特異性吸附是顯而易見(jiàn)的。

圖 7 辛弗林吸附在MIPs和NIPs上的吸附等溫線（a）和Scatchard圖（b）Fig. 7 Corresponding adsorption isotherms (a) of synephrine adsorption onto MIPs and NIPs and Scatchard plots (b)

2.2.2 吸附動(dòng)力學(xué)

圖 8 MIPs2和NIPs2對(duì)辛弗林的吸附動(dòng)力學(xué)分析Fig. 8 Adsorption kinetics of synephrine by MIPs2 and NIPs2

為確定吸附平衡時(shí)間，對(duì)MIPs2和NIPs2做吸附動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。由圖8（3 次測(cè)量后統(tǒng)計(jì)結(jié)果）可以看出，MIPs2對(duì)辛弗林的吸附量在60 min內(nèi)快速增加，在60 min左右達(dá)到平衡后吸附量基本不變。因此，MIPs2的吸附平衡時(shí)間確定為60 min。并且MIPs2吸附量高于NIPs2，這是因?yàn)镸IPs2的孔穴被辛弗林成功印跡，隨著時(shí)間的推移，MIPs2的孔穴逐漸被填滿導(dǎo)致吸附速度變緩最終達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡。而NIPs2由于沒(méi)有特定的印跡孔穴，只能依靠聚合物表面的非特異性吸附作用進(jìn)行少量的吸附，所以吸附量有限。為進(jìn)一步探究吸附過(guò)程的動(dòng)力學(xué)機(jī)理，對(duì)其進(jìn)行了一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型和二級(jí)動(dòng)力學(xué)模型擬合。

表 2 動(dòng)力學(xué)方程擬合參數(shù)Table 2 Kinetic parameters of pseudo first-order and pseudo secondorder equations for synephrine adsorption by MIPs2 and NIPs2

對(duì)表2準(zhǔn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程和準(zhǔn)二級(jí)動(dòng)力學(xué)方程的擬合結(jié)果進(jìn)行分析可知，準(zhǔn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程的擬合結(jié)果相關(guān)系數(shù)R2均較準(zhǔn)二級(jí)動(dòng)力學(xué)方程的R2要好，且由準(zhǔn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)計(jì)算的平衡吸附量QeMIPs2和NIPs2（分別為205.43 μmol/g和50.81 μmol/g）接近于實(shí)驗(yàn)值（分別為228.82 μmol/g和54.91 μmol/g），說(shuō)明MIPs2和NIPs2對(duì)辛弗林的吸附過(guò)程更符合準(zhǔn)一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程。

為了保證對(duì)花溪區(qū)紅巖水庫(kù)數(shù)據(jù)錄入的準(zhǔn)確性和效率性，需要采用本地?cái)?shù)據(jù)和遠(yuǎn)程數(shù)據(jù)結(jié)合錄入方式對(duì)應(yīng)基礎(chǔ)工程數(shù)據(jù)的錄入。如果在對(duì)相關(guān)工程數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入發(fā)現(xiàn)格式錯(cuò)誤，可調(diào)用WEbService軟件出發(fā)數(shù)據(jù)庫(kù)存儲(chǔ)過(guò)程，對(duì)于相關(guān)數(shù)據(jù)直接對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)庫(kù)列表進(jìn)行文件域名修改。

2.2.3 選擇性吸附

圖 9 樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液和MIPs2吸附后HPLC圖Fig. 9 HPLC chromatograms of synephrine standard solution and synephrine-rich extract from Fructus Aurantii immaturus after MIPs2 adsorption

選取與辛弗林結(jié)構(gòu)類似的酪胺和大麥芽堿作為底物進(jìn)行吸附選擇性研究，結(jié)果見(jiàn)圖9。對(duì)比吸附前后溶液的HPLC可知，MIPs2對(duì)3 種物質(zhì)都具有吸附性能，但對(duì)辛弗林的吸附性能明顯優(yōu)于其他2 種。這是由于MIPs2中具有與辛弗林結(jié)構(gòu)相匹配的印跡孔穴，對(duì)辛弗林有特異識(shí)別性，由于酪胺和大麥芽堿與辛弗林結(jié)構(gòu)相似，分子中具有一部分相同的基團(tuán)，所以也能被少量的吸附。

2.3 分子印跡SPE條件優(yōu)化

以MIPs2作為SPE吸附填充物，洗脫液中辛弗林含量和提取率為比較標(biāo)準(zhǔn)，用HPLC法分別檢測(cè)并計(jì)算上樣液、淋洗液、洗脫液中辛弗林含量，優(yōu)化聚合物與枳實(shí)提取液的最佳比例、優(yōu)化淋洗液種類及比例、洗脫液比例。當(dāng)聚合物質(zhì)量為200 mg，柱壓適中時(shí)，淋洗和洗脫操作方便快速，所以MIPs質(zhì)量為200 mg為基礎(chǔ)進(jìn)行研究，淋洗劑是SPE中至關(guān)重要的因素，它應(yīng)盡可能地消除MIPs對(duì)模板分子非特異性相互作用而最大限度地保留住特異性相互作用，所以本研究在優(yōu)化了上樣量、洗脫液比例后，特別比較了不同極性溶劑（乙腈-水、乙腈-EA不同比例混合溶劑）對(duì)辛弗林SPE的影響，平行測(cè)定3 次，測(cè)量結(jié)果取平均值，見(jiàn)表3。當(dāng)MIPs質(zhì)量為200 mg，枳實(shí)提取液為0.20 mL，淋洗液為EA-乙腈（6∶4，V/V），洗脫液為甲醇-乙酸（8∶2，V/V）時(shí)，SPE效果最佳，洗脫液中辛弗林質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)最大值為93.34%，提取率為73.90%。

表 3 固相提取條件優(yōu)化Table 3 Optimization of solid phase extraction conditions

3 結(jié) 論

采用沉淀聚合法制備一系列辛弗林MIPs，當(dāng)辛弗林添加量為0.1 mmol、交聯(lián)劑選擇 EDGMA（2 mmol）、單體選擇MAA（0.22 mmol）和HEA（0.18 mmol）、致孔劑為10 mL乙腈，交聯(lián)劑為0.2 mmol AIBN時(shí)，MIPs2對(duì)辛弗林有特異吸附性能且吸附量大，最大吸附量為228.82 μmol/g，此吸附量?jī)?yōu)于報(bào)道的辛弗林MIPs吸附量73.91 μmol/g[30]和155.54 μmol/g[31]。將MIPs用于SPE填充物對(duì)枳實(shí)中的辛弗林進(jìn)行提取和純化，當(dāng)聚合物質(zhì)量為200 mg，枳實(shí)提取液體積為0.2 mL，淋洗液為EA-乙腈6∶4（V/V），洗脫液為甲醇-乙酸8∶2（V/V）時(shí)，辛弗林的質(zhì)量分?jǐn)?shù)由1.93%提高到93.34%，提取率為73.90%。該方法具有快速、經(jīng)濟(jì)、高效的特點(diǎn)，可應(yīng)用于枳實(shí)粗粉中辛弗林的提取和純化。