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    HPLC法測(cè)定吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中主藥的含量

    2020-04-16 02:31:34羅芳李巖郭曉茹汪阿鵬夏桂民
    關(guān)鍵詞:酸酯肉豆蔻吉西

    羅芳,李巖,郭曉茹,汪阿鵬,夏桂民

    ·論著·

    HPLC法測(cè)定吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中主藥的含量

    羅芳*,李巖*,郭曉茹,汪阿鵬,夏桂民

    100050 北京,中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所制劑研究室

    建立吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中主藥的含量測(cè)定方法。

    采用 HPLC 法測(cè)定脂質(zhì)體中主藥的含量并進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證。

    色譜分離度 R = 2.242,陰性對(duì)照無(wú)干擾;吉西他濱肉豆蔻酸酯在 5.52 ~ 116 μg/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(= 0.9999);低、中、高 3 種濃度的平均回收率分別為 96.8%(RSD = 0.49%,n = 3)、99.7%(RSD = 0.15%,n = 3)和 99.8%(RSD = 0.50%,n = 3);日內(nèi)精密度 RSD = 0.28%(n = 6),日間精密度 RSD = 0.55%(n = 6);流速在 0.99 ~ 1.01 ml/min 范圍內(nèi)變化時(shí)RSD = 1.19%(n = 9),柱溫在28 ~ 32 ℃之間變化時(shí) RSD = 0.66%(n = 9)。

    建立的方法簡(jiǎn)便易行、穩(wěn)定、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、耐用性好,可定量檢測(cè)吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中主藥的含量。

    高效液相色譜; 含量測(cè)定; 分析方法驗(yàn)證; 吉西他濱肉豆蔻酸酯; 脂質(zhì)體

    吉西他濱屬細(xì)胞周期特異性抗代謝類藥物,主要作用于 S 期,是一種人工合成的胞嘧啶核苷衍生物[1]。作為一線化療用藥,吉西他濱對(duì)多種實(shí)體瘤治療效果顯著,尤其是對(duì)胰腺癌、非小細(xì)胞肺癌和乳腺癌,單一用藥或聯(lián)合其他抗癌藥物都能取得很好療效。

    臨床常用的劑型為注射用鹽酸吉西他濱,但是其在體內(nèi)容易被胞嘧啶核苷脫氨酶等酶迅速降解(半衰期很短,僅為 8 ~ 17 min),成為無(wú)活性的雙氟脫氧尿苷(dFdU),因此,吉西他濱若要維持有效的藥物濃度就必須大劑量給藥[2-3]。美國(guó)國(guó)家癌癥綜合網(wǎng)絡(luò)及歐洲腫瘤協(xié)會(huì)指南推薦的標(biāo)準(zhǔn)劑量 1000 ~ 1250 mg/m2,且 30 min 內(nèi)靜脈輸注完成。持續(xù)大劑量給藥導(dǎo)致較強(qiáng)毒副作用,如:呼吸困難、脫發(fā)、水腫、骨髓抑制、腎毒性、胃腸道反應(yīng)、流感樣反應(yīng)、過(guò)敏反應(yīng)等[4-5]。

    納米技術(shù)的發(fā)展為改善藥物體內(nèi)循環(huán)時(shí)間,增效減毒帶來(lái)了新希望。本課題組對(duì)吉西他濱進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造,設(shè)計(jì)并合成脂水分配系數(shù)適宜的改良型新藥吉西他濱肉豆蔻酸酯(dimyristoyl-gemcitabine,dmGEM,圖 1),再利用納米技術(shù)、以磷脂為基礎(chǔ)賦形劑構(gòu)建長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體,規(guī)避體內(nèi)相關(guān)酶的降解,延長(zhǎng)半衰期,增強(qiáng)療效,降低毒性,提高患者依從性,其臨床意義重大。目前,尚未見吉西他濱肉豆蔻酸酯納米制劑中主藥分析方法的相關(guān)報(bào)道,因此需要建立吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中主藥的含量測(cè)定法,便于吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體的定量分析。

    圖 1 吉西他濱肉豆蔻酸酯化學(xué)結(jié)構(gòu)式(R = C13H17,分子式:C37H63F2N3O6,分子量:683.47)

    Figure 1 Chemical structure of dimyristoyl-gemcitabine (R = C13H17,molecular formula: C37H63F2N3O6, molecular weight: 683.47)

    本研究建立了簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)的 HPLC 法,并對(duì)該法進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證[6-8],證明該法適用于吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體的含量測(cè)定。本法對(duì)其他吉西他濱酯化物納米制劑的含量測(cè)定也具有參考價(jià)值。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    LC-20A 高效液相色譜儀和 Inerstil ODS-SP 色譜柱(5 μm,150 mm × 4.6 mm)購(gòu)自日本島津公司;R-300 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀購(gòu)自瑞士 Buchi 公司;XSE105 分析天平購(gòu)自瑞士梅特勒公司;KQ-250DB 型數(shù)控超聲波清洗器購(gòu)自昆山市超聲儀器有限公司;低溫光照儀購(gòu)自藥物制劑國(guó)家研究中心。

    吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體自制,批號(hào)2019031405、2019032101、2019032102、2019032103、2019032104、2019032105;吉西他濱肉豆蔻酸酯原料及工作對(duì)照品,批號(hào) 20190307,99.0%,本所合成室制備;聚乙二醇二硬脂酸磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)和注射級(jí)膽固醇購(gòu)自上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司;色譜純甲醇購(gòu)自美國(guó) Fisher Scientific 公司;分析純二水合磷酸二氫鈉購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;其他試劑也均為色譜純。

    1.2 方法

    1.2.1 配制 PBS 緩沖液(pH 2.4 ~ 2.6) 參照中國(guó)藥典(2015),稱取 NaH2PO413.8 g,置于 2000 ml燒杯,加水適量,使之溶解,另量取 H3PO42.5 ml 滴加至上述溶液,再加水稀釋至 1000 ml,攪勻。用 H3PO4調(diào)節(jié) pH 至 2.53,得 PBS 緩沖液(pH 2.53),0.22 μm 濾膜抽濾,臨用前超聲脫氣 15 min,室溫放置備用。

    1.2.2 吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液制備 精密稱取吉西他濱肉豆蔻酸酯2.50 mg,置于 50 ml 量瓶中,加入適量甲醇,超聲使其完全溶解,再用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得 50 μg/ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液。

    1.2.3 供試品溶液及空白對(duì)照溶液制備 精密量取 0.1 ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體溶液,置于 2 ml 量瓶中,用甲醇定容至刻度,充分振蕩、搖勻,于 4 ℃ 12 000 ×離心 10 min,上清液即為供試品溶液。另精密量取 0.1 ml 空白脂質(zhì)體,同法操作,得空白對(duì)照溶液。

    1.2.4 HPLC 法 色譜柱:Inerstil ODS-SP(5 μm,150 mm × 4.6 mm);流動(dòng)相梯度洗脫詳見表 1;流速 1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm;柱溫 30 ℃;進(jìn)樣量 20 μl。

    表 1 流動(dòng)相梯度洗脫

    1.2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取“1.2.2”和“1.2.3”項(xiàng)下吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液、供試品溶液及空白對(duì)照溶液適量,照“1.2.4”項(xiàng)下色譜條件操作,記錄色譜圖。

    1.2.6 破壞性試驗(yàn) 分別取吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液各 5 份,進(jìn)行以下破壞試驗(yàn),再將各待測(cè)溶液注入高效液相色譜儀。

    1.2.6.1 酸破壞 精密量取 2 ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,向其中加入 1 mol/L 鹽酸溶液0.5 ml,室溫下避光放置 0.5 h 后,再按“1.2.3”項(xiàng)下方法操作,得酸破壞供試品溶液。分別精密量取 2 ml 空白脂質(zhì)體和吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液,同法操作,得酸破壞空白對(duì)照溶液及酸破壞吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液。

    1.2.6.2 堿破壞 精密量取 2 ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,向其中加入 1 mol/L 氫氧化鈉溶液 0.5 ml,立即按“1.2.3”項(xiàng)下方法操作,得堿破壞供試品溶液。分別精密量取 2 ml 空白脂質(zhì)體和吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液,同法操作,得堿破壞空白對(duì)照溶液及堿破壞吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液。

    1.2.6.3 氧破壞 精密量取 2 ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,向其中加入3% 過(guò)氧化氫溶液0.5 ml,室溫下避光放置 3 h 后,再按“1.2.3”項(xiàng)下方法操作,得氧破壞供試品溶液。分別精密量取 2 ml 空白脂質(zhì)體和吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液,同法操作,得氧破壞空白對(duì)照溶液及氧破壞吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液。

    1.2.6.4 光破壞 精密量取 2 ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,向其中加入5% 葡萄糖溶液0.5 ml,在低溫光照儀[(4500 ± 500)lx]中照射0.5 h 后,再按“1.2.3”項(xiàng)下方法操作,得光破壞供試品溶液。分別精密量取 2 ml 空白脂質(zhì)體和吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液,同法操作,得光破壞空白對(duì)照溶液及光破壞吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液。

    1.2.6.5 高溫破壞 精密量取 2 ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,向其中加入5% 葡萄糖溶液0.5 ml,在 65 ℃水浴中避光加熱 0.5 h 后,再按“1.2.3”項(xiàng)下方法操作,得高溫破壞供試品溶液。分別精密量取 2 ml 空白脂質(zhì)體和吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液,同法操作,得高溫破壞空白對(duì)照溶液及高溫破壞吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液。

    1.2.7 線性與范圍 分別精密稱取吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照品 8 份,用甲醇溶解,得 8 種不同濃度的吉西他濱肉豆蔻酸酯溶液(濃度范圍為 5.52 ~ 116 μg/ml)。照“1.2.4”項(xiàng)下條件操作,記錄峰面積,以吉西他濱肉豆蔻酸酯峰面積為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,建立回歸方程。

    1.2.8 檢測(cè)限與定量限 精密量取吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體適量,用 5% 葡萄糖溶液遞倍稀釋,照“1.2.3”項(xiàng)下方法處理樣品,照“1.2.4”項(xiàng)下條件操作,進(jìn)樣,并記錄峰面積,分別以信噪比為 3:1 和 10:1 時(shí)相應(yīng)的吉西他濱肉豆蔻酸酯的量為檢測(cè)限和定量限。

    1.2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體 6 份,照“1.2.3”項(xiàng)下方法處理樣品,照“1.2.4”項(xiàng)下條件進(jìn)樣,并記錄峰面積。

    1.2.10 精密度試驗(yàn) 取同一吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,照“1.2.3”項(xiàng)下方法處理樣品,照“1.2.4”項(xiàng)下條件,同 1 天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣 6 次,記錄吉西他濱肉豆蔻酸酯峰面積,計(jì)算日內(nèi)精密度 RSD。另取同一份吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,連續(xù) 6 d,每天同法處理并平行連續(xù)進(jìn)樣 3 次,計(jì)算吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度的日間精密度 RSD。

    1.2.11 回收率試驗(yàn) 精密稱取吉西他濱肉豆蔻酸酯 5.5、5.0、4.5 mg 各 3 份,分別置于 50 ml 量瓶中,加甲醇適量并超聲使吉西他濱肉豆蔻酸酯完全溶解,再加空白脂質(zhì)體溶液 2.5 ml,用甲醇定量至刻度,搖勻,于 4 ℃、12 000 ×離心 10 min,得高、中、低 3 個(gè)濃度的供試品溶液。照“1.2.4”項(xiàng)下條件,分別進(jìn)樣,記錄峰面積,按外標(biāo)法求得吉西他濱肉豆蔻酸酯實(shí)測(cè)值與理論值之比,每個(gè)濃度平行測(cè)定 3 次,求得平均回收率。

    1.2.12 耐用性試驗(yàn)

    1.2.12.1 流速變化的影響 將流速分別設(shè)置為 0.99、1.00、1.01 ml/min,取同一份供試品溶液,照“1.2.4”項(xiàng)下條件,記錄吉西他濱肉豆蔻酸酯保留時(shí)間與峰面積并依據(jù)外標(biāo)法求得吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度。

    1.2.12.2 柱溫對(duì)系統(tǒng)的影響 將柱溫分別設(shè)置為 28、30、32 ℃,取同一份供試品溶液,照“1.2.4”項(xiàng)下條件,記錄吉西他濱肉豆蔻酸酯保留時(shí)間與峰面積并依據(jù)外標(biāo)法求得吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度。

    1.2.13 含量測(cè)定 取 5 批不同批次的吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,分別照“1.2.3”和“1.2.4”項(xiàng)下的條件和操作,吸取供試液,注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,并按照外標(biāo)法計(jì)算主藥的含量(濃度)。

    2 結(jié)果

    2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

    在吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液及供試品溶液中,吉西他濱肉豆蔻酸酯的保留時(shí)間均約15.9 min,分離度為 2.242。同時(shí),空白脂質(zhì)體對(duì)應(yīng)色譜圖中相應(yīng)保留時(shí)間處未見吸收峰(圖 2)。上述結(jié)果表明在已建立的色譜條件下,吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體的輔料對(duì)吉西他濱肉豆蔻酸酯的測(cè)定無(wú)干擾。

    我國(guó)為了緩解交通壓力,建立了各種橋體,如城市立交橋、高架橋、過(guò)街天橋等。城市綠化的相關(guān)工作人員可以利用這一條件,在橋身和立柱上設(shè)計(jì)種植槽和垂掛吊籃。目前,在橋面與橋身上可以設(shè)置金銀花、牽?;ǖ戎参?,在橋柱上則可以配置一些凌霄、爬山虎等攀援植物,這種綠化形式可以在不影響駕駛員駕駛的情況下,起到美化城市和凈化空氣的作用。

    1:吉西他濱肉豆蔻酸酯;a:吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體;b:空白脂質(zhì)體;c:溶媒;d:吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液

    Figure 2 Chromatograms of system suitability

    1:吉西他濱肉豆蔻酸酯;a:空白脂質(zhì)體;b:吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體;c:吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液

    Figure 3 Typical chromatograms of destructive test [Destruction by acid (A); by base (B); by oxidation(C); by illumination (D); by high temperature (E); nondestruction (F)]

    2.2 破壞性試驗(yàn)

    分別取各待測(cè)溶液,照“1.2.4”項(xiàng)下操作,記錄色譜圖(圖 3)。結(jié)果表明,吉西他濱肉豆蔻酸酯色譜峰遇酸、氧、光、高溫破壞產(chǎn)生的降解產(chǎn)物色譜峰均能有效分離,說(shuō)明本方法專屬性良好。堿破壞試驗(yàn)組均未檢測(cè)出吉西他濱肉豆蔻酸酯色譜峰,加入堿后均出現(xiàn)大量氣泡,表明其對(duì)堿極不穩(wěn)定。

    2.3 線性與范圍

    以吉西他濱肉豆蔻酸酯峰面積為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程:= 14721– 11435,= 0.9999,結(jié)果見表 2 和圖 4。

    2.4 檢測(cè)限與定量限

    經(jīng)檢測(cè),吉西他濱肉豆蔻酸酯的檢測(cè)限為2.0 ng(S/N = 3),定量限為 8.4 ng(S/N = 10)。結(jié)果見圖 5 和圖 6。

    2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

    取同一吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體 6 份,經(jīng)統(tǒng)計(jì),吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度的 RSD = 0.74%(n = 6)(表 3)。

    表 2 線性與范圍

    圖 4 線性與范圍

    Figure 4 Linear and range

    圖 5 檢測(cè)限色譜圖

    Figure 5 Limit of detection chromatogram

    圖 6 定量限色譜圖

    Figure 6 Limit of quantification chromatogram

    表 3 重復(fù)性試驗(yàn)

    2.6 精密度試驗(yàn)

    統(tǒng)計(jì)得吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度的日內(nèi)精密度 RSD 為 0.28%(n = 6),吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度的日間精密度 RSD 為 0.55%(n = 6)(表4 和表 5)。

    2.7 回收率試驗(yàn)

    統(tǒng)計(jì)求得高、中、低 3 個(gè)加樣平均回收率為 96.8%(RSD = 0.49%,n = 3)、99.7%(RSD = 0.15%,n = 3)和 99.8%(RSD = 0.50%,n = 3)(表 6)。

    表 4 日內(nèi)精密度

    表 5 日間精密度

    表 6 回收率試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

    2.8 耐用性試驗(yàn)

    流速在 0.99 ~ 1.01 ml/min 范圍內(nèi)變化時(shí),吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度的 RSD 為 1.19%(n = 9)(表 7),說(shuō)明該方法的耐用性良好。柱溫在 28 ~ 32 ℃之間變化時(shí)吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度的 RSD 為 0.66%(n = 9)(表 7),說(shuō)明柱溫在 28 ~32 ℃之間變化時(shí)對(duì)吉西他濱肉豆蔻酸酯含量測(cè)定結(jié)果的影響在可接受范圍內(nèi)。

    2.9 含量測(cè)定

    5 批脂質(zhì)體含量測(cè)定結(jié)果見表 8。

    表 7 耐用性試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

    表 8 五批吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體含量測(cè)定結(jié)果

    3 討論

    3.1 樣品提取方法及脂質(zhì)體破乳劑用量倍數(shù)的選擇

    脂質(zhì)體中主藥的含量需采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄆ茐闹|(zhì)體雙分子層,使藥物釋放出來(lái),再用 HPLC 法測(cè)定其含量。用有機(jī)溶劑破乳是目前常用的破壞脂質(zhì)體雙分子層的方法。吉西他濱肉豆蔻酸酯在非極性溶劑(如甲醇)中具有較好的溶解性,同時(shí)甲醇也為 HPLC 法中常用的有機(jī)相,因此本實(shí)驗(yàn)選擇甲醇作為溶劑,破乳的同時(shí),也能將主藥充分溶解提取,便于后續(xù)的含量測(cè)定。

    脂質(zhì)體破乳完全與否對(duì)準(zhǔn)確測(cè)定脂質(zhì)體中主藥的含量至關(guān)重要。破乳時(shí)有機(jī)溶劑加入倍數(shù)太低可能導(dǎo)致脂質(zhì)體破壞不完全,藥物提取不充分,測(cè)得含量偏低;有機(jī)溶劑加入倍數(shù)太高可能會(huì)導(dǎo)致主藥被過(guò)量稀釋,測(cè)得含量不準(zhǔn)確,因此需要選擇合適的破乳劑用量(倍數(shù))。在實(shí)驗(yàn)中我們?cè)O(shè)計(jì)了 5、10、20、30、40、50和 60 倍的破乳倍數(shù),當(dāng)破乳 20 倍時(shí),繼續(xù)增加破乳倍數(shù),測(cè)得含量不再增加且藥物收率大于 99%,表明破乳劑用量 20 倍時(shí),能破乳完全且能將主藥充分溶解并提取,且又能準(zhǔn)確定量檢測(cè)。因此,我們將最佳破乳劑用量倍數(shù)確定為 20。

    3.2 藥物穩(wěn)定性的影響因素

    在本文的專屬性實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn),吉西他濱肉豆蔻酸酯在酸、光和高溫下不穩(wěn)定,而吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體在酸、光和高溫下較穩(wěn)定,表明脂質(zhì)體對(duì)藥物的包封包載能夠保護(hù)藥物免于某些條件的降解破壞,體現(xiàn)了脂質(zhì)體具有穩(wěn)定藥物的優(yōu)點(diǎn)。同時(shí),在建立的色譜條件下,主藥色譜峰與破壞產(chǎn)生的降解產(chǎn)物色譜峰均能有效分離,說(shuō)明本方法專屬性良好。

    本研究建立 HPLC 法用于吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中吉西他濱肉豆蔻酸酯含量的測(cè)定,通過(guò)系統(tǒng)的方法學(xué)研究與驗(yàn)證,認(rèn)為本方法操作簡(jiǎn)便、專屬性好、準(zhǔn)確度高,適合于吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中主藥的含量測(cè)定。本方法對(duì)其他吉西他濱酯化物納米制劑的含量測(cè)定具有參考價(jià)值。

    [1] Dubey RD, Saneja A, Gupta PK, et al. Recent advances in drug delivery strategies for improved therapeutic efficacy of gemcitabine. Eur J Pharm Sci, 2016, 93:147-162.

    [2] Wang G, Chen H, Zhao D, et al. Combination of L-carnitine with lipophilic linkage-donating gemcitabine derivatives as intestinal novel organic cation transporter 2-targeting oral prodrugs. J Med Chem, 2017, 60(6):2552-2561.

    [3] Li T, Chen L, Deng Y, et al. Cholesterol derivative-based liposomes for gemcitabine delivery: preparation, in vitro, and in vivo characterization. Drug Dev Ind Pharm, 2017, 43(12):2016-2025.

    [4] Zhang YS, Tian L, Chen TZ. Application of gemcitabine in various tumors. Chongqing Med, 2018, 47(20):2724-2728. (in Chinese)

    張?jiān)漆? 田莉, 陳田子. 吉西他濱在多種腫瘤中的應(yīng)用. 重慶醫(yī)學(xué), 2018, 47(20):2724-2728.

    [5] Luo F, Wang D, Xia GM. Research advances of anticancer drug gemcitabine nano-delivery system. Chin Med Biotechnol, 2019, 14(1): 83-88. (in Chinese)

    羅芳, 王丹, 夏桂民. 抗癌藥物吉西他濱納米遞送系統(tǒng)的研究進(jìn)展. 中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù), 2019, 14(1):83-88.

    [6] International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use. ICH Q2(R1) - Validation of analytical procedures: text and methodology. ICH: 1995.

    [7] Moein MM, El Beqqali A, Abdel-Rehim M. Bioanalytical method development and validation: Critical concepts and strategies. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2017, 1043:3-11.

    [8] Shabir GA, Lough WJ, Arain SA, et al. Evaluation and application of best practice in analytical method validation.J Liquid Chromatography Relat Technol, 2007, 30(3):311-333.

    Determination of the principal agent in dimyristoyl-gemcitabine liposomes by HPLC

    LUO Fang, LI Yan, GUO Xiao-ru, WANG A-peng, XIA Gui-min

    Pharmaceutics Department, Institute of Medicinal Biotechnology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China

    To establish an HPLC method for the quantification of the principal agent in dimyristoyl-gemcitabine liposomes.

    HPLC method was used to determine the content of the principal agent in liposomes and systematic methodological verification was performed.

    The method was validated: with a resolution of 2.242; linear, in the range of 5.52 - 116 μg/ml (= 0.9999) and accurate, with the average recovery rate of 96.8% (RSD = 0.49%, n = 3), 99.7% (RSD = 0.15%, n = 3) and 99.8% (RSD = 0.50%, n = 3) at low, medium and high concentrations; precision, intra-day and inter-day precision reflected by the relative standard deviation (RSD) values of 0.28% (n = 6) and 0.55% (n = 6) respectively, robust under slight changes of flow rate (0.99 - 1.01 ml/min) and column temperature (28 - 32 ℃) with RSD of 1.19% (n = 9) and 0.66% (n = 9), respectively.

    A simple, selective, sensitive and robust HPLC method has been established for the determination of the principal agent in dimyristoyl-gemcitabine liposomes.

    HPLC; Determination; Validation; Dimyristoyl-gemcitabine; Liposome

    XIA Gui-min, Email: xiaguimin@126.com

    10.3969/j.issn.1673-713X.2020.02.010

    國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2016YFA0201504);國(guó)家自然科學(xué)基金(81673383、81603063);中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與健康科技創(chuàng)新工程(2016-12M-3-013)

    夏桂民,Email:xiaguimin@126.com

    2019-11-14

    *同為第一作者

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