河南省豬球蟲(chóng)感染情況及種類鑒定

程俊貞，劉光輝，班付國(guó)，房大學(xué)，趙勝杰

（1.許昌市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 許昌 461000；2.河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，鄭州 450008）

仔豬球蟲(chóng)病是由豬等孢球蟲(chóng)（Isospora suis）和某些艾美耳屬（Eimeria）球蟲(chóng)寄生在哺乳期及新近斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞所引起一種寄生性原蟲(chóng)病，臨床上以腹瀉為主要癥狀[1-2]。哺乳仔豬患球蟲(chóng)病是養(yǎng)豬場(chǎng)的常見(jiàn)問(wèn)題[3]。發(fā)病主要出現(xiàn)在8～15日齡仔豬，感染日齡越小，病情越嚴(yán)重[3-4]。發(fā)病仔豬出現(xiàn)腹瀉，糞便黃色到灰色，開(kāi)始時(shí)糞便松軟或呈糊狀，隨著病情加重變?yōu)橐籂睿⑶野l(fā)出腐敗乳汁樣酸臭味。吮乳減少，被毛粗亂，脫水，增重下降，因而導(dǎo)致新生仔豬死亡率增加，斷奶時(shí)營(yíng)養(yǎng)不良，很多仔豬成了僵豬，給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失[1，4-6]。

河南省是我國(guó)的養(yǎng)豬大省之一，為掌握河南省豬場(chǎng)球蟲(chóng)感染情況及感染球蟲(chóng)種類分布，為制定切實(shí)可行的預(yù)防措施提供依據(jù)，筆者于2018年8—11月和2019年3—5月選取河南省豫東、豫西、豫南、豫北和豫中部分市縣的25個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)及專業(yè)戶和6個(gè)農(nóng)村散養(yǎng)戶豬球蟲(chóng)感染情況和種類分布情況進(jìn)行了初步調(diào)查，其結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 飽和糖-鹽水溶液：380 g氯化鈉與500 g蔗糖溶解于1 L水中，加熱溶解，冷卻備用。比重為1.226。

1.1.2 器材 顯微鏡、80目金屬篩、130目金屬篩、漏斗、離心機(jī)、鐵架臺(tái)、天平、燒杯、玻璃棒、蓋玻片、載玻片、膠頭滴管、冰箱等。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集 采用直腸取糞法，采集1～10日齡、11～20 日齡、21～30 日齡、31～40 日齡的仔豬及41日齡以上仔豬、肥育豬等糞樣或收集剛排出的新鮮糞便約50～100 g，分別裝入干凈塑料袋中，標(biāo)注豬場(chǎng)名稱、編號(hào)、豬的年齡，置4℃冰箱內(nèi)備查。

1.2.2 定性檢查卵囊 用飽和糖-鹽水溶液漂浮法檢查球蟲(chóng)卵囊。取2 g糞便樣品，用10 mL自來(lái)水?dāng)嚢杈鶆蚝?，再加?0 mL自來(lái)水?dāng)嚢杈鶆颍?0目和130目金屬篩雙層過(guò)濾，將濾液置于離心管中以3 000 r/min離心10 min，取出離心管棄去上清液，之后再加入50 mL左右飽和糖-鹽水溶液，用干凈的玻璃棒攪拌均勻，再以3 000 r/min離心10 min，然后用吊環(huán)吊一環(huán)上清液涂片，在高倍顯微鏡（400×）下觀察，根據(jù)卵囊大小、形態(tài)進(jìn)行查找。

1.2.3 卵囊收集 用飽和糖-鹽水溶液漂浮法收集球蟲(chóng)卵囊。將陽(yáng)性糞樣加4～5倍量水?dāng)嚢杈鶆?，在裝有80目和130目雙層金屬篩的漏斗中過(guò)濾，將濾液置于離心管中以3 000 r/min離心10 min，取出離心管棄去上清液，再加入50 mL左右飽和糖-鹽水溶液用干凈的玻璃棒攪拌均勻，再以3 000 r/min離心10 min，然后用專門(mén)收集卵囊用的鐵絲圈網(wǎng)多次蘸取上層表面液在裝有100 mL左右自來(lái)水的燒杯中涮洗，即將卵囊收集到燒杯中制成卵囊混懸液；再將卵囊混懸液以3 000 r/min離心10 min，取出離心管棄去上清液，離心管中便為球蟲(chóng)卵囊。

1.2.4 卵囊培養(yǎng) 將收集到的球蟲(chóng)卵囊加入2.5%重鉻酸鉀溶液，取1～2滴收集的新鮮卵囊液置于18 mm×18 mm蓋玻片上，再覆以同樣大小蓋玻片，四周用凡士林封閉后置載玻片上，28℃恒溫箱中培養(yǎng)，每隔2 h用顯微鏡（400×）觀察其孢子化程度，記錄結(jié)果并顯微拍照。其余卵囊置平皿于27～28℃的恒溫箱中培養(yǎng)觀察直至80%卵囊完全孢子化，期間保持深度0.5 cm，每天用吸管吹打2～3次，計(jì)數(shù)后置于4℃冰箱中保存。

1.2.5 球蟲(chóng)種類鑒定 用Miaspro圖象分析處理系統(tǒng)測(cè)量卵囊、卵囊質(zhì)、孢子囊的大小及卵囊周長(zhǎng)、面積、形狀因子（卵囊長(zhǎng)度∶卵囊寬度）等，結(jié)合卵囊形態(tài)、孢子囊、子孢子的形態(tài)結(jié)構(gòu)及個(gè)數(shù)，參照有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行蟲(chóng)種鑒定[1-2，7-11]。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶豬球蟲(chóng)感染情況

調(diào)查商丘、漯河、許昌、禹州、洛陽(yáng)、新安、偃師、宜陽(yáng)、鄭州、淇縣、鶴壁、嵩縣、伊川、汝陽(yáng)等14個(gè)地、市縣的25個(gè)具有代表性的規(guī)?；i場(chǎng)及專業(yè)戶和6個(gè)地市農(nóng)村散養(yǎng)戶豬，共檢查2 051份樣品，除了偃師某豬場(chǎng)2和偃師散養(yǎng)戶的球蟲(chóng)感染為陰性，其余豬場(chǎng)的豬球蟲(chóng)感染均為陽(yáng)性。感染日齡主要集中在11～20日齡，豬場(chǎng)陽(yáng)性率為61.29%，球蟲(chóng)的最高感染率為83.33%，平均感染率為23.29%；其次在1～10日齡，豬場(chǎng)陽(yáng)性率為41.94%，球蟲(chóng)的最高感染率為66.67%，平均感染率為17.71%；在21～30日齡，豬場(chǎng)陽(yáng)性率為35.48%，球蟲(chóng)的最高感染率為85.71%，平均感染率為13.35%；在31～40日齡，豬場(chǎng)陽(yáng)性率為38.71%，球蟲(chóng)的最高感染率為80.00%，平均感染率為7.04%；在41日齡以上豬場(chǎng)陽(yáng)性率也為48.39%，球蟲(chóng)的最高感染率為37.50%，平均感染率為7.95%。詳見(jiàn)表1。

表1 豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶豬球蟲(chóng)感染情況

表1 豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶豬球蟲(chóng)感染情況（續(xù)）

2.2 球蟲(chóng)種類鑒定結(jié)果

從卵囊形態(tài)結(jié)構(gòu)、大小以及子孢子的形態(tài)結(jié)構(gòu)、大小及個(gè)數(shù)經(jīng)過(guò)初步分離和鑒定，鑒定出河南省25個(gè)豬場(chǎng)及專業(yè)戶和6個(gè)地市的散養(yǎng)戶豬感染的球蟲(chóng)有2個(gè)屬8種，分別是豬等孢球蟲(chóng)（Isospora suis）、楊陵艾美耳球蟲(chóng)新種（Eimeria yanglingensissp.Nov.）、種豬艾美耳球蟲(chóng)（E.porci）、蒂氏艾美耳球蟲(chóng)（E.debliecki）、豬艾美耳球蟲(chóng)（E.suis）、極細(xì)艾美耳球蟲(chóng)（E.perminuta）、粗糙艾美耳球蟲(chóng)（E.scabra）和新蒂氏艾美耳球蟲(chóng)（E.neodebliecki）。

2.2.1 8種球蟲(chóng)特征及其感染率

豬的8種孢子化球蟲(chóng)卵囊見(jiàn)圖1。

（1）豬等孢球蟲(chóng)（I.suis Biester，1934，圖 1-1）。卵囊呈球形、亞球形或卵圓形，黃褐色或無(wú)色，卵囊壁光滑且較薄，無(wú)色，孢子形成后的卵囊壁常皺裂，無(wú)卵膜孔。卵囊的大小為 19.549～29.428 μm×15.746～22.273 μm， 平均為 20.976 μm×18.648 μm；面積為 276.684～354.768 μm2， 平均面積為 304.562 μm2；周長(zhǎng)為 52.469～68.264 μm，平均周長(zhǎng)為 60.584 μm；形狀因子為 1.000～1.236，平均為 1.118。 壁厚1.2～1.6 μm，平均 1.4 μm；無(wú)極粒，無(wú)卵囊余體，孢子化的卵囊內(nèi)有2個(gè)孢子囊，孢子囊呈圓形或橢圓形，大小為 12.4～17.2 μm×9.6～11.6 μm，平均 15.4 μm×12.8 μm，形狀指數(shù)為1.11～1.25，平均為1.18。孢子囊余體呈顆粒狀，位于孢子囊一端，無(wú)斯氏體。每個(gè)孢子囊內(nèi)有4個(gè)子孢子，子孢子呈臘腸形或香蕉形，鈍端有一折光球。豬場(chǎng)感染率為80.65%。

（2）楊陵艾美球蟲(chóng)新種（E.yanglingensis sp．Nov．，圖1-2）。卵囊窄長(zhǎng)，似長(zhǎng)圓柱狀，有的兩端大小略有差異，但卵囊對(duì)稱。卵囊壁兩層，較厚，淡黃色，無(wú)卵膜孔。 卵囊的大小為 32.216～35.624 μm×14.633～21.422 μm，平均為 33.976 μm×17.648 μm；面積為324.658～426.265 μm2， 平均面積為 384.226 μm2；周長(zhǎng)為 58.354～71.225 μm，平均周長(zhǎng)為 64.259 μm；形狀因子為1.926～2.124，平均為2.054。無(wú)卵囊殘?bào)w，有極粒。孢子化卵囊內(nèi)有4個(gè)孢子囊，孢子囊對(duì)稱，長(zhǎng)卵圓形， 大小為 9.26～19.6 μm×5.21～6.98 μm，平均 17.4 μm×6.4 μm，形狀指數(shù)為 1.5～3.4，平均為 2.64。每個(gè)孢子囊有2個(gè)子孢子，子孢子呈香蕉形，2個(gè)子孢子頭尾并列于孢子囊內(nèi)。豬場(chǎng)感染率為51.61%。

（3）種豬艾美爾球蟲(chóng)（E.porci Vetterling，1965，圖1-3）。卵囊橢圓形。壁光滑，黃褐色或無(wú)色，由兩層構(gòu)成，無(wú)卵膜孔。卵囊的大小為18.236～24.568 μm×13.562～17.364 μm， 平均為 22.164 μm×16.015 μm；面積為 278.324～326.263 μm2， 平均面積為 295.364 μm2；周長(zhǎng)為 46.358～61.268 μm，平均周長(zhǎng)為 54.362 μm；形狀因子為1.264～1.646，平均為1.424。 缺外殘?bào)w，有一個(gè)極粒。孢子化的卵囊內(nèi)有4個(gè)孢子囊，孢子囊寬卵圓形，內(nèi)殘?bào)w由細(xì)顆粒構(gòu)成，位于兩子孢子之間，成條狀或三角形排列。孢子囊大小為8.9～11.2 μm×6.48～7.36 μm，平均 9.7 μm×6.84 μm，形狀指數(shù)為1.46～1.58，平均為1.52。豬場(chǎng)感染率為38.71%。

（4）蒂氏艾美耳球蟲(chóng)（E.debliecki Douwes，1921，圖1-4）。卵囊常呈橢圓形、圓柱狀。壁光滑，淡黃色，由兩層構(gòu)成，厚約（1.4±0.2）μm。無(wú)卵膜孔和外殘?bào)w，但有明顯的極粒。卵囊的大小為23.568～31.216 μm×19.364～24.649 μm，平均為 28.684 μm×22.569 μm；面積為 326.128～402.364 μm2， 平均面積為 346.892 μm2；周長(zhǎng)為 54.633～66.326 μm，平均周長(zhǎng)為 58.467 μm；形狀因子為 1.248～1.626，平均為 1.496。 孢子化的卵囊內(nèi)有4個(gè)孢子囊，孢子囊為不對(duì)稱的長(zhǎng)卵圓形，一邊較為平直，另一邊呈弧形；孢子囊大小為13.8～21.4 μm×5.8～7.9 μm，平均 18.2 μm×6.8 μm，形狀指數(shù)為2.24～2.98，平均為2.64。豬場(chǎng)感染率為51.61%。

（5）豬艾美耳球蟲(chóng)（E.suis Noller，1921，圖 1-5）。卵囊為圓形或亞球形。壁光滑，由兩層構(gòu)成，厚約0.15 μm，黃褐色。無(wú)極帽和外殘?bào)w，有極粒。卵囊的大小為 16.863～22.658 μm×11.364～17.364 μm，平均為 20.364 μm×16.224 μm； 面積為 289.364～346.269 μm2， 平均面積為 324.368 μm2； 周長(zhǎng)為 47.694～62.354 μm， 平均周長(zhǎng)為 56.354 μm； 形狀因子為1.256～1.342，平均為1.294。孢子化的卵囊內(nèi)有4個(gè)孢子囊，孢子囊卵圓形，大小為 9.4～11.2 μm×6.8～8.1 μm，平均 10.8 μm×7.4 μm，形狀指數(shù)為 1.24～1.68，平均為1.49。豬場(chǎng)感染率為38.71%。

（6）極細(xì)艾美耳球蟲(chóng)（E.perminuta Henry，1931，圖1-6）。卵囊呈圓球形或亞球形。壁粗糙，由兩層構(gòu)成，淡黃色。無(wú)卵膜孔，有極粒，但無(wú)外殘?bào)w。卵囊的大小為 14.684～17.224 μm×11.367～15.694 μm，平均為 16.326 μm×13.242 μm； 面積為 249.564～298.368 μm2，平均面積為 286.324 μm2； 周長(zhǎng)為 40.335～54.261 μm， 平均周長(zhǎng)為 50.468 μm； 形狀因子為1.038～1.226，平均為1.148。孢子化的卵囊內(nèi)有4個(gè)孢子囊，孢子囊近似橢圓形，大小為6.8～8.2 μm×4.4～6.2 μm，平均 7.8 μm×5.3 μm，形狀指數(shù)為 1.46～1.87，平均為1.57。豬場(chǎng)感染率為32.26%。

（7）粗糙艾美耳球蟲(chóng)（E.scabra Henry，1931，圖 1-7）。卵囊呈橢圓形。壁粗糙，有輻射狀條紋，呈黃色或黃褐色，厚約2 μm。有顯著的卵膜孔，但無(wú)極帽。卵囊的大小為 32.664～34.469 μm×21.652～24.649 μm，平均為 32.623 μm×23.465 μm；面積為 346.846～426.364 μm2，平均面積為 384.669 μm2；周長(zhǎng)為 56.354～65.394 μm，平均周長(zhǎng)為61.258 7 μm；形狀因子為1.324～1.548，平均為1.432。孢子化的卵囊內(nèi)有4個(gè)孢子囊，具極粒，無(wú)外殘?bào)w。孢子囊長(zhǎng)卵圓形，大小為13.8～19.2 μm×6.4～9.8 μm，平均 16.4 μm×8.4 μm，形狀指數(shù)為1.68～2.24，平均為1.86。豬場(chǎng)感染率為32.26%。

（8）新蒂氏艾美耳球蟲(chóng)（E.neodebliecki Vetterling，1965，圖1-8）。卵囊常呈橢圓形、圓柱狀。壁光滑，黃褐色，由兩層構(gòu)成。無(wú)卵膜孔和外殘?bào)w，但有明顯的極粒。 卵囊的大小為19.367～23.654 μm×14.325～19.568 μm，平均為 22.364 μm×16.324 μm；面積為 311.684～348.362 μm2，平 均 面 積 為 324.662 μm2； 周 長(zhǎng) 為50.364～58.694 μm，平均周長(zhǎng)為 56.394 μm；形狀因子為1.248～1.564，平均為1.408。孢子化的卵囊內(nèi)有4個(gè)孢子囊，孢子囊長(zhǎng)卵圓形，大小為10.658～16.328 μm×5.468～8.624 μm，平均 13.684 μm×6.246 μm，形狀指數(shù)為2.14～2.61，平均為2.34。豬場(chǎng)感染率為35.48%。

2.2.2 不同日齡段感染的球蟲(chóng)種類 在所有被調(diào)查的豬群中，以11～20日齡段仔豬感染的球蟲(chóng)種類較多，感染7種；其次在21～30日齡段，感染6種球蟲(chóng)；再次是在1～10日齡段和41日齡以上，感染5種球蟲(chóng)；在31～40日齡段感染4種球蟲(chóng)。其中，I.suis主要感染40日齡以下仔豬；E.yanglingensis sp.則感染10日齡以上豬；E.porci感染10日齡以下和41日齡以上豬；E.debliecki和E.perminuta也主要感染40日齡以下仔豬；E.suis和E.scabra主要感染11～30日齡和41日齡以上豬；E.neodebliecki則感染20日齡以下和41日齡以上豬。詳見(jiàn)表2。

表2 不同日齡段所感染的球蟲(chóng)種類

2.2.3 不同豬場(chǎng)感染的球蟲(chóng)種類 在25個(gè)豬場(chǎng)及專業(yè)戶和6個(gè)地市的散養(yǎng)戶中，豬球蟲(chóng)多為混合感染，除了12號(hào)（偃師某豬場(chǎng)2）和31號(hào)（偃師散養(yǎng)戶）無(wú)球蟲(chóng)感染，2號(hào)（漯河某豬場(chǎng)）、23號(hào)（洛陽(yáng)專業(yè)戶2）和25號(hào)（嵩縣專業(yè)戶）是單一種類感染，其余豬場(chǎng)多是感染3～6種；從各個(gè)豬場(chǎng)感染的種類看，河南省豬場(chǎng)感染的球蟲(chóng)優(yōu)勢(shì)種為I.suis，其次是E.yanglingensis sp.、E.debliecki。 詳見(jiàn)表 3。

表3 不同豬場(chǎng)所感染的球蟲(chóng)種類

3 結(jié)論與討論

3.1 豬球蟲(chóng)病在河南省普遍存在

在25個(gè)豬場(chǎng)及專業(yè)戶和6個(gè)地市的散養(yǎng)戶中，除了12號(hào)豬場(chǎng)（偃師某豬場(chǎng)2）和31號(hào)（偃師散養(yǎng)戶）的球蟲(chóng)感染為陰性，其余豬場(chǎng)的豬球蟲(chóng)感染均為陽(yáng)性。在陽(yáng)性場(chǎng)中，豬球蟲(chóng)感染率可高達(dá)40.43%（淇縣某豬場(chǎng)3）和35.29%（淇縣某豬場(chǎng)1），感染率最低為0.84%（洛陽(yáng)某豬場(chǎng)），平均感染率為12.14%；說(shuō)明豬球蟲(chóng)病在河南廣泛存在，而且感染率挺高。在所有被調(diào)查的豬場(chǎng)中，散養(yǎng)戶的平均感染率為11.91%，而豬場(chǎng)的平均感染率則為12.54%，說(shuō)明與散養(yǎng)戶相比，豬場(chǎng)的球蟲(chóng)感染率較高，其原因可能是豬場(chǎng)的養(yǎng)殖密度大，豬球蟲(chóng)更易傳播。說(shuō)明豬球蟲(chóng)的傳播與養(yǎng)殖密度也相關(guān)，養(yǎng)殖密度大，豬群之間更易接觸，給豬球蟲(chóng)的傳播創(chuàng)造有利條件；反之亦然。

3.2 不同日齡豬感染率不同，11～20日齡仔豬球蟲(chóng)感染率最高

調(diào)查和試驗(yàn)結(jié)果表明：豬球蟲(chóng)主要感染1～20日齡仔豬，尤其是11～20日齡的仔豬，感染率為23.29%，最高感染率可達(dá)83.33%，21日齡以后感染率逐漸降低；等孢球蟲(chóng)感染日齡也主要集中在11～20日齡，感染率為19.52%，最高感染率為66.67%；41日齡以上則不易感，調(diào)查的結(jié)果是41日齡以上感染率為0。據(jù)有關(guān)資料報(bào)道：仔豬球蟲(chóng)感染以8～15日齡為主[3-4]。本研究結(jié)果與之相比，易感日齡有擴(kuò)大化的趨勢(shì)，說(shuō)明仔豬年齡越小，對(duì)球蟲(chóng)越易感。

3.3 豬場(chǎng)感染球蟲(chóng)種類較多，其中豬等孢球蟲(chóng)為優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種和主要致病種

據(jù)周繼賢等[9]1996報(bào)道：河南共感染8種球蟲(chóng)，分別是豬等孢球蟲(chóng)（Isospora suis）、有刺艾美耳球蟲(chóng)（Eimeria spinosa）、種豬艾美耳球蟲(chóng)（E.porci）、蒂氏艾美耳球蟲(chóng)（E.debliecki）、豬艾美耳球蟲(chóng)（E.suis）、極細(xì)艾美耳球蟲(chóng)（E.perminuta）、粗糙艾美耳球蟲(chóng)（E.scabra）和新蒂氏艾美耳球蟲(chóng)（E.neodebliecki），優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種是E.debliecki和E.scabra。本調(diào)查結(jié)果顯示：在河南發(fā)現(xiàn)了楊陵艾美耳球蟲(chóng)新種（Eimeria yanglingensis sp.Nov.），而沒(méi)有 Eimeria spinosa。 不同種類球蟲(chóng)，豬場(chǎng)感染率不同，感染率較高分別為豬等孢球蟲(chóng)（豬場(chǎng)感染率為80.65%）、楊陵艾美耳球蟲(chóng)新種（豬場(chǎng)感染率為51.61%）和蒂氏艾美耳球蟲(chóng)（豬場(chǎng)感染率為51.61%），況且豬等孢球蟲(chóng)是引起仔豬球蟲(chóng)病的致病種。說(shuō)明河南豬球蟲(chóng)種類有所改變，更重要的是優(yōu)勢(shì)種發(fā)生了改變，豬等孢球蟲(chóng)為優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)種和主要致病種。

3.4 各豬場(chǎng)感染的球蟲(chóng)種類不同

調(diào)查和試驗(yàn)結(jié)果表明：在25個(gè)豬場(chǎng)及專業(yè)戶和6個(gè)地市的散養(yǎng)戶中，除了12號(hào)豬場(chǎng)（偃師某豬場(chǎng)2）和31號(hào)（偃師散養(yǎng)戶）的球蟲(chóng)感染為陰性外，其余豬場(chǎng)均感染有豬球蟲(chóng)；豬球蟲(chóng)感染場(chǎng)中，除了2號(hào)（漯河某豬場(chǎng)）、23號(hào)（洛陽(yáng)專業(yè)戶2）和25號(hào)（嵩縣專業(yè)戶）是單一種類感染，其余豬場(chǎng)為混合感染，多是感染3～6種球蟲(chóng)。說(shuō)明河南省豬場(chǎng)感染豬球蟲(chóng)以混合感染為主，不同豬場(chǎng)感染的球蟲(chóng)種類也不同。