STK17A基因經(jīng)TGF-β/SMAD信號(hào)通路調(diào)控宮頸癌細(xì)胞增殖凋亡及侵襲的機(jī)制研究

劉海霞 宋 梅 戴淑鳳

(青島市第三人民醫(yī)院,青島 266041)

宮頸癌是當(dāng)前世界范圍內(nèi)女性發(fā)病率第二的腫瘤，持續(xù)感染高危型人類乳頭瘤病毒是引起該病的主要原因[1,2]。巴氏涂片以及液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(thinprep cytology test,TCT)是近年來宮頸癌篩查的一種低成本且操作簡便的篩查手段[3]。盡管宮頸癌診斷和治療手段不斷改進(jìn)，但是晚期宮頸癌患者的5年生存率仍然很低，因此，對宮頸癌進(jìn)展的潛在分子機(jī)制進(jìn)行研究并且提供有效的治療方法十分重要。絲氨酸/蘇氨酸激酶17A (serine/threonine kinase 17A,STK17A)是死亡相關(guān)蛋白家族(death-associatedprotein，DAP)中的一員且DAP家族中成員被證實(shí)在多種癌癥中的表達(dá)受到限制，同時(shí)與多個(gè)細(xì)胞凋亡和自噬相關(guān)通路有關(guān)[4-6]。近年來關(guān)于STK17A在膠質(zhì)母瘤、大腸癌、睪丸癌等癌癥進(jìn)展中的研究也被逐漸發(fā)現(xiàn)[7-9]。但是關(guān)于其在宮頸癌中的作用尚不明確。轉(zhuǎn)化生長因子β (transforming growth factor beta,TGF-β)/SMAD通路是癌變過程中的重要調(diào)節(jié)通路，研究證實(shí)其在宮頸鱗癌中被激活[10]。在前人研究基礎(chǔ)上，本研究旨在明確STK17A在宮頸癌中的價(jià)值并探討其具體作用途徑。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1材料與試劑 pcDNA3.1(+)質(zhì)粒購自Invitrogen；基因組DNA提取試劑盒、Lipofectamine 3000試劑盒、總RNA提取試劑盒、TransScriptⅡGreen One-Step qRT-PCR SuperMix試劑盒、CCK-8試劑盒購自賽默飛世爾；人子宮頸上皮細(xì)胞及Hela、SiHa和C-33A宮頸鱗癌細(xì)胞系購自拜力生物；TGF-β/SMAD通路抑制劑SB-431542購自美國Selleck；蘇木素染液、伊紅染液、DAB染液購自北京索萊寶；Western blot中所有抗體購自ABCAM；RIPA細(xì)胞裂解液；Matrigel膠、Transwell小室購自上海復(fù)申生物科技有限公司；Anexin-V-FITC染液、PI染液購自銳賽生物；BD FACSCALIBUR 流式細(xì)胞儀德國貝克曼；倒置顯微鏡購自奧林巴斯；X960全自動(dòng)PCR儀購自力康生物醫(yī)療科技有限公司；SorvallTMLegendTM臺(tái)式離心機(jī)購自賽默飛世爾。STK17A序列及shRNA序列交由華大基因合成。

1.1.2組織來源 收集我院2012年至2017年43例宮頸癌患者宮頸癌組織及癌旁組織?；颊吣挲g23～67歲，平均年齡42.2歲。鱗狀細(xì)胞癌32例，腺癌11例。根據(jù)FIGO分期，癌組織中Ⅰ～Ⅱ期38例，Ⅲ～Ⅳ 5例。所有患者均在知情同意書上簽字并且組織實(shí)驗(yàn)均通過我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1STK17A沉默及過表達(dá)重組質(zhì)粒構(gòu)建 利用NCBI上人的STK17A mRNA全長(NM_004760.3)在BLOCK-iTTMRNAi Designer網(wǎng)站在線設(shè)計(jì)STK17A的shRNA序列(5′-CACCGGGTGACATTAAGATTGTTGACGAATCAACAATCTTAATGTC-ACCC-3′)。參照GenBank中的STK17A基因序列，采用Primer 5.0設(shè)計(jì)一對特異引物(5′-TCTGAGTCGGCTGTTGATTTC-3′，3′-GGGGTGCTTTAGACATTCTTCA-5′)并分別在上下游引物加上EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位點(diǎn)。pcDNA3.1(+)質(zhì)粒經(jīng)EcoRⅠ和BamHⅠ酶切后與目的基因片段連接，隨后轉(zhuǎn)化至DH 5α大腸桿菌進(jìn)行克隆。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定后，采用DNA大量抽提試劑盒提取大腸桿菌中重組載體，保存至-80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2細(xì)胞分組及轉(zhuǎn)染 人子宮頸上皮細(xì)胞培養(yǎng)于完全培養(yǎng)基中。Hela、SiHa、C-33A宮頸鱗癌細(xì)胞系培養(yǎng)于含10%FBS及1%P/S的MEM培養(yǎng)基中。待細(xì)胞達(dá)到80%匯合度時(shí)按1∶2～1∶6進(jìn)行傳代和培養(yǎng)。

Western blot篩選STK17A蛋白表達(dá)最低的細(xì)胞系用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)并分組：陰性對照組(轉(zhuǎn)染含有無關(guān)序列的重組質(zhì)粒)、基因沉默組(轉(zhuǎn)染含有STK17A shRNA的重組質(zhì)粒)、基因過表達(dá)組(轉(zhuǎn)染含有STK17A 片段的重組質(zhì)粒)、通路抑制劑組(TGF-β/SMAD通路特異性抑制劑處理宮頸癌細(xì)胞)、聯(lián)合組(TGF-β/SMAD通路抑制聯(lián)合STK17A過表達(dá)處理細(xì)胞)。轉(zhuǎn)染方式：傳代后取對數(shù)期細(xì)胞用于轉(zhuǎn)染。調(diào)整細(xì)胞密度后分別將50 μl Opti-MEM與1.5 μl Lipofectamine 3000以及1 μg DNA(濃度為2 μg/μl)相混合作為A液和B液，之后將A液和B液按照1∶1比例混勻并置于室溫下孵育。隨后添加DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物，培養(yǎng)24～48 h后更換培養(yǎng)基。抑制劑處理方法：SB-431542溶于適量DMSO中，終濃度為100 μmol/L。血清饑餓處理細(xì)胞24 h后加入SB-431542，處理48 h。

1.2.3HE染色 將癌組織及癌旁組織進(jìn)行石蠟包埋后切片。溫箱烤干1 h，二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水，蒸餾水沖洗，蘇木素浸染切片8～10 min，水洗1～2 min，1%鹽酸分化30 s，流水洗滌至天藍(lán)色。依紅染液浸染切片2～3 min，水洗1～2 min。梯度酒精脫水2次，脫水后的切片移入二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ分別透明3～5 min和5～10 min，中性樹膠固封。

1.2.4免疫組化檢測 將癌組織及癌旁組織進(jìn)行石蠟包埋后切片。溫箱烤干1 h，二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水。隨后經(jīng)雙氧水及蒸餾水洗滌，每次1 min。 0.01 mol/L枸緣酸緩沖液進(jìn)行微波抗原修復(fù)。5% BSA室溫封閉20 min，滴加一抗和二抗，分別于37℃條件下孵育，PBS沖洗。滴加適量SABC，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染2 min，自來水沖洗。梯度乙醇脫水后，中性樹膠固封。對組織染色強(qiáng)度(SI)及陽性細(xì)胞率(PP)進(jìn)行評分。SI分為4級：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。PP分為5級：0分為無陽性細(xì)胞<5%，1分為陽性細(xì)胞5%～25%，2級為25%～50%，3級為51%～75%，4級為>75%。綜合評分為SI與PP乘積，0為陰性，1為弱陽性(+)，2記為中陽性(++)，大于3記為強(qiáng)陽性(+++)[11]。借助Image J軟件對免疫組化結(jié)果進(jìn)行半定量分析，計(jì)算癌組織和癌旁組織中STK17A的陽性表達(dá)率。

1.2.5qRT-PCR 按Trizol試劑說明書提取宮頸癌細(xì)胞系中總RNA。DEPC處理的超純水溶解RNA，使用ND-1000測量260 nm和280 nm下吸光值，鑒定RNA的質(zhì)量和濃度。利用TransScriptⅡGreen One-Step qRT-PCR SuperMix試劑盒一步完成RT-PCR合成及Q-PCR。反應(yīng)體系和反應(yīng)條件均依據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行。使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，相對表達(dá)水平以GAPDH為內(nèi)參，引物序列由華大基因合成見表1。采用溶解曲線評價(jià)PCR結(jié)果的可靠性，取CT值 (擴(kuò)增動(dòng)力曲線拐點(diǎn))，ΔCt=CT (目的基因)-CT (GAPDH)，ΔΔCt=ΔCt (模型組)-ΔCt(正常組)。

1.2.6Western blot 棄去各組細(xì)胞培養(yǎng)液，PBS沖洗，加入200 μl含PMSF的RIPA裂解液。勻漿、裂解后離心。去離子水調(diào)整蛋白濃度，隨后行SDS-PAGE凝膠電泳并轉(zhuǎn)至PVDF膜上。含5% BSA的TBST在搖床上室溫封閉1 h。加入一抗兔抗大鼠STK17A、p-SMAD3、N-cadherin、E-cadherin和TIMP-3多克隆抗體，以GAPDH作為內(nèi)參。轉(zhuǎn)印面朝上，置于4℃冰箱振蕩過夜。次日，用TBST漂洗。同法加入稀釋好的山羊抗兔IgG作為二抗，4℃孵育4～6 h，TBST洗膜。取化學(xué)發(fā)光試劑A液與B液按1∶1混勻后，均勻滴加在PVDF膜上，顯影液顯影。所有蛋白免疫印跡的條帶進(jìn)行相對光密度分析，以目標(biāo)條帶與內(nèi)參照條帶的灰度值之比作為蛋白質(zhì)的相對表達(dá)量。

1.2.7CCK-8測定細(xì)胞活力 測定各組宮頸癌細(xì)胞濃度，加一定量細(xì)胞懸液至96孔板中并調(diào)整至細(xì)胞濃度為105孔-1并設(shè)置對照。于37℃，5%CO2下培養(yǎng)過夜。隨后每孔加入10 μl CCK-8溶液。隨后測定0 h、24 h、48 h下的吸光值(450 nm)。

1.2.8細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) 各組細(xì)胞用96孔板接種前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標(biāo)記。0.25%胰酶消化細(xì)胞2 min后接入96孔板。細(xì)胞鋪滿板底后，1 ml槍頭垂直于孔板進(jìn)行劃痕，盡量保證各劃痕寬度一致。吸去細(xì)胞培養(yǎng)液，PBS洗滌3次，每次5 min。隨后加入無血清MEM培養(yǎng)基，拍照記錄。將96孔板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，48 h后取出拍照。細(xì)胞遷移率=(0 h兩端細(xì)胞距離-48 h兩端細(xì)胞距離)/0 h兩端細(xì)胞距離×100%。

1.2.9Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn) 按1∶10用預(yù)冷無血清的MEM培養(yǎng)基稀釋Matrigel膠，吸取充分混勻的Matrigel，每上室加入100 μl稀釋后的Matrigel，室溫放置2 h；使用前加入200 μl 無血清1640培養(yǎng)基沖洗，將上述各組轉(zhuǎn)染24 h后的宮頸癌細(xì)胞用無血清DMEM培養(yǎng)基重懸，計(jì)數(shù)并稀釋至3×105個(gè)/ml，取100 μl 加入Transwell上室中，同時(shí)往下室中加入600 μl 10%血清的DMEM培養(yǎng)基，按照Transwell小室說明書操作，用結(jié)晶紫染色，光鏡下隨機(jī)選取三個(gè)視野并計(jì)數(shù)跨膜的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算細(xì)胞侵襲率。侵襲率=穿過基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

表1 qRT-PCR引物

Tab.1 qRT-PCR primer

GeneUpstream primer(5′-3′)Downstream primer(5′-3′)TGF-β1CTGCAAGACTATCGACATGGAATGGTGGAAACCCACAACGSMAD3AAACCAGGCTGGCTAAACAAGTGGCAACAGCAGCAGTGAAGGTGE-cadherinCATAAACGAGGTTCTGTCTTCAGGATAATAGTCGGGAGGTGN-cadherinAAGACAATGACTACGTGTAGGATAGCCGGACTAGGGATGCTIMP3CATGTGCAGTACATCCATACGGCATCATAGACGCGACCTGTCAGAPDHTACATGGCTGGGGTGTTGAAAAGAGAGGCATCCTCACCCT

1.2.10Annexin V-FITC/PI雙染檢測宮頸癌細(xì)胞凋亡 處理48 h后各組宮頸癌細(xì)胞經(jīng)PBS洗滌細(xì)胞1次，隨后在2 000 g下離心5 min，棄上清，重懸細(xì)胞并調(diào)整其密度為4×105個(gè)/ml。加入500 μl結(jié)合緩沖液懸浮細(xì)胞，之后加入5 μl Anexin-V-FITC輕柔混勻后隨即加入5 μl PI染液混合均勻，冰育避光反應(yīng)10～12 min。流式細(xì)胞儀在5 min內(nèi)上機(jī)檢測，激發(fā)波長為488 nm，530 nm下檢測FITC和575 nm下檢測PI。

2 結(jié)果

2.1宮頸癌和癌旁組織病理情況觀察 HE染色結(jié)果顯示(圖1)：宮頸鱗癌呈巢團(tuán)狀，細(xì)胞核深染大小不一，可見病理性核分裂像，核膜增厚，染色質(zhì)豐富偶見核溝。組織排列紊亂，無極性。巢團(tuán)中間可見角化，角化珠形成趨勢，間質(zhì)減少僅見少許纖維組織及血管組織。而癌旁組織中細(xì)胞間隔明顯，且與黏膜下組織存在較為顯著的界限。

2.2宮頸癌和癌旁組織中STK17A陽性表達(dá)情況 免疫組化對癌癥及癌旁組織中STK17A進(jìn)行定位與半定量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)(圖2)：STK17A蛋白在胞漿和核內(nèi)表達(dá)不均一。與癌旁組織相比陽性率為(72.88±9.21)%，癌癥組織中STK17A細(xì)胞陽性率為(3.12±1.18)%，其表達(dá)顯著下調(diào)(P<0.05)。

2.3STK17A蛋白在宮頸癌細(xì)胞系中的表達(dá) Western blot檢測不同宮頸癌細(xì)胞株中STK17A表達(dá)情況(圖3)。與HCECs相比，其余宮頸癌細(xì)胞株中STK17A表達(dá)顯著下調(diào)(均P<0.05)。此外，Hela細(xì)胞系STK17A最低，因此選擇Hela細(xì)胞系進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.4各組Hela細(xì)胞中STK17A、TGF-β1、SMAD3、E-cadherin、N-cadherin和TIMP3表達(dá) 研究結(jié)果顯示(圖4)：Hela細(xì)胞經(jīng)STK17A沉默或過表達(dá)處理后均有顯著效果(均P<0.05)。與陰性對照組相比，TGF-β1、SMAD3、N-cadherin mRNA及蛋白在基因沉默組中顯著上調(diào)，但E-cadherin和TIMP3表達(dá)在基因沉默組中被顯著抑制(均P<0.05)。相反，Hela細(xì)胞經(jīng)STK17A過表達(dá)或抑制TGF-β/SMAD3通路后TGF-β1、SMAD3、N-cadherin 表達(dá)下調(diào)，但E-cadherin和TIMP3表達(dá)被顯著誘導(dǎo)(均P<0.05)。

圖2 宮頸癌及癌旁組織免疫組化染色結(jié)果Fig.2 Immunohistochemical staining results of cervical cancer tissue and adjacent tissue

圖3 不同細(xì)胞系中STK17A蛋白表達(dá)情況Fig.3 STK17A protein expression in different cell linesNote: A.Protein bands of STK17A in different cell lines;B.Quatification of STK17A protein in different cell lines.Compared with HCECs,*.P P

圖4 各組細(xì)胞中STK17A、TGF-β1、SMAD3、E-cadherin、N-cadherin和TIMP3 mRNA和蛋白表達(dá)情況Fig.4 mRNA and protein expression of STK17A,TGF-β1,SMAD3,E-cadherin,N-cadherin and TIMP3 in each groupNote: A.mRNA expression of STK17A,TGF-β1,SMAD3,E-cadherin,N-cadherin and TIMP3 in each group;B.Protein bands of STK17A,TGF-β1,p-SMAD3,E-cadherin,N-cadherin and TIMP3 in each group;C.Quatification of STK17A,TGF-β1,p-SMAD3,E-cadherin,N-cadherin and TIMP3 protein expression in each group.Compared with NC group,*.P P

2.5各組細(xì)胞活力檢測結(jié)果 CCK-8檢測各組細(xì)胞中黃色甲臜含量(生成的甲臜物數(shù)量與活細(xì)胞數(shù)量成正比)。結(jié)果顯示(圖5)：與陰性對照組24 h和48 h相比，STK17A shRNA轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞后能顯著增加其細(xì)胞活力(P<0.05)。相反，STK17A過表達(dá)或抑制TGF-β/SMAD3通路后Hela細(xì)胞活力被顯著抑制(均P<0.05)。同時(shí)，聯(lián)合組對Hela細(xì)胞抑制效果更加明顯(P<0.05)。

2.6各組細(xì)胞遷移和侵襲能力檢測結(jié)果 細(xì)胞劃痕和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)評定各組細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果顯示(圖6)：與陰性對照組相比，STK17A 沉默處理后Hela細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力被顯著誘導(dǎo)(P<0.05)。相反，STK17A過表達(dá)或抑制TGF-β/SMAD3信號(hào)通路后Hela細(xì)胞株移行及跨Matrigel膠能力被明顯抑制(均P<0.05)。上述兩者聯(lián)合處理能更顯著地抑制Hela細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力(P<0.05)。

圖5 各組細(xì)胞活力檢測結(jié)果Fig.5 Cell viability results in each groupNote: Compared with NC group,*.P P

圖6 各組細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力檢測結(jié)果

Fig.6 Invasion and metastasis ability in each group

Note: A.Scratch healing results in each group at 0 h and 48 h;B.Crystal violet staining results in each group;C.Quatification of migration rate in each group;D.Quatification of invasion rate in each group.Compared with NC group,*.PP

圖7 各組細(xì)胞凋亡情況Fig.7 Cell apoptosis in each groupNote: A.Image output by flow cytometer;B.Quatification of cell apoptosis in each group.Compared with NC group,*.P P

2.7各組細(xì)胞凋亡情況檢測結(jié)果 Annexin V-FITC/PI雙染檢測各組細(xì)胞中早期與晚期凋亡細(xì)胞的比例。結(jié)果顯示(圖7)：與陰性對照組相比，STK17A 沉默處理后凋亡的Hela細(xì)胞凋亡明顯減少(P<0.05)。相反，STK17A過表達(dá)或抑制TGF-β/SMAD3信號(hào)通路能顯著誘導(dǎo)Hela細(xì)胞的凋亡(均P<0.05)。上述兩者聯(lián)合處理能更顯著地誘導(dǎo)Hela細(xì)胞的凋亡(P<0.05)。

3 討論

宮頸癌作為最常見的婦科腫瘤之一，當(dāng)前其分子機(jī)制仍然缺乏足夠認(rèn)識(shí)。STK17A(DRAK1) 經(jīng)研究證實(shí)在凋亡調(diào)節(jié)中起重要作用，與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)[12，13]。在本研究中，我們重點(diǎn)探究了STK17A介導(dǎo)TGF-β/SMAD 信號(hào)通路對宮頸癌進(jìn)展的調(diào)控作用，結(jié)果證實(shí)，STK17A過表達(dá)能夠抑制宮頸癌細(xì)胞增殖、侵襲同時(shí)誘導(dǎo)其凋亡，在宮頸癌中起保護(hù)作用。

首先我們在研究中發(fā)現(xiàn)，STK17A在宮頸癌組織中表達(dá)顯著降低。STK17A主要位于細(xì)胞核內(nèi)，通過蛋白激酶C的磷酸化轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核外，有證據(jù)表明，STK17A與腫瘤抑制因子p53密切相關(guān)[12]。Short等[8]則發(fā)現(xiàn)STK17A基因在大腸癌中起保護(hù)作用，敲除該基因的表達(dá)能夠促進(jìn)大腸癌的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。也有證據(jù)表明，STK17A敲除會(huì)引起睪丸癌細(xì)胞對順鉑敏感性的降低[9]。此外，也有研究發(fā)現(xiàn)STK17A過表達(dá)能夠促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的凋亡[14]。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)STK17A在宮頸癌中表達(dá)顯著降低，過表達(dá)STK17A能夠抑制宮頸癌的進(jìn)展，且這一作用主要是通過TGF-β/SMAD信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。TGF-β/SMAD通路是宮頸癌疾病發(fā)病過程中的重要通路之一，先前有研究證實(shí)，宮頸鱗癌患者癌組織中TGF-β1以及SMAD4表達(dá)升高，TGF-β/SMAD通路被激活[10]。本研究中qRT-PCR以及Western blot實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示，相對于陰性對照組，STK17A基因沉默組中TGF-β1、SMAD3表達(dá)升高，表明TGF-β/SMAD信號(hào)通路被激活。而過表達(dá)STK17A后，TGF-β/SMAD通路相關(guān)因子的表達(dá)被顯著抑制。此外，進(jìn)一步過表達(dá)Hela細(xì)胞中STK17A或抑制TGF-β/SMAD信號(hào)通路后發(fā)現(xiàn)E-cadherin以及TIMP3的表達(dá)顯著升高，TGF-β1、SMAD3以及N-cadherin表達(dá)下調(diào)。經(jīng)典鈣黏素家族的N-cadherin和E-cadherin被認(rèn)為是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要標(biāo)記物，宮頸癌在內(nèi)多種癌癥的進(jìn)展程度與N-cadherin呈正相關(guān)，與E-cadherin呈負(fù)相關(guān)[15-17]?；|(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPs)經(jīng)研究證實(shí)能夠?qū)?xì)胞外基質(zhì)以及基底膜進(jìn)行降解，促進(jìn)腫瘤血管的形成[18]。而基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMPs)能夠抑制MMPs的活性，抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移[19，20]。給予以上研究結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)，STK17A過表達(dá)能夠抑制TGF-β/SMAD信號(hào)通路進(jìn)而抑制宮頸癌的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。

另外，CCK8、劃痕愈合以及細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)證實(shí)，過表達(dá)STK17A或抑制TGF-β/SMAD信號(hào)通路能夠抑制Hela細(xì)胞活力，減少細(xì)胞遷移和侵襲。同時(shí)，細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)顯示，沉默STK17A表達(dá)能夠顯著抑制Hela細(xì)胞的凋亡，而STK17A過表達(dá)及TGF-β/SMAD通路抑制劑則能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡且聯(lián)合處理效果更顯著。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)STK17A基因能夠作為宮頸癌調(diào)控的重要因子，STK17A基因過表達(dá)能夠顯著抑制TGF-β/SMAD信號(hào)通路的激活，從而抑制宮頸癌細(xì)胞遷移、侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，在宮頸癌中起保護(hù)作用。我們的研究證實(shí)了STK17A在宮頸癌進(jìn)展中的關(guān)鍵作用，提示其可作為宮頸癌治療的重要靶點(diǎn)，但今后仍需要更多的體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)對其臨床價(jià)值進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。