檢測(cè)霍亂弧菌時(shí)的注意事項(xiàng)

曾學(xué)民

【中圖分類號(hào)】R572

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】2095-6851（2020）04-007-01

霍亂弧菌是一種致病菌，該菌引發(fā)的霍亂是一種急性腸道傳染病，典型病例以劇烈腹瀉為主要癥狀，可在短時(shí)間內(nèi)引起脫水、電解質(zhì)平衡失調(diào)，嚴(yán)重可迅速發(fā)展為循環(huán)衰竭導(dǎo)致死亡，該病發(fā)病急、傳播快、波及范圍廣，自1816年以來(lái)在全世界范圍內(nèi)發(fā)生七次大流行，因此，霍亂被列為了國(guó)境檢疫傳染疾病?；魜y病例的確診需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，迅速準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果可為及時(shí)采取防疫措施提供可靠的依據(jù)。那么在對(duì)霍亂弧菌進(jìn)行檢測(cè)時(shí)應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)？下面我們就來(lái)為大家作一下詳細(xì)介紹：

霍亂弧菌具有哪些特征？

1.霍亂弧菌是屬于兼性厭氧菌，對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不是很高，普通培養(yǎng)基便可良好生長(zhǎng)。在堿性蛋白胨水或平板中生長(zhǎng)良好，因其他細(xì)菌在堿性環(huán)境中不易生長(zhǎng)，故堿性蛋白胨水可作為選擇性增殖霍亂弧菌的培養(yǎng)基。

2.霍亂弧菌為革蘭氏陰性菌，菌體彎曲呈弧狀或逗點(diǎn)狀，菌體一端有單根鞭毛和菌毛，無(wú)莢膜與芽胞，在暗視野下可見細(xì)菌運(yùn)動(dòng)極為活潑，呈流星穿梭運(yùn)動(dòng)。

3.霍亂弧菌對(duì)于熱、干燥、日光及常規(guī)消毒劑都非常敏感，若干燥2小時(shí)或者加熱至55℃，則會(huì)在10分鐘內(nèi)死亡;在煮沸的開水中會(huì)1-2分鐘死亡;對(duì)于酸非常敏感，在正常胃酸中活不過(guò)4分鐘;如果放入0.1%的漂白粉當(dāng)中也會(huì)在10分鐘內(nèi)死亡。

霍亂弧菌怎樣進(jìn)行檢測(cè)？

1.增菌：一般采集的標(biāo)本來(lái)自各種環(huán)境，雜菌比較多，利用霍亂弧菌耐堿的特性，取一定數(shù)量的樣品放入到裝有堿性蛋白胨水（APW）的廣口瓶中，在適宜的溫度培養(yǎng)，以抑制雜菌利于霍亂弧菌生長(zhǎng)。增菌主要注意事項(xiàng)：一是配制增菌培養(yǎng)基的時(shí)候，一定要PH值準(zhǔn)確;二是食品、水樣等雜菌較多的樣品，需要先后使用PH8.8-9.2和PH8.4-8.6堿胨水進(jìn)行二次增菌以提高檢測(cè)率;三是急性期患者標(biāo)本可以直接在選擇性平板上劃線，進(jìn)行分離培養(yǎng)，以加快檢測(cè)速度，為疫情處理盡早地提供應(yīng)對(duì)方向。

2.分離：用接種環(huán)在6h-8h與16h-24h的增菌培養(yǎng)液表面菌膜下各取一環(huán)，分別劃線到TCBS、慶大霉素或4號(hào)瓊脂平板上各一個(gè)，在（36±1）℃條件下培養(yǎng)18-24h;分離主要注意事項(xiàng)：一是要注意檢驗(yàn)人員需經(jīng)過(guò)多次培訓(xùn)能準(zhǔn)確識(shí)別典型菌落，必要時(shí)多挑取可疑菌落進(jìn)一步檢測(cè)，避免遺漏;二是選擇性平板一定要按規(guī)范準(zhǔn)備，新平板一定烘干水分;三是平板上的標(biāo)識(shí)要準(zhǔn)確、唯一，不要出現(xiàn)可能混淆的標(biāo)號(hào)。

3.鑒定：采用接種環(huán)取下TCBS瓊脂平板上的2-5個(gè)可疑菌落，在堿性瓊脂平板表面劃線，于（36±1）℃條件下培養(yǎng)12h-18h。在選擇性平板上直接挑取可疑菌落，用O1/O139兩價(jià)混合血清凝集，并使用分離到的純菌在生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行生化鑒定實(shí)驗(yàn)。O1的菌株再用小川/稻葉血清分別凝集，做生物型鑒定試驗(yàn)可報(bào)告霍亂菌的生物型，同時(shí)采用PCR技術(shù)檢測(cè)霍亂菌的產(chǎn)毒株/非產(chǎn)毒株，可報(bào)告血清群、血清型、產(chǎn)毒/非產(chǎn)毒。鑒定主要注意事項(xiàng)：一是要所有的血清和試劑均在有效期內(nèi)使用;二是用于做血清凝集實(shí)驗(yàn)的玻片一定潔凈，不得有影響檢測(cè)結(jié)果的污跡;三是出現(xiàn)可疑結(jié)果一定要多次實(shí)驗(yàn)，避免遺漏陽(yáng)性菌株。

霍亂弧菌主要檢測(cè)標(biāo)本應(yīng)該如何采集？

1.由于霍亂是一種烈性消化道傳染病，采樣人員要注意按二級(jí)防護(hù)要求做好個(gè)人防護(hù)。撲滅霍亂疫情需要花費(fèi)大量人力物力財(cái)力，檢測(cè)結(jié)果會(huì)直接影響政府防控措施的實(shí)施，因此在標(biāo)本采集的時(shí)候應(yīng)該保證每一個(gè)標(biāo)本的編號(hào)是唯一的。標(biāo)本采集后應(yīng)冷藏保存，在沒(méi)有冷藏條件的情況下，特別是夏天應(yīng)該將運(yùn)送時(shí)間計(jì)算進(jìn)培養(yǎng)時(shí)間。

2.患者糞便 糞便標(biāo)本的采集越快越早越好，這樣會(huì)盡早獲得檢測(cè)結(jié)果為撲滅疫情贏得時(shí)間，在患者腹瀉的便池、地面、或者醫(yī)院專用的糞便收集器挑取一定量的糞便加入堿胨增菌液中，同時(shí)也在4號(hào)瓊脂平板劃線，一起送實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)檢測(cè)。

3.水體 采集包括河口水、井水、鄉(xiāng)鎮(zhèn)自來(lái)水廠源水、下水道排放口等水體樣本。一是以滅菌的500ml鹽水瓶采取水樣450ml，不要讓水樣充滿整個(gè)瓶子。二是Moore紗布集菌法：該方法尤其適用于河流等流動(dòng)水體水樣的采集，城市生活污水的采集也可采用此方法。三是Spira紗布集菌法：用于過(guò)濾并采集大體積水樣。

4.患者嘔吐物、食品等 嘔吐物、食品、水產(chǎn)品、蒼蠅、被污染的物體表面都是用無(wú)菌的鑷子或棉拭子取用一定數(shù)量的檢材，放入滅菌容器或者直接放入堿胨水試管里中送檢。