不同衍生化方法對(duì)多種油脂中脂肪酸組成的GC-FID分析

張桐棟

摘 要：隨著生活水平的提高，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注生活中所食用生物產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。脂肪酸作為油脂的主要成分，具有很多特殊的生理功能。本文著重比較了不同脂肪酸衍生化方法對(duì)多種油脂中脂肪酸組分的定性定量分析結(jié)果，同時(shí)提供了一種可用于微量油脂檢測(cè)的脂肪酸分析方法，以期為相關(guān)領(lǐng)域的研究和檢驗(yàn)人員提供參考和借鑒。

關(guān)鍵詞：油脂;魚(yú)油;植物油;脂肪酸;氣相色譜-氫火焰離子化檢測(cè)器

Abstract：With the improvement of living standards， people are paying heavy attention to the nutritional value of biological products. Fatty acids as the main component of oils and fats， have some special physiological functions. The objective of this article is focusing on comparing the qualitative and quantitative analysis results of different fatty acid derivatization methods for fatty acid components in various oils. This work may provides a fatty acid analysis method that can be used for trace oils and fats; in addition， it provides new ideas for related researchers.

Key words：Oil; Fish oil; Vegetable oil; Fatty acids; GC-FID

中圖分類(lèi)號(hào)：R151.4+1

脂肪酸在人體中具有重要的生理功能，不同油脂的脂肪酸組成具有較大差異。醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，適量攝入多不飽和脂肪酸（PUFA），特別是n-3 PUFA，如二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA），有助于降低冠心病、動(dòng)脈硬化、癌癥、糖尿病、高血壓、抑郁及其他一系列疾病的發(fā)生率[1-3]。目前，市售的n-3 PUFA主要來(lái)自魚(yú)油、藻油等海洋生物油脂。常見(jiàn)的其他種類(lèi)食用油脂，如玉米油、橄欖油，一般也含有特別的脂肪酸組分。

油脂中的脂肪酸組成和含量一般使用氣相色譜（GC）進(jìn)行分析檢測(cè)，為提高GC檢測(cè)靈敏度，通常將油脂進(jìn)行前處理，即把脂肪酸衍生為?；ィㄒ话銥榧柞ィ?。目前，應(yīng)用最廣的脂肪酸衍生化方法主要是H2SO4催化法和BF3催化法，可以有效甲酯化幾乎所有的脂質(zhì)，如甘油酯、游離脂肪酸。但是這類(lèi)脂肪酸衍生化方法一般需要利用較多的原料油脂，才能進(jìn)行準(zhǔn)確的甲酯化分析，不能滿(mǎn)足某些實(shí)驗(yàn)室對(duì)油脂進(jìn)行微量分析的需要。此外，不同衍生化方法對(duì)于不同油脂中脂肪酸的分析效果也具有一定差異，需進(jìn)行比較研究。本文在總結(jié)前人相關(guān)工作的基礎(chǔ)上，提供一種油脂中脂肪酸的微量測(cè)定方法，并利用不同衍生化方法對(duì)多種食用油脂中脂肪酸組成進(jìn)行對(duì)比分析，以期為國(guó)內(nèi)相關(guān)領(lǐng)域的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器。配備自動(dòng)進(jìn)樣器的Agilent 7890B氣相色譜儀（FID檢測(cè)器），采用60 mFFAP色譜柱，購(gòu)自蘭州中科安泰分析科技有限公司。

試劑。10 mg·mL-1脂肪酸甲酯混標(biāo)，購(gòu)自Sigma公司;正己烷、甲醇等分析純有機(jī)溶劑，購(gòu)自賽默飛世爾（中國(guó)）有限公司;濃硫酸等其他試劑采用國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品;市售國(guó)產(chǎn)魚(yú)油、進(jìn)口魚(yú)油、玉米油、橄欖油均為正規(guī)途徑購(gòu)買(mǎi);藻油為某生物公司惠贈(zèng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 H2SO4催化衍生法

參考其他學(xué)者的研究并進(jìn)行適當(dāng)改進(jìn)[4]。將10 mg

油脂與1 mL正己烷加入到樣品瓶中，漩渦混勻后移取100 μL溶液至裝有聚四氟乙烯內(nèi)襯的8 mL進(jìn)口玻璃反應(yīng)瓶中，氮?dú)獯蹈扇軇?。加? mL H2SO4-CH3OH（2%，m/m）溶液，在80 ℃烘箱中反應(yīng)2～2.5 h，

每30 min漩渦混勻。反應(yīng)結(jié)束后降至室溫，加入1 mL正己烷、1 mL飽和氯化鈉溶液，2 500 r·min-1離心5 min，

吸取上清液。然后加入0.5 mL正己烷，重復(fù)提取2次，合并上清液。氮?dú)獯蹈扇軇┖?，加? mL正己烷定容，待GC檢測(cè)。

1.2.2 BF3催化衍生法

將10 mg油脂與1 mL正己烷加入樣品瓶中，漩渦混勻后移取100 μL溶液至裝有聚四氟乙烯內(nèi)襯的8 mL進(jìn)口玻璃反應(yīng)瓶中，氮?dú)獯蹈?。加? mL 14% BF3-CH3OH溶液，在70 ℃烘箱中反應(yīng)1 h，每20 min漩渦混勻。反應(yīng)結(jié)束后降至室溫，加入1 mL正己烷、1 mL飽和氯化鈉溶液，2 500 r·min-1離心5 min，吸取保留上清液。然后加入0.5 mL正己烷，重復(fù)提取2次，合并上清液。氮?dú)獯蹈珊?，加? mL正己烷定容，待GC檢測(cè)。

1.2.3 GC-FID運(yùn)行參數(shù)

柱箱初始溫度為100 ℃;7.5 ℃·min-1升溫至250 ℃，保持30 min;He為載氣;流速1.5 mL·min-1;進(jìn)樣量2 μL。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析

進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。利用外標(biāo)法進(jìn)行脂肪酸甲酯的數(shù)據(jù)分析，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度選?。?0.0、7.5、5.0、2.5 mg·mL-1和1.0 mg·mL-1。利用這5個(gè)濃度梯度做外標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

2 結(jié)果與分析