中藥皮膚洗劑不同配伍對臨床耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的影響

馬媛　仝景晨　王媛媛

【摘要】目的：研究皮膚洗劑中常用的黃柏、苦參、黃連、黃芩等兩種配伍對臨床耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和不耐藥的金黃色葡萄球菌的體外抑菌作用。方法：微量二倍稀釋法測最小抑菌濃度（MIC），用平板涂布法測最小殺菌濃度（MBC）。結(jié)果：皮膚抗感染1號方劑飲片合煎劑及其顆粒劑對不耐藥的金黃色葡萄球菌和臨床耐甲氧西林金黃色葡萄球菌均有抑制作用;皮膚抗感染2號方劑水煎劑對不耐藥的金黃色葡萄球菌和臨床耐甲氧西林葡萄球菌均有抑制作用，對不耐藥的金黃色葡萄球菌效果更為顯著。結(jié)論：中藥不同配伍對不耐藥的金黃色葡萄球菌和臨床耐甲氧西林金黃色葡萄球菌均存在體外抑菌作用，但對耐藥性細(xì)菌和不耐性細(xì)菌影響是不一樣的。

【關(guān)鍵詞】金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC29213）;臨床耐甲氧西林葡萄球菌;中藥配伍;抑菌

金黃色葡萄球菌是常見的革蘭氏陽性致病菌，它經(jīng)常引起臨床上的化膿性感染，也是引起醫(yī)源性感染的常見病原體菌。隨社會發(fā)展和人類疾病譜的改變，由創(chuàng)傷引起的皮膚感染和潰瘍當(dāng)中的一些細(xì)菌對阿莫西林的耐藥率高達(dá)100%，耐藥率從高到低依次為青霉素.鏈霉素等抗生素。檢測新生兒皮膚上的金黃色葡萄球菌發(fā)現(xiàn)其對頭孢唑林、阿莫西林等具有較好的抗菌性。然而，在我國源遠(yuǎn)流長的中藥史中，發(fā)現(xiàn)中草藥對臨床上的一些細(xì)菌性疾病有比較好的治療作用，同時中藥配方也可減慢細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生，這對治療細(xì)菌性疾病有重要的意義。經(jīng)查閱文獻(xiàn)并訪問臨床大夫發(fā)現(xiàn)黃柏、苦參、公英、地丁、野菊花配伍在臨床外用治療臨床耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的引起的皮膚感染效果較強，黃連、黃芩、苦參、板藍(lán)根配伍不耐藥的金黃色葡萄球菌和效果不一樣。

1實驗材料

1.1菌株：普通不帶耐藥性的金黃色葡萄球菌菌株ATCC 29213（簡稱金葡），臨床耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（簡稱金臨），陜西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科，通過分離培養(yǎng)按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第四版進行，選用法國梅里埃公司VITEK～2 Compact全自動微生物分析系統(tǒng)進行菌種鑒定。

1.2皮膚抗感染1號方劑：黃柏，苦參，公英，地丁，野菊花。

皮膚抗感染2號方劑：黃連，黃芩，苦參，板藍(lán)根。

1.3培養(yǎng)基：營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，MH培養(yǎng)基。

1.4器材：生物安全柜：BBS-SDC型，濟南鑫貝西生物技術(shù)有限公司、搖床：TS-100C型，上海天呈實驗儀器制造有限公司、酶標(biāo)儀：RT～2100C型，深圳市電子有限公司、分光光度計：723型，上海光譜儀器有限公司、恒溫培養(yǎng)箱：LRH-250A，廣東省醫(yī)療器械廠、超凈工作臺、無菌96孔聚乙烯U形微量板、KDC-40低速離心機，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司、手提式壓力蒸汽滅菌器：YX～型，江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司、移液槍及槍頭、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、酒精燈、電藥鍋、量筒、燒杯、玻璃棒、錐形瓶、試管等。

2實驗方法

2.1中藥制備 ①制備皮膚抗感染1號方劑飲片：水煎后濃縮至藥液濃度為1.85g/ml。②制備皮膚抗感染2號方劑：水煎后濃縮至藥液濃度為0.83g/ml。③分別制備皮膚抗感染1號方劑和皮膚抗感染2號方劑的顆粒劑：將顆粒劑與水混勻，得皮膚抗感染2號方劑顆粒劑的濃度為0.33g/ml，皮膚抗感染2號方劑顆粒劑的濃度為0.59g/ml。將皮膚抗感染1號方劑飲片記為飲1號，顆粒劑記為顆粒1號;將皮膚抗感染2號方劑飲片標(biāo)記為飲2號，顆粒劑記為顆粒2號。

2.2培養(yǎng)基的制備 按說明配制營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基和固體瓊脂培養(yǎng)基并滅菌備用

2.3接種并培養(yǎng)細(xì)菌 用接種環(huán)在超凈工作臺上挑取單個菌株，將其移入相應(yīng)錐形瓶的培養(yǎng)液中，置于搖床上運行2h，使溶液變渾濁，吸取部分溶液放入分光光度計測量，測量結(jié)果將控制在OD值為0.100±0.005范圍內(nèi)。

2.4采用二倍稀釋法制作96孔板，并進行分組（1）純藥對照組;（2）純菌對照組;（3）純培養(yǎng)基對照組;（4）實驗組：①飲1號+金臨;②飲1號+金葡;③飲2號+金臨;④飲2號+金葡;⑤顆粒1號+金臨;⑥顆粒1號+金葡;⑦顆粒2號+金臨;⑧顆粒2號+金葡。（ 每種方劑對應(yīng)的細(xì)菌做三次平行實驗）

2.5 MBC的測定分別選取，1/2，1/4，1/8孔內(nèi)的相應(yīng)菌液，吸取50μl滴入MH培養(yǎng)基內(nèi)，并用玻璃刮鏟涂布均勻，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，觀察菌株生長情況。（ 每種方劑對應(yīng)的細(xì)菌做三次平行實驗）

3實驗結(jié)果

由圖可得：

①顆粒1號和顆粒2號分別作用于金臨時，顆粒1號較顆粒2號抑制效果更加;飲1號和飲2號分別作用于金臨時，飲1號的作用效果更顯著。

②顆粒1號和顆粒2號分別作用于金葡時，顆粒1號效果更好;飲1號和飲2號分別作用于金葡時，飲1號的效果較飲2號明顯。

③顆粒1號分別對金臨和金葡作用時，顆粒1號對金葡的抑制效果強于金臨;飲1號分別作用于金臨和金葡時，飲1號對金葡的效果更好。

④顆粒2號分別對金臨和金葡作用，發(fā)現(xiàn)對金葡抑制效果更好;飲2號對金臨和金葡的作用時，飲2號對金葡的抑制效果強于金臨。在以上的對比中，顆粒1號和飲1號均對金臨有抑制作用，也對金葡有抑制作用，但對金葡的效果較佳。顆粒2號僅對金葡有較好的抑制作用，但在較高濃度下才對金臨表現(xiàn)為抑制作用。綜上，中藥對耐藥性金黃色葡萄球菌和標(biāo)準(zhǔn)金黃色葡萄球菌均存在抑制作用。

4討論

黃柏具有廣譜抗菌作用，發(fā)現(xiàn)黃柏對化膿性球菌具有明顯的抗菌作用，尤其對金黃色葡萄球菌抑制效果較強。紫花地丁的提取物具有抗菌、抗炎等作用}。黃芩的提取物黃芩素能抑制金黃色葡萄球菌生物被膜的形成。黃連有廣譜的抗菌、抗病毒作用，對金葡、霍亂弧菌、乙型鏈球菌作用較強。然而，近年的研究表明，隨著抗生素應(yīng)用，細(xì)菌的耐藥性逐漸增強，本實驗研究不同濃度和不同種類的藥物對不同菌種的作用，通過觀察所測細(xì)菌前后OD值的變化，從而得出結(jié)論，為臨床診治提供理論依據(jù)和參考。

黃連、黃芩、苦參、板藍(lán)根采取“群藥共煎”的方法發(fā)現(xiàn)其產(chǎn)生沉淀，而有研究證明沉淀主要是由黃連和黃芩產(chǎn)生的，有學(xué)者提出黃連和黃芩共煎時小檗堿和黃芩苷的含量增加，由此猜測是由于在水煎時通過某種作用使其理化性質(zhì)發(fā)生了變化，因此提高藥性。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，苦參外用能有效的抑制金葡菌以及耐藥菌生物被膜的形成，從而達(dá)到良好的抗菌效果，且經(jīng)過配伍后的苦參抗菌效果會更好。中藥里面含有的化學(xué)物質(zhì)很可能通過破壞細(xì)菌細(xì)胞膜或蛋白質(zhì)的合成來抑制或殺死細(xì)菌。如：醛類物質(zhì)、酸性物質(zhì)或堿性物質(zhì)可以通過使蛋白質(zhì)烷基化、變性或破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)菌生長受到抑制甚至死亡。

中藥可能在改善菌群關(guān)系中也扮演了重要的角色，分別用中藥作用于金葡和金臨，發(fā)現(xiàn)中藥濃度較大時，細(xì)菌基本不生長，而濃度小的時候細(xì)菌生長較快，則推測中藥濃度在較高稀釋倍數(shù)的條件下呈中性，導(dǎo)致金葡菌快速增長。

金葡菌是自然界中一種常見的病原菌，常感染免疫力低下的人群，且易產(chǎn)生耐藥性，在臨床上不易有效去除，在人體皮膚表面以及呼吸道各個地方容易造成感染，對醫(yī)院環(huán)境造成污染。本實驗主要研究中藥的抑菌作用，為臨床上對癥下藥提供理論依據(jù)。中藥學(xué)是我國的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)，同樣也是我們的傳統(tǒng)文化，因此，傳統(tǒng)中藥應(yīng)結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，更好的開拓中藥的發(fā)展。