一種閩產(chǎn)青紅酒粗多糖和總黃酮的測(cè)定

周美蘭 許景 闞永軍

【摘 要】 目的：采用分光光度法，測(cè)定一種閩產(chǎn)青紅酒中粗多糖和總黃酮含量。方法：采用醇沉法，分離酒中粗多糖，以無(wú)水D-葡萄糖為對(duì)照品，采用苯酚-硫酸法檢測(cè)粗多糖含量;以蘆丁為對(duì)照品，在360nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果：測(cè)定葡萄糖范圍3.86～12.87μg/mL，回歸方程為y=53.32x-0.021，r=0.9984;測(cè)定蘆丁線性范圍7.56～22.68μg/mL，回歸方程為y=0.034x-0.022，r=0.9993。結(jié)論：通過(guò)測(cè)定青紅酒中粗多糖和總黃酮含量，有利于對(duì)產(chǎn)品配方及工藝進(jìn)行質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 青紅酒;分光光度法;粗多糖;總黃酮

【中圖分類(lèi)號(hào)】R283 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號(hào)】1007-8517（2020）1-0035-04

Abstract：objective The contents of crude polysaccharide and total flavonoids in a kind of Green Red Wine produced in Fujian Province were determined by spectrophotometry.Methods Crude polysaccharides from wine were separated by alcohol precipitation method， and anhydrous D-glucose was used as control. Rutin was used as control; the content of total flavonoids in Green Red Wine was determined by colorimetry method. Results Glucose was determined in a linear range of 3.86～12.87μg/mL，the regression equation was y= 53.32x-0.021with the correlation coefficent of 0.9984.Rutin was determined in a linear range of 7.56～22.68μg/mL， the regression equation was y= 0.034x-0.022 with a correlation coefficent of 0.9993. Conclusion The determination of crude polysaccharide and total flavonoids in Green Red Wine is beneficial to the quality control of product formulation and process.

Keywords：Green Red Wine;Spectrophotometry Method;Crude Polysaccharide;Total Flavonoids

青紅酒，是以福建獨(dú)有的古田紅曲做為糖化發(fā)酵劑，選用上好的糯米，配以秘制藥白曲，精釀而成，色呈琥珀，口感柔順綿長(zhǎng)。青紅酒，被譽(yù)為閩派黃酒的正宗，含有豐富的葡萄糖、糊精、氨基酸、維生素和多種酯類(lèi)物組成;酒精度為13%左右，刺激性小，適量常飲，有促進(jìn)食欲、舒筋活絡(luò)、生津補(bǔ)血、調(diào)養(yǎng)身體、解除疲乏的功效，是一種老少皆宜的飲用酒。

立足于福建紅曲和道地藥材綜合利用，以中華老字號(hào)企業(yè)的百年釀造經(jīng)驗(yàn)，采用閉合式生產(chǎn)模式。以黃精等藥食同源中藥為原料，選用道地多花黃精，有機(jī)圓糯米及古田紅曲、秘制藥白曲，由國(guó)家級(jí)高級(jí)釀酒師、中醫(yī)藥專家組成的團(tuán)隊(duì)精心配方研制。在保留傳統(tǒng)釀造工藝基礎(chǔ)上，優(yōu)化本產(chǎn)品工藝，萃取原料之精華發(fā)酵而成。酒色橙黃清亮，酒味醇厚，香氣雅致，口感柔和甘甜，酒與黃精完美融合，有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤(rùn)肺，益腎之功效。產(chǎn)品上市獲得消費(fèi)者贊譽(yù)。青紅酒樣品圖片見(jiàn)圖1。

糖類(lèi)是黃精化學(xué)組成中含量最多的重要活性部分，黃精多糖含量最大，約占11.74%;黃酮具有較高的藥用價(jià)值，并且為黃精屬植物的活性成分之一[1]。多糖是一類(lèi)非特異性免疫增強(qiáng)劑，而且有降血糖、降血脂、降血清過(guò)氧化脂質(zhì)和降低膽固醇濃度、抗血凝等作用[2-4];黃酮具有消除疲勞、降血脂、降血糖、保護(hù)血管、防動(dòng)脈粥樣硬化、擴(kuò)張毛細(xì)血管、抗衰老和抗菌作用、活化大腦細(xì)胞和其他臟器細(xì)胞的功能等多種功效[5]。

本文采用醇沉提取酒中多糖、以D-葡萄糖為對(duì)照品，苯酚一硫酸顯色，490nm波長(zhǎng)處測(cè)定黃精青紅酒中粗多糖含量[6];采用聚酰胺層析法提取酒中黃酮[7]，以蘆丁為對(duì)照品，360nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮含量。為產(chǎn)品配方及工藝的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 紫外分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司，型號(hào)：UV-3200）;水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號(hào)：DK420S）;離心機(jī)（湖南液儀實(shí)驗(yàn)室YI儀器開(kāi)發(fā)有限公司，型號(hào)：L-530低速離心機(jī)）;電子天平（梅特勒-特利多，型號(hào)：AE240S）

1.2 材料與試劑 無(wú)水乙醇（西隴化工有限公司，批號(hào)16010902）;苯酚（國(guó)藥，20150716）;D-無(wú)水葡萄糖（成都曼思特生物科技有限公司，MUST-11020603）。聚酰胺粉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20150924，規(guī)格：100-200目500g）;蘆?。ǔ啥悸继厣锟萍加邢薰?，規(guī)格：對(duì)照品 A0103-20mg）;乙醇（西隴化工有限公司，批號(hào)16010902，規(guī)格：AR500mL）;甲醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20150824，規(guī)格：AR5L）;苯（西隴化工有限公司，批號(hào)1601131，規(guī)格：AR500mL）。

供試品：1號(hào)黃精青紅酒，將黃精浸泡于青紅酒中;2號(hào)黃精青紅酒，將黃精與紅曲米一起投料發(fā)酵。同一工藝，同一批次取3個(gè)樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品中粗多糖測(cè)定

2.1.1 試劑 配制取無(wú)水葡萄糖對(duì)照品2.57mg于25mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，得濃度為0.103mg/mL的對(duì)照品溶液。取苯酚2.50g加50ml純水溶解即得5%的苯酚溶液。

2.1.2 吸收曲線的繪制 對(duì)濃度10μg/mL葡萄糖對(duì)照品溶液，在200-800nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)作圖，繪制出曲線，此曲線即為葡萄糖的吸收光譜曲線。葡萄糖最大吸收波長(zhǎng)為490nm，如圖2所示。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取對(duì)照品溶液0.3mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分別置15mL具塞試管中，各加水補(bǔ)至2.0mL，精密加入5%苯酚溶液l.0mL，搖勻，再精密加濃硫酸5.0mL，搖勻，置沸水浴中加熱2min，取出，流水冷卻到室溫，以相應(yīng)試劑為空白，采用紫外-可見(jiàn)分光光度法，在490nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，結(jié)果見(jiàn)表1。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為y=53.32x-0.021，r=0.9984。

2.1.4 黃精青紅酒中粗多糖測(cè)定 取10mL受試樣品加無(wú)水乙醇35ml，置于4℃冰箱中靜置4h，離心（4000r/ 10min），倒去上清液，收集沉淀，加純水5mL溶解，加無(wú)水乙醇20mL，反復(fù)溶解沉淀3次。收集沉淀，將沉淀用水溶于200mL容量瓶中，搖勻，即得供試溶液。

精密量取黃精青紅酒供試溶液0.5mL，加水補(bǔ)至2mL，置于具塞試管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“2.1.1項(xiàng)下，精密加入5%苯酚試液1.0mL”起，依照測(cè)定吸光度，以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算試樣中總多糖的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 供試品中總黃酮測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液配制 稱取2.52mg蘆丁，加甲醇溶解并定容至50mL，即得50.4μg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2.2 吸收曲線的繪制 對(duì)濃度10μg/mL蘆丁對(duì)照品溶液，在200～800nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，繪制出曲線，此曲線即為蘆丁的吸收光譜曲線。蘆丁在紫外光區(qū)最大吸收波長(zhǎng)為360nm，如圖3所示。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 吸取0、1.5、2.0、3.0、4.0、4.5mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，于360nm測(cè)定吸光度值，見(jiàn)表3。以濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：y= 0.0328x+ 0.0171，r=0.9983。

2.2.4 黃精青紅酒中總黃酮測(cè)定量取試樣50mL各3份，置于蒸發(fā)皿中70℃濃縮至約10mL，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶，加無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻后，超聲提取20min，離心（4000r/min，10min），吸取上清液2.0mL，于蒸發(fā)皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上揮去乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱（1cm×25cm）。先用20mL苯洗，棄去苯液，然后用甲醇洗脫黃酮，定容至25mL。取上述溶液離心，于波長(zhǎng)360nm測(cè)定吸光度值。依照測(cè)定吸光度，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算試樣中總黃酮的含量。結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

由表3可以看出，兩種不同工藝制備的黃精青紅酒，1號(hào)供試品浸泡黃精酒每100mL粗多糖平均含量為14.89mg，2號(hào)供試品發(fā)酵黃精酒每100mL粗多糖平均含量為76.28mg，是1號(hào)樣品的5.1倍;由表4可以看出，1號(hào)供試品浸泡黃精酒每100mL總黃酮平均含量為16.28mg，2號(hào)供試品發(fā)酵黃精酒每100mL總黃酮平均含量為72.16mg，是1號(hào)樣品的4.4倍。

發(fā)酵黃精酒中的多糖和黃酮均高于浸泡黃精酒，同時(shí)發(fā)酵黃精酒的口感和色澤均優(yōu)于浸泡黃精酒。因此無(wú)論是從功效成分，還是從外觀和味道，發(fā)酵黃精酒工藝均優(yōu)于浸泡黃精酒工藝。

4 結(jié)論

本文采用醇沉法提取多糖簡(jiǎn)單易行，聚酰胺柱層析法已廣泛用于黃酮類(lèi)成分分離純化，以提高提取物黃酮成分的含量;兩種提取分離方法的應(yīng)用，可避免酒干擾色對(duì)測(cè)定的影響。通過(guò)測(cè)定青紅酒中粗多糖和總黃酮等功效成分含量，有利于對(duì)產(chǎn)品配方及工藝進(jìn)行質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1]李小沛，張亞玉，趙立春，等. 黃精的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J]. 植物學(xué)研究， 2017， 6（5）： 255-261.

[2]楊明河， 于德泉. 黃精多糖和低聚糖的研究[J]. 藥學(xué)通報(bào)， 1980（7）： 44-45.

[3]CHEN J L，PANG W S，SHI W T，et al. Structural elucidation of a novel polysaccharide from Pseudostellaria heterophylla and stimulating glucose uptake in cells and distributing in rats by oral[J]. Molecules， 2016， 21（9） ：1-18.

[4]CHEN J L，PANG W S，KANY J，et al. Structure of a pectic polysaccharide from Pseudostellaria heterophylla and stimulating insulin secretion of INS-1 cell and distributing in rats by oral[J]. International Journal of Biological Macromolecules，2018（106）：456-463.

[5]王文君， 向燦輝， 劉成紅. 黃精總黃酮的提取與性質(zhì)分析[J]. 食品工業(yè)， 2014， 35（10）： 259-261.

[6]白少偉， 徐媛， 龐文生， 等. 液態(tài)保健品中總多糖含量測(cè)定方法研究. 中國(guó)民族民間醫(yī)藥[J]， 2014， （7）：26.

[7]貝偉劍， 彭文烈， 羅杰. 柿葉黃酮的大孔吸附樹(shù)脂分離提純富集. 中成藥[J]，2005，27（3）： 257-261.

（收稿日期：2019-10-15 編輯：劉斌）