正交設(shè)計(jì)優(yōu)化鮮竹瀝液的提取工藝*

★ 張文婷 劉緒平 袁桂平** 陳俊（.江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院/江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心 南昌 33009；. 撫州市食品藥品檢驗(yàn)所 江西 撫州 344400）

鮮竹瀝為江西省特色的中藥飲片，始載于《本草經(jīng)集注》，具有清熱化痰、開竅定神之功效，其功用早為祖國(guó)醫(yī)學(xué)所認(rèn)識(shí)，且臨床療效獨(dú)特和明顯，深受患者認(rèn)可。同時(shí)，該飲片又是江西省特色中成藥品種復(fù)方鮮竹瀝中的主要原料，臨床主要用于痰熱咳嗽，痰黃黏稠［1］。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，鮮竹瀝中富含各種氨基酸、黃酮、維生素、微量元素及愈創(chuàng)木酚，具有很高的藥用價(jià)值，其中主要為愈創(chuàng)木酚，其次是氨基酸和黃酮類化合物［2-3］。目前主要炮制方法為傳統(tǒng)的燒制法和新出現(xiàn)的滲漉法、煎煮法［4］，法定方法為干餾法，主要受干餾時(shí)間、溫度、流速等影響，而法定方法對(duì)這些指標(biāo)均未做明確說明，可操作性不強(qiáng)，缺乏嚴(yán)格的監(jiān)控方法，不利于標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)［5-6］。本文針對(duì)鮮竹瀝飲片以上工藝因素采用正交設(shè)計(jì)進(jìn)行生產(chǎn)工藝考察，找到最佳炮制工藝。

1 儀器與試藥

島津LC-20A高效液相色譜儀，Sartorius BT25S型十萬分之一電子天平。愈創(chuàng)木酚對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院， 批號(hào) 111510 200202，供含量測(cè)定用），（鮮竹瀝：江西天施康中藥股份有限公司，批號(hào)：20180216、20180217、20180218、20180219 、20180220 、20180221、20180222、20180223、20180224 ）HPLC用水為超純水， 乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 鮮竹瀝的傳統(tǒng)炮制 取粉綠竹鮮竹稈截成約30cm長(zhǎng)的段，兩端去節(jié)，對(duì)半劈開，架起中部用火燒灼，周圍放點(diǎn)燃的木炭加熱，壇口下端放一搪瓷碗，承接流出的汁液，加熱干餾50min，收集流出的汁液，得黃色澄明液汁，即為鮮竹瀝樣品。

鮮竹瀝的現(xiàn)代生產(chǎn)：采用現(xiàn)代化機(jī)械設(shè)備自動(dòng)控制溫度、干餾時(shí)間和流速。

2.2 愈創(chuàng)木酚的含量測(cè)定

2.2.1 方法的選擇 經(jīng)實(shí)驗(yàn)摸索，初步選擇0.5%磷酸和0.5%三乙胺溶液-乙腈（80∶20）為流動(dòng)相。

2.2.2 色譜條件 色譜柱 InertSustain AQ C18色 譜柱（4.6 mm×250mm，5μm）流速1.0mL/min ；柱溫 25℃，進(jìn)樣量20μL；檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm。

2.2.3 對(duì)照品溶液制備 精密稱取愈創(chuàng)木酚對(duì)照品20.45mg，置100mL容量瓶，溶解并稀釋至刻度（約200μg/mL）。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取上述對(duì)照品溶液稀釋成約以下濃度 100μg/mL、40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、1μg/mL，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)， 進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=21814X+1273，r= 0.9999，表明在10.1945～203.89μg/mL線性關(guān)系良好。

2.2.5 樣品含量測(cè)定 精密吸取鮮竹瀝口服液20mL，用稀鹽酸調(diào) pH 2～3， 用乙醚萃取 3次（20，10，10mL），合并萃取液，用 5%碳酸氫鈉溶液洗滌萃取液，取乙醚層。合并乙醚萃取液，使自然揮干， 殘?jiān)芗尤爰状? mL溶解，作為供試品溶液。同法制得不加鮮竹瀝供試品的空白溶液，記錄色譜圖［7-8］。對(duì)照品和樣品的HPLC色譜圖見圖1-2。

圖1 對(duì)照品溶液的HPLC圖譜

圖2 樣品溶液的HPLC圖譜

2.3 正交試驗(yàn) 法定方法為干餾法，主要受干餾時(shí)間、溫度、流速等影響，選擇這三個(gè)因素為考察因素，分別設(shè)定3個(gè)水平，根據(jù)因素水平表見表1，選擇正交表L9（34）進(jìn)行試驗(yàn)，以愈創(chuàng)木酚含量為指標(biāo)，結(jié)果見表2。對(duì)正交試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表 3［8-12］。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

表2 干餾提取工藝正交試驗(yàn)安排及結(jié)果

表3 愈創(chuàng)木酚含量方差分析

據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析可知，A因素的影響 A3＞A2＞A1，B 因素的影響 B2＞B3＞B1，C 因素的影響C1＞C2＞C3。由R值可知各因素對(duì)愈創(chuàng)木酚含量的影響大小順序?yàn)锳＞B＞C。方差分析表明因素A干餾時(shí)間和因素B溫度對(duì)愈創(chuàng)木酚含量的有顯著性意義，是影響鮮竹瀝提取工藝的主要因素，在工藝優(yōu)化中應(yīng)該重點(diǎn)考慮，C因素（流速）對(duì)鮮竹瀝提取工藝的影響不具有顯著性，從節(jié)約時(shí)間的角度考慮，可以選擇C3。因此結(jié)合直觀分析可以將A、B、C因素的優(yōu)化工藝條件確定為A3B2C3。

2.4 最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 為進(jìn)一步考察上述優(yōu)選工藝條件的穩(wěn)定性，按最佳工藝條件A3B2C3（時(shí)間為180min，溫度為200℃，流速為2.0mL/min）平行重復(fù)3次試驗(yàn)。按“2.2.5”項(xiàng)下測(cè)定愈創(chuàng)木酚的含量，結(jié)果見表4。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，鮮竹瀝中富含各種氨基酸、黃酮、維生素、微量元素及愈創(chuàng)木酚，而愈創(chuàng)木酚具有確切的止咳功效。愈創(chuàng)木酚含量的高低可以反應(yīng)鮮竹瀝鎮(zhèn)咳效果。傳統(tǒng)的提取工藝，耗能大，污染嚴(yán)重，不能精準(zhǔn)的控制干餾時(shí)間溫度且生產(chǎn)規(guī)模小，只適合小作坊式生產(chǎn)。本文通過正交設(shè)計(jì)找到鮮竹瀝最佳提取工藝，結(jié)果表明該工藝愈創(chuàng)木酚提取率高，簡(jiǎn)單穩(wěn)定，重復(fù)性好，適合鮮竹瀝提取的現(xiàn)代化工業(yè)生產(chǎn)。