• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    HPLC法測(cè)定吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中主藥的含量

    2020-04-16 02:31:34羅芳李巖郭曉茹汪阿鵬夏桂民
    關(guān)鍵詞:酸酯肉豆蔻吉西

    羅芳,李巖,郭曉茹,汪阿鵬,夏桂民

    ·論著·

    HPLC法測(cè)定吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中主藥的含量

    羅芳*,李巖*,郭曉茹,汪阿鵬,夏桂民

    100050 北京,中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所制劑研究室

    建立吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中主藥的含量測(cè)定方法。

    采用 HPLC 法測(cè)定脂質(zhì)體中主藥的含量并進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證。

    色譜分離度 R = 2.242,陰性對(duì)照無(wú)干擾;吉西他濱肉豆蔻酸酯在 5.52 ~ 116 μg/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(= 0.9999);低、中、高 3 種濃度的平均回收率分別為 96.8%(RSD = 0.49%,n = 3)、99.7%(RSD = 0.15%,n = 3)和 99.8%(RSD = 0.50%,n = 3);日內(nèi)精密度 RSD = 0.28%(n = 6),日間精密度 RSD = 0.55%(n = 6);流速在 0.99 ~ 1.01 ml/min 范圍內(nèi)變化時(shí)RSD = 1.19%(n = 9),柱溫在28 ~ 32 ℃之間變化時(shí) RSD = 0.66%(n = 9)。

    建立的方法簡(jiǎn)便易行、穩(wěn)定、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、耐用性好,可定量檢測(cè)吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中主藥的含量。

    高效液相色譜; 含量測(cè)定; 分析方法驗(yàn)證; 吉西他濱肉豆蔻酸酯; 脂質(zhì)體

    吉西他濱屬細(xì)胞周期特異性抗代謝類藥物,主要作用于 S 期,是一種人工合成的胞嘧啶核苷衍生物[1]。作為一線化療用藥,吉西他濱對(duì)多種實(shí)體瘤治療效果顯著,尤其是對(duì)胰腺癌、非小細(xì)胞肺癌和乳腺癌,單一用藥或聯(lián)合其他抗癌藥物都能取得很好療效。

    臨床常用的劑型為注射用鹽酸吉西他濱,但是其在體內(nèi)容易被胞嘧啶核苷脫氨酶等酶迅速降解(半衰期很短,僅為 8 ~ 17 min),成為無(wú)活性的雙氟脫氧尿苷(dFdU),因此,吉西他濱若要維持有效的藥物濃度就必須大劑量給藥[2-3]。美國(guó)國(guó)家癌癥綜合網(wǎng)絡(luò)及歐洲腫瘤協(xié)會(huì)指南推薦的標(biāo)準(zhǔn)劑量 1000 ~ 1250 mg/m2,且 30 min 內(nèi)靜脈輸注完成。持續(xù)大劑量給藥導(dǎo)致較強(qiáng)毒副作用,如:呼吸困難、脫發(fā)、水腫、骨髓抑制、腎毒性、胃腸道反應(yīng)、流感樣反應(yīng)、過(guò)敏反應(yīng)等[4-5]。

    納米技術(shù)的發(fā)展為改善藥物體內(nèi)循環(huán)時(shí)間,增效減毒帶來(lái)了新希望。本課題組對(duì)吉西他濱進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造,設(shè)計(jì)并合成脂水分配系數(shù)適宜的改良型新藥吉西他濱肉豆蔻酸酯(dimyristoyl-gemcitabine,dmGEM,圖 1),再利用納米技術(shù)、以磷脂為基礎(chǔ)賦形劑構(gòu)建長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體,規(guī)避體內(nèi)相關(guān)酶的降解,延長(zhǎng)半衰期,增強(qiáng)療效,降低毒性,提高患者依從性,其臨床意義重大。目前,尚未見吉西他濱肉豆蔻酸酯納米制劑中主藥分析方法的相關(guān)報(bào)道,因此需要建立吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中主藥的含量測(cè)定法,便于吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體的定量分析。

    圖 1 吉西他濱肉豆蔻酸酯化學(xué)結(jié)構(gòu)式(R = C13H17,分子式:C37H63F2N3O6,分子量:683.47)

    Figure 1 Chemical structure of dimyristoyl-gemcitabine (R = C13H17,molecular formula: C37H63F2N3O6, molecular weight: 683.47)

    本研究建立了簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)的 HPLC 法,并對(duì)該法進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證[6-8],證明該法適用于吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體的含量測(cè)定。本法對(duì)其他吉西他濱酯化物納米制劑的含量測(cè)定也具有參考價(jià)值。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    LC-20A 高效液相色譜儀和 Inerstil ODS-SP 色譜柱(5 μm,150 mm × 4.6 mm)購(gòu)自日本島津公司;R-300 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀購(gòu)自瑞士 Buchi 公司;XSE105 分析天平購(gòu)自瑞士梅特勒公司;KQ-250DB 型數(shù)控超聲波清洗器購(gòu)自昆山市超聲儀器有限公司;低溫光照儀購(gòu)自藥物制劑國(guó)家研究中心。

    吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體自制,批號(hào)2019031405、2019032101、2019032102、2019032103、2019032104、2019032105;吉西他濱肉豆蔻酸酯原料及工作對(duì)照品,批號(hào) 20190307,99.0%,本所合成室制備;聚乙二醇二硬脂酸磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)和注射級(jí)膽固醇購(gòu)自上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司;色譜純甲醇購(gòu)自美國(guó) Fisher Scientific 公司;分析純二水合磷酸二氫鈉購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;其他試劑也均為色譜純。

    1.2 方法

    1.2.1 配制 PBS 緩沖液(pH 2.4 ~ 2.6) 參照中國(guó)藥典(2015),稱取 NaH2PO413.8 g,置于 2000 ml燒杯,加水適量,使之溶解,另量取 H3PO42.5 ml 滴加至上述溶液,再加水稀釋至 1000 ml,攪勻。用 H3PO4調(diào)節(jié) pH 至 2.53,得 PBS 緩沖液(pH 2.53),0.22 μm 濾膜抽濾,臨用前超聲脫氣 15 min,室溫放置備用。

    1.2.2 吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液制備 精密稱取吉西他濱肉豆蔻酸酯2.50 mg,置于 50 ml 量瓶中,加入適量甲醇,超聲使其完全溶解,再用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得 50 μg/ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液。

    1.2.3 供試品溶液及空白對(duì)照溶液制備 精密量取 0.1 ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體溶液,置于 2 ml 量瓶中,用甲醇定容至刻度,充分振蕩、搖勻,于 4 ℃ 12 000 ×離心 10 min,上清液即為供試品溶液。另精密量取 0.1 ml 空白脂質(zhì)體,同法操作,得空白對(duì)照溶液。

    1.2.4 HPLC 法 色譜柱:Inerstil ODS-SP(5 μm,150 mm × 4.6 mm);流動(dòng)相梯度洗脫詳見表 1;流速 1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm;柱溫 30 ℃;進(jìn)樣量 20 μl。

    表 1 流動(dòng)相梯度洗脫

    1.2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取“1.2.2”和“1.2.3”項(xiàng)下吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液、供試品溶液及空白對(duì)照溶液適量,照“1.2.4”項(xiàng)下色譜條件操作,記錄色譜圖。

    1.2.6 破壞性試驗(yàn) 分別取吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液各 5 份,進(jìn)行以下破壞試驗(yàn),再將各待測(cè)溶液注入高效液相色譜儀。

    1.2.6.1 酸破壞 精密量取 2 ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,向其中加入 1 mol/L 鹽酸溶液0.5 ml,室溫下避光放置 0.5 h 后,再按“1.2.3”項(xiàng)下方法操作,得酸破壞供試品溶液。分別精密量取 2 ml 空白脂質(zhì)體和吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液,同法操作,得酸破壞空白對(duì)照溶液及酸破壞吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液。

    1.2.6.2 堿破壞 精密量取 2 ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,向其中加入 1 mol/L 氫氧化鈉溶液 0.5 ml,立即按“1.2.3”項(xiàng)下方法操作,得堿破壞供試品溶液。分別精密量取 2 ml 空白脂質(zhì)體和吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液,同法操作,得堿破壞空白對(duì)照溶液及堿破壞吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液。

    1.2.6.3 氧破壞 精密量取 2 ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,向其中加入3% 過(guò)氧化氫溶液0.5 ml,室溫下避光放置 3 h 后,再按“1.2.3”項(xiàng)下方法操作,得氧破壞供試品溶液。分別精密量取 2 ml 空白脂質(zhì)體和吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液,同法操作,得氧破壞空白對(duì)照溶液及氧破壞吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液。

    1.2.6.4 光破壞 精密量取 2 ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,向其中加入5% 葡萄糖溶液0.5 ml,在低溫光照儀[(4500 ± 500)lx]中照射0.5 h 后,再按“1.2.3”項(xiàng)下方法操作,得光破壞供試品溶液。分別精密量取 2 ml 空白脂質(zhì)體和吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液,同法操作,得光破壞空白對(duì)照溶液及光破壞吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液。

    1.2.6.5 高溫破壞 精密量取 2 ml 吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,向其中加入5% 葡萄糖溶液0.5 ml,在 65 ℃水浴中避光加熱 0.5 h 后,再按“1.2.3”項(xiàng)下方法操作,得高溫破壞供試品溶液。分別精密量取 2 ml 空白脂質(zhì)體和吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液,同法操作,得高溫破壞空白對(duì)照溶液及高溫破壞吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液。

    1.2.7 線性與范圍 分別精密稱取吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照品 8 份,用甲醇溶解,得 8 種不同濃度的吉西他濱肉豆蔻酸酯溶液(濃度范圍為 5.52 ~ 116 μg/ml)。照“1.2.4”項(xiàng)下條件操作,記錄峰面積,以吉西他濱肉豆蔻酸酯峰面積為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,建立回歸方程。

    1.2.8 檢測(cè)限與定量限 精密量取吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體適量,用 5% 葡萄糖溶液遞倍稀釋,照“1.2.3”項(xiàng)下方法處理樣品,照“1.2.4”項(xiàng)下條件操作,進(jìn)樣,并記錄峰面積,分別以信噪比為 3:1 和 10:1 時(shí)相應(yīng)的吉西他濱肉豆蔻酸酯的量為檢測(cè)限和定量限。

    1.2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體 6 份,照“1.2.3”項(xiàng)下方法處理樣品,照“1.2.4”項(xiàng)下條件進(jìn)樣,并記錄峰面積。

    1.2.10 精密度試驗(yàn) 取同一吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,照“1.2.3”項(xiàng)下方法處理樣品,照“1.2.4”項(xiàng)下條件,同 1 天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣 6 次,記錄吉西他濱肉豆蔻酸酯峰面積,計(jì)算日內(nèi)精密度 RSD。另取同一份吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,連續(xù) 6 d,每天同法處理并平行連續(xù)進(jìn)樣 3 次,計(jì)算吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度的日間精密度 RSD。

    1.2.11 回收率試驗(yàn) 精密稱取吉西他濱肉豆蔻酸酯 5.5、5.0、4.5 mg 各 3 份,分別置于 50 ml 量瓶中,加甲醇適量并超聲使吉西他濱肉豆蔻酸酯完全溶解,再加空白脂質(zhì)體溶液 2.5 ml,用甲醇定量至刻度,搖勻,于 4 ℃、12 000 ×離心 10 min,得高、中、低 3 個(gè)濃度的供試品溶液。照“1.2.4”項(xiàng)下條件,分別進(jìn)樣,記錄峰面積,按外標(biāo)法求得吉西他濱肉豆蔻酸酯實(shí)測(cè)值與理論值之比,每個(gè)濃度平行測(cè)定 3 次,求得平均回收率。

    1.2.12 耐用性試驗(yàn)

    1.2.12.1 流速變化的影響 將流速分別設(shè)置為 0.99、1.00、1.01 ml/min,取同一份供試品溶液,照“1.2.4”項(xiàng)下條件,記錄吉西他濱肉豆蔻酸酯保留時(shí)間與峰面積并依據(jù)外標(biāo)法求得吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度。

    1.2.12.2 柱溫對(duì)系統(tǒng)的影響 將柱溫分別設(shè)置為 28、30、32 ℃,取同一份供試品溶液,照“1.2.4”項(xiàng)下條件,記錄吉西他濱肉豆蔻酸酯保留時(shí)間與峰面積并依據(jù)外標(biāo)法求得吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度。

    1.2.13 含量測(cè)定 取 5 批不同批次的吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體,分別照“1.2.3”和“1.2.4”項(xiàng)下的條件和操作,吸取供試液,注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,并按照外標(biāo)法計(jì)算主藥的含量(濃度)。

    2 結(jié)果

    2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

    在吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液及供試品溶液中,吉西他濱肉豆蔻酸酯的保留時(shí)間均約15.9 min,分離度為 2.242。同時(shí),空白脂質(zhì)體對(duì)應(yīng)色譜圖中相應(yīng)保留時(shí)間處未見吸收峰(圖 2)。上述結(jié)果表明在已建立的色譜條件下,吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體的輔料對(duì)吉西他濱肉豆蔻酸酯的測(cè)定無(wú)干擾。

    我國(guó)為了緩解交通壓力,建立了各種橋體,如城市立交橋、高架橋、過(guò)街天橋等。城市綠化的相關(guān)工作人員可以利用這一條件,在橋身和立柱上設(shè)計(jì)種植槽和垂掛吊籃。目前,在橋面與橋身上可以設(shè)置金銀花、牽?;ǖ戎参?,在橋柱上則可以配置一些凌霄、爬山虎等攀援植物,這種綠化形式可以在不影響駕駛員駕駛的情況下,起到美化城市和凈化空氣的作用。

    1:吉西他濱肉豆蔻酸酯;a:吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體;b:空白脂質(zhì)體;c:溶媒;d:吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液

    Figure 2 Chromatograms of system suitability

    1:吉西他濱肉豆蔻酸酯;a:空白脂質(zhì)體;b:吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體;c:吉西他濱肉豆蔻酸酯對(duì)照溶液

    Figure 3 Typical chromatograms of destructive test [Destruction by acid (A); by base (B); by oxidation(C); by illumination (D); by high temperature (E); nondestruction (F)]

    2.2 破壞性試驗(yàn)

    分別取各待測(cè)溶液,照“1.2.4”項(xiàng)下操作,記錄色譜圖(圖 3)。結(jié)果表明,吉西他濱肉豆蔻酸酯色譜峰遇酸、氧、光、高溫破壞產(chǎn)生的降解產(chǎn)物色譜峰均能有效分離,說(shuō)明本方法專屬性良好。堿破壞試驗(yàn)組均未檢測(cè)出吉西他濱肉豆蔻酸酯色譜峰,加入堿后均出現(xiàn)大量氣泡,表明其對(duì)堿極不穩(wěn)定。

    2.3 線性與范圍

    以吉西他濱肉豆蔻酸酯峰面積為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程:= 14721– 11435,= 0.9999,結(jié)果見表 2 和圖 4。

    2.4 檢測(cè)限與定量限

    經(jīng)檢測(cè),吉西他濱肉豆蔻酸酯的檢測(cè)限為2.0 ng(S/N = 3),定量限為 8.4 ng(S/N = 10)。結(jié)果見圖 5 和圖 6。

    2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

    取同一吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體 6 份,經(jīng)統(tǒng)計(jì),吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度的 RSD = 0.74%(n = 6)(表 3)。

    表 2 線性與范圍

    圖 4 線性與范圍

    Figure 4 Linear and range

    圖 5 檢測(cè)限色譜圖

    Figure 5 Limit of detection chromatogram

    圖 6 定量限色譜圖

    Figure 6 Limit of quantification chromatogram

    表 3 重復(fù)性試驗(yàn)

    2.6 精密度試驗(yàn)

    統(tǒng)計(jì)得吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度的日內(nèi)精密度 RSD 為 0.28%(n = 6),吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度的日間精密度 RSD 為 0.55%(n = 6)(表4 和表 5)。

    2.7 回收率試驗(yàn)

    統(tǒng)計(jì)求得高、中、低 3 個(gè)加樣平均回收率為 96.8%(RSD = 0.49%,n = 3)、99.7%(RSD = 0.15%,n = 3)和 99.8%(RSD = 0.50%,n = 3)(表 6)。

    表 4 日內(nèi)精密度

    表 5 日間精密度

    表 6 回收率試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

    2.8 耐用性試驗(yàn)

    流速在 0.99 ~ 1.01 ml/min 范圍內(nèi)變化時(shí),吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度的 RSD 為 1.19%(n = 9)(表 7),說(shuō)明該方法的耐用性良好。柱溫在 28 ~ 32 ℃之間變化時(shí)吉西他濱肉豆蔻酸酯濃度的 RSD 為 0.66%(n = 9)(表 7),說(shuō)明柱溫在 28 ~32 ℃之間變化時(shí)對(duì)吉西他濱肉豆蔻酸酯含量測(cè)定結(jié)果的影響在可接受范圍內(nèi)。

    2.9 含量測(cè)定

    5 批脂質(zhì)體含量測(cè)定結(jié)果見表 8。

    表 7 耐用性試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

    表 8 五批吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體含量測(cè)定結(jié)果

    3 討論

    3.1 樣品提取方法及脂質(zhì)體破乳劑用量倍數(shù)的選擇

    脂質(zhì)體中主藥的含量需采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄆ茐闹|(zhì)體雙分子層,使藥物釋放出來(lái),再用 HPLC 法測(cè)定其含量。用有機(jī)溶劑破乳是目前常用的破壞脂質(zhì)體雙分子層的方法。吉西他濱肉豆蔻酸酯在非極性溶劑(如甲醇)中具有較好的溶解性,同時(shí)甲醇也為 HPLC 法中常用的有機(jī)相,因此本實(shí)驗(yàn)選擇甲醇作為溶劑,破乳的同時(shí),也能將主藥充分溶解提取,便于后續(xù)的含量測(cè)定。

    脂質(zhì)體破乳完全與否對(duì)準(zhǔn)確測(cè)定脂質(zhì)體中主藥的含量至關(guān)重要。破乳時(shí)有機(jī)溶劑加入倍數(shù)太低可能導(dǎo)致脂質(zhì)體破壞不完全,藥物提取不充分,測(cè)得含量偏低;有機(jī)溶劑加入倍數(shù)太高可能會(huì)導(dǎo)致主藥被過(guò)量稀釋,測(cè)得含量不準(zhǔn)確,因此需要選擇合適的破乳劑用量(倍數(shù))。在實(shí)驗(yàn)中我們?cè)O(shè)計(jì)了 5、10、20、30、40、50和 60 倍的破乳倍數(shù),當(dāng)破乳 20 倍時(shí),繼續(xù)增加破乳倍數(shù),測(cè)得含量不再增加且藥物收率大于 99%,表明破乳劑用量 20 倍時(shí),能破乳完全且能將主藥充分溶解并提取,且又能準(zhǔn)確定量檢測(cè)。因此,我們將最佳破乳劑用量倍數(shù)確定為 20。

    3.2 藥物穩(wěn)定性的影響因素

    在本文的專屬性實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn),吉西他濱肉豆蔻酸酯在酸、光和高溫下不穩(wěn)定,而吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體在酸、光和高溫下較穩(wěn)定,表明脂質(zhì)體對(duì)藥物的包封包載能夠保護(hù)藥物免于某些條件的降解破壞,體現(xiàn)了脂質(zhì)體具有穩(wěn)定藥物的優(yōu)點(diǎn)。同時(shí),在建立的色譜條件下,主藥色譜峰與破壞產(chǎn)生的降解產(chǎn)物色譜峰均能有效分離,說(shuō)明本方法專屬性良好。

    本研究建立 HPLC 法用于吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中吉西他濱肉豆蔻酸酯含量的測(cè)定,通過(guò)系統(tǒng)的方法學(xué)研究與驗(yàn)證,認(rèn)為本方法操作簡(jiǎn)便、專屬性好、準(zhǔn)確度高,適合于吉西他濱肉豆蔻酸酯脂質(zhì)體中主藥的含量測(cè)定。本方法對(duì)其他吉西他濱酯化物納米制劑的含量測(cè)定具有參考價(jià)值。

    [1] Dubey RD, Saneja A, Gupta PK, et al. Recent advances in drug delivery strategies for improved therapeutic efficacy of gemcitabine. Eur J Pharm Sci, 2016, 93:147-162.

    [2] Wang G, Chen H, Zhao D, et al. Combination of L-carnitine with lipophilic linkage-donating gemcitabine derivatives as intestinal novel organic cation transporter 2-targeting oral prodrugs. J Med Chem, 2017, 60(6):2552-2561.

    [3] Li T, Chen L, Deng Y, et al. Cholesterol derivative-based liposomes for gemcitabine delivery: preparation, in vitro, and in vivo characterization. Drug Dev Ind Pharm, 2017, 43(12):2016-2025.

    [4] Zhang YS, Tian L, Chen TZ. Application of gemcitabine in various tumors. Chongqing Med, 2018, 47(20):2724-2728. (in Chinese)

    張?jiān)漆? 田莉, 陳田子. 吉西他濱在多種腫瘤中的應(yīng)用. 重慶醫(yī)學(xué), 2018, 47(20):2724-2728.

    [5] Luo F, Wang D, Xia GM. Research advances of anticancer drug gemcitabine nano-delivery system. Chin Med Biotechnol, 2019, 14(1): 83-88. (in Chinese)

    羅芳, 王丹, 夏桂民. 抗癌藥物吉西他濱納米遞送系統(tǒng)的研究進(jìn)展. 中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù), 2019, 14(1):83-88.

    [6] International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use. ICH Q2(R1) - Validation of analytical procedures: text and methodology. ICH: 1995.

    [7] Moein MM, El Beqqali A, Abdel-Rehim M. Bioanalytical method development and validation: Critical concepts and strategies. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2017, 1043:3-11.

    [8] Shabir GA, Lough WJ, Arain SA, et al. Evaluation and application of best practice in analytical method validation.J Liquid Chromatography Relat Technol, 2007, 30(3):311-333.

    Determination of the principal agent in dimyristoyl-gemcitabine liposomes by HPLC

    LUO Fang, LI Yan, GUO Xiao-ru, WANG A-peng, XIA Gui-min

    Pharmaceutics Department, Institute of Medicinal Biotechnology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China

    To establish an HPLC method for the quantification of the principal agent in dimyristoyl-gemcitabine liposomes.

    HPLC method was used to determine the content of the principal agent in liposomes and systematic methodological verification was performed.

    The method was validated: with a resolution of 2.242; linear, in the range of 5.52 - 116 μg/ml (= 0.9999) and accurate, with the average recovery rate of 96.8% (RSD = 0.49%, n = 3), 99.7% (RSD = 0.15%, n = 3) and 99.8% (RSD = 0.50%, n = 3) at low, medium and high concentrations; precision, intra-day and inter-day precision reflected by the relative standard deviation (RSD) values of 0.28% (n = 6) and 0.55% (n = 6) respectively, robust under slight changes of flow rate (0.99 - 1.01 ml/min) and column temperature (28 - 32 ℃) with RSD of 1.19% (n = 9) and 0.66% (n = 9), respectively.

    A simple, selective, sensitive and robust HPLC method has been established for the determination of the principal agent in dimyristoyl-gemcitabine liposomes.

    HPLC; Determination; Validation; Dimyristoyl-gemcitabine; Liposome

    XIA Gui-min, Email: xiaguimin@126.com

    10.3969/j.issn.1673-713X.2020.02.010

    國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2016YFA0201504);國(guó)家自然科學(xué)基金(81673383、81603063);中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與健康科技創(chuàng)新工程(2016-12M-3-013)

    夏桂民,Email:xiaguimin@126.com

    2019-11-14

    *同為第一作者

    猜你喜歡
    酸酯肉豆蔻吉西
    乙醇酸酯制乙醛酸酯的生產(chǎn)方法
    能源化工(2022年3期)2023-01-15 02:26:43
    一測(cè)多評(píng)法同時(shí)測(cè)定肉豆蔻-8散中5種成分
    中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:14
    非小細(xì)胞肺癌晚期患者應(yīng)用吉西他濱治療的護(hù)理體會(huì)
    氣相色譜法測(cè)定肉豆蔻-8散中的丁香酚的含量
    重組人血小板生成素預(yù)防吉西他濱化療相關(guān)血小板減少癥的臨床觀察
    肉豆蔻揮發(fā)油抑菌及抗花生油氧化作用研究
    惡性腫瘤患者應(yīng)用吉西他濱化療對(duì)凝血功能的影響
    Cu(Ⅱ),Ni(Ⅱ),Co(Ⅱ),Mn(Ⅱ),Zn(Ⅱ)和Cd(Ⅱ)的乙基3-(2-氨硫化亞肼基)-2-(羥胺基)丁烯酸酯配合物:合成、表征和細(xì)胞毒性
    二十味肉豆蔻丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
    歐盟將褐煤酸酯移出許可食品添加劑清單
    白带黄色成豆腐渣| 亚洲,欧美,日韩| 嫩草影院精品99| 看免费成人av毛片| 欧美zozozo另类| 看十八女毛片水多多多| 国产高清国产精品国产三级 | 国产高清有码在线观看视频| 特级一级黄色大片| 国产av不卡久久| 搞女人的毛片| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 好男人在线观看高清免费视频| 亚洲av日韩在线播放| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲av男天堂| 内射极品少妇av片p| 18禁在线播放成人免费| 国产高清不卡午夜福利| 成人鲁丝片一二三区免费| 蜜臀久久99精品久久宅男| 五月天丁香电影| 亚洲精品成人久久久久久| 国产乱来视频区| 免费观看a级毛片全部| 极品教师在线视频| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国产一区有黄有色的免费视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 不卡视频在线观看欧美| 国产一级毛片在线| 91久久精品国产一区二区成人| 只有这里有精品99| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 亚洲人成网站高清观看| 日韩免费高清中文字幕av| 高清av免费在线| av免费观看日本| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 日韩不卡一区二区三区视频在线| 色5月婷婷丁香| 麻豆乱淫一区二区| 嫩草影院新地址| 男女下面进入的视频免费午夜| 天天一区二区日本电影三级| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲最大成人av| 在线观看一区二区三区| 成年女人看的毛片在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 欧美日韩亚洲高清精品| 大片免费播放器 马上看| 麻豆国产97在线/欧美| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 欧美丝袜亚洲另类| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲第一区二区三区不卡| 免费av观看视频| 三级国产精品片| 久久99热这里只频精品6学生| 1000部很黄的大片| 一本一本综合久久| www.av在线官网国产| 日本三级黄在线观看| 99热全是精品| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 青春草亚洲视频在线观看| 亚州av有码| av播播在线观看一区| 伦理电影大哥的女人| 可以在线观看毛片的网站| 九九爱精品视频在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 亚洲av成人精品一二三区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 精品一区二区三卡| 国产精品一二三区在线看| 日本一二三区视频观看| 久久久久久久精品精品| 亚洲国产欧美人成| 久久久精品欧美日韩精品| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 成人无遮挡网站| 视频中文字幕在线观看| www.色视频.com| 免费观看a级毛片全部| 国产一区二区三区av在线| 日日啪夜夜撸| 久久久亚洲精品成人影院| 寂寞人妻少妇视频99o| 色网站视频免费| 色综合色国产| 亚洲欧美日韩东京热| 99re6热这里在线精品视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 午夜免费观看性视频| 秋霞伦理黄片| 男女那种视频在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 国产91av在线免费观看| 亚洲成人一二三区av| 国产乱来视频区| 最近的中文字幕免费完整| 一本一本综合久久| 国产综合精华液| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | av卡一久久| 色哟哟·www| 日韩大片免费观看网站| 街头女战士在线观看网站| 永久网站在线| 亚洲电影在线观看av| 看十八女毛片水多多多| 免费看光身美女| 色5月婷婷丁香| 人妻一区二区av| 人妻一区二区av| 国产成人freesex在线| 久久久精品免费免费高清| 成人综合一区亚洲| 在线观看人妻少妇| 国产综合懂色| 在线观看人妻少妇| 成人综合一区亚洲| 精品一区二区三卡| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲av不卡在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 熟妇人妻不卡中文字幕| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产一级毛片在线| 亚洲图色成人| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产男人的电影天堂91| av.在线天堂| 国产毛片a区久久久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 免费黄网站久久成人精品| 麻豆乱淫一区二区| 人妻系列 视频| 欧美3d第一页| 成人二区视频| 香蕉精品网在线| 啦啦啦啦在线视频资源| 中文字幕制服av| 特大巨黑吊av在线直播| 内地一区二区视频在线| 中文字幕制服av| 欧美高清性xxxxhd video| 免费看日本二区| 国产精品蜜桃在线观看| 丝瓜视频免费看黄片| 精品人妻一区二区三区麻豆| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产91av在线免费观看| av卡一久久| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| eeuss影院久久| 久久久久精品久久久久真实原创| 少妇人妻久久综合中文| 爱豆传媒免费全集在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 中国国产av一级| 国产人妻一区二区三区在| 别揉我奶头 嗯啊视频| 新久久久久国产一级毛片| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 免费少妇av软件| 男女无遮挡免费网站观看| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 色5月婷婷丁香| 亚洲av二区三区四区| 免费观看av网站的网址| 麻豆久久精品国产亚洲av| 成人毛片60女人毛片免费| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| av在线观看视频网站免费| 精品人妻视频免费看| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲av.av天堂| 国产精品人妻久久久影院| 国产亚洲最大av| 69人妻影院| 色视频在线一区二区三区| 天天躁日日操中文字幕| 欧美激情在线99| 一区二区三区四区激情视频| 精品少妇久久久久久888优播| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 午夜福利视频1000在线观看| 成年人午夜在线观看视频| a级毛色黄片| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 网址你懂的国产日韩在线| 国产精品久久久久久久电影| 中文天堂在线官网| 成人黄色视频免费在线看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 特大巨黑吊av在线直播| 中文字幕亚洲精品专区| 欧美成人午夜免费资源| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产精品人妻久久久久久| 国产欧美亚洲国产| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 五月伊人婷婷丁香| 精品一区二区免费观看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 高清av免费在线| 国产精品精品国产色婷婷| 国模一区二区三区四区视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲在久久综合| 欧美xxⅹ黑人| 神马国产精品三级电影在线观看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| www.色视频.com| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 男男h啪啪无遮挡| 久久久久精品性色| 热re99久久精品国产66热6| av在线app专区| 波多野结衣巨乳人妻| 国产毛片a区久久久久| 天堂中文最新版在线下载 | 美女国产视频在线观看| 日韩大片免费观看网站| 国产精品三级大全| 亚洲色图综合在线观看| 春色校园在线视频观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美激情国产日韩精品一区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 精品人妻视频免费看| 日韩三级伦理在线观看| 视频中文字幕在线观看| 大香蕉97超碰在线| 91精品国产九色| 日韩视频在线欧美| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲成人精品中文字幕电影| 五月玫瑰六月丁香| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产 精品1| 亚洲精品第二区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 色5月婷婷丁香| 成人毛片a级毛片在线播放| 五月伊人婷婷丁香| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产高清国产精品国产三级 | 国产成人精品婷婷| 一区二区三区四区激情视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产高清三级在线| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产精品福利在线免费观看| 成人国产av品久久久| 夫妻午夜视频| 草草在线视频免费看| 亚洲av中文av极速乱| av卡一久久| 深爱激情五月婷婷| 亚洲欧美清纯卡通| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 免费人成在线观看视频色| 成人亚洲精品一区在线观看 | 直男gayav资源| 亚洲国产精品999| 国产男女超爽视频在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 精品久久久久久久久av| 精品久久久精品久久久| 国产精品久久久久久久久免| 久热这里只有精品99| 欧美xxⅹ黑人| 日韩制服骚丝袜av| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久久色成人| 内地一区二区视频在线| 中文字幕久久专区| 国产v大片淫在线免费观看| 99热网站在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 干丝袜人妻中文字幕| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产 一区精品| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 精品久久久精品久久久| 久久久久久久大尺度免费视频| 在线精品无人区一区二区三 | 精品少妇黑人巨大在线播放| 男女啪啪激烈高潮av片| 在线观看三级黄色| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 嘟嘟电影网在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 插逼视频在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 欧美激情在线99| 性色av一级| 另类亚洲欧美激情| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日本wwww免费看| 久久久久久久精品精品| 久久99热6这里只有精品| 国产精品人妻久久久久久| 国产免费一级a男人的天堂| 日韩制服骚丝袜av| 大片免费播放器 马上看| 欧美成人精品欧美一级黄| 麻豆成人av视频| 亚洲av中文av极速乱| av一本久久久久| 亚洲国产色片| 亚洲av在线观看美女高潮| 看免费成人av毛片| 五月伊人婷婷丁香| 国产免费视频播放在线视频| 国产精品蜜桃在线观看| 看免费成人av毛片| 欧美日韩精品成人综合77777| 一级毛片久久久久久久久女| 成年免费大片在线观看| 国产探花极品一区二区| 日本与韩国留学比较| 欧美一区二区亚洲| 国产视频内射| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 精华霜和精华液先用哪个| 日韩强制内射视频| 国产精品一区www在线观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产精品久久久久久久电影| 成人国产av品久久久| 婷婷色综合大香蕉| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日日啪夜夜撸| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产中年淑女户外野战色| 久久韩国三级中文字幕| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产精品国产av在线观看| 国产黄色免费在线视频| 国产亚洲最大av| 韩国高清视频一区二区三区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| xxx大片免费视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲图色成人| 国产高潮美女av| 男男h啪啪无遮挡| 人妻 亚洲 视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国内精品宾馆在线| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 嫩草影院精品99| 成年免费大片在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 欧美bdsm另类| 日韩欧美精品免费久久| 天堂网av新在线| 日韩av不卡免费在线播放| 偷拍熟女少妇极品色| 特大巨黑吊av在线直播| av天堂中文字幕网| 99久久中文字幕三级久久日本| 五月天丁香电影| 国产又色又爽无遮挡免| 成人黄色视频免费在线看| 毛片一级片免费看久久久久| 真实男女啪啪啪动态图| 男的添女的下面高潮视频| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲av不卡在线观看| av福利片在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 成年版毛片免费区| 日韩大片免费观看网站| 丝袜脚勾引网站| 麻豆成人av视频| 在线观看一区二区三区| 精品久久久精品久久久| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久久久久九九精品二区国产| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲精品成人av观看孕妇| 97超碰精品成人国产| 国产乱人视频| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲精品日本国产第一区| 美女被艹到高潮喷水动态| 神马国产精品三级电影在线观看| 夫妻午夜视频| 又爽又黄无遮挡网站| .国产精品久久| 少妇的逼好多水| 又爽又黄无遮挡网站| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 婷婷色综合www| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲精品,欧美精品| 色视频在线一区二区三区| 国产乱人偷精品视频| 国产高潮美女av| 国产综合精华液| 99久久人妻综合| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲第一区二区三区不卡| 国国产精品蜜臀av免费| 男人狂女人下面高潮的视频| 成年版毛片免费区| 99久久精品热视频| 一本久久精品| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲天堂av无毛| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 中文字幕av成人在线电影| 欧美zozozo另类| 国产探花在线观看一区二区| 久久久亚洲精品成人影院| 青青草视频在线视频观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 中文天堂在线官网| 偷拍熟女少妇极品色| 久久久a久久爽久久v久久| 国产黄色免费在线视频| 美女内射精品一级片tv| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 一区二区av电影网| 亚洲国产精品成人久久小说| av在线亚洲专区| 国产精品久久久久久精品电影| 国产中年淑女户外野战色| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 观看免费一级毛片| 中文欧美无线码| 热99国产精品久久久久久7| 日韩国内少妇激情av| 亚洲av福利一区| 国产亚洲一区二区精品| 黄色一级大片看看| 亚洲内射少妇av| av在线app专区| 一区二区三区精品91| 日本一二三区视频观看| 99re6热这里在线精品视频| 国产亚洲91精品色在线| 久热久热在线精品观看| 三级国产精品欧美在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 欧美一级a爱片免费观看看| 日本色播在线视频| 在现免费观看毛片| 特级一级黄色大片| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 禁无遮挡网站| 久久久久久久久久成人| 九色成人免费人妻av| 国产精品久久久久久精品古装| 国产av码专区亚洲av| 搡老乐熟女国产| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 免费高清在线观看视频在线观看| 一本久久精品| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 丝瓜视频免费看黄片| 男人舔奶头视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 麻豆成人av视频| 九色成人免费人妻av| 成人二区视频| 边亲边吃奶的免费视频| 国精品久久久久久国模美| 99久久精品一区二区三区| 久久久久精品久久久久真实原创| 99热全是精品| 成人免费观看视频高清| 精品一区在线观看国产| 97在线人人人人妻| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 插阴视频在线观看视频| www.av在线官网国产| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲不卡免费看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 热99国产精品久久久久久7| 伦理电影大哥的女人| 听说在线观看完整版免费高清| 在线观看人妻少妇| 26uuu在线亚洲综合色| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美区成人在线视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美激情国产日韩精品一区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 美女视频免费永久观看网站| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产成人a∨麻豆精品| 少妇的逼水好多| 成人国产av品久久久| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 免费在线观看成人毛片| 国产免费福利视频在线观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 特级一级黄色大片| 久久ye,这里只有精品| 成人美女网站在线观看视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 成人二区视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 麻豆成人午夜福利视频| 99视频精品全部免费 在线| 卡戴珊不雅视频在线播放| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产精品精品国产色婷婷| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲精品色激情综合| 精品人妻一区二区三区麻豆| 精品人妻视频免费看| 最近的中文字幕免费完整| 日本黄大片高清| 日本一二三区视频观看| 在线a可以看的网站| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲最大成人中文| 深爱激情五月婷婷| 欧美高清成人免费视频www| 在线观看三级黄色| 三级国产精品片| 高清视频免费观看一区二区| 日本色播在线视频| 日日摸夜夜添夜夜爱| 高清在线视频一区二区三区| h日本视频在线播放| 在线看a的网站| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 精品国产露脸久久av麻豆| 国精品久久久久久国模美| 99久久精品一区二区三区| 免费av毛片视频| 新久久久久国产一级毛片| 久久久久久久久大av| 亚洲国产精品国产精品| 久久久成人免费电影| 国产在线一区二区三区精| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲不卡免费看| 视频区图区小说| 亚洲久久久久久中文字幕| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲精品国产av蜜桃| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 久久99热这里只有精品18| 久久精品国产a三级三级三级| 久久久久久久久大av| 最近最新中文字幕大全电影3| 我的女老师完整版在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲av免费在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 大片电影免费在线观看免费| 男人添女人高潮全过程视频| 一级a做视频免费观看| 人人妻人人看人人澡| 欧美性感艳星| 亚洲精品一二三| 超碰av人人做人人爽久久| 欧美人与善性xxx| 国产av国产精品国产| 国产欧美亚洲国产| 男男h啪啪无遮挡| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲欧美清纯卡通| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产精品偷伦视频观看了| 久热久热在线精品观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产成年人精品一区二区| 国产探花在线观看一区二区| 色哟哟·www|