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    代謝組學(xué)在化學(xué)品風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)中的應(yīng)用

    2020-04-08 02:21:52常靜潘一帆魏若瑾李濟(jì)彤楊璐朱莉飛王會(huì)利
    生態(tài)毒理學(xué)報(bào) 2020年6期
    關(guān)鍵詞:毒理學(xué)代謝物組學(xué)

    常靜,潘一帆,魏若瑾,李濟(jì)彤,楊璐,朱莉飛,王會(huì)利,*

    1. 中國科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心環(huán)境生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100085 2. 北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所,北京 100068

    據(jù)美國《化學(xué)文摘》數(shù)據(jù)庫(Chemical Abstracts Service Registry, CAS Registry)統(tǒng)計(jì),目前市場上使用的化學(xué)品約有840萬種,僅有24萬種已經(jīng)列入監(jiān)管名錄(https://www.cas.org/about/cas-content)?;瘜W(xué)品風(fēng)險(xiǎn)評估對保護(hù)人類健康起到重要作用,然而傳統(tǒng)化學(xué)品毒理學(xué)評價(jià)速度(平均2~3年/化學(xué)品)[1]已經(jīng)趕不上化學(xué)品的發(fā)展速度(200~300化學(xué)品/年)[2]。目前,約80%以上化學(xué)品的環(huán)境安全信息是缺失的,這對化學(xué)品毒性風(fēng)險(xiǎn)評估工作帶來前所未有的挑戰(zhàn)[3-4]。傳統(tǒng)的毒性測試方法具有通量低、周期長、敏感度低和成本高等特點(diǎn)。近年來,隨著毒理學(xué)新技術(shù)的發(fā)展,國內(nèi)外研究學(xué)者已經(jīng)開始從傳統(tǒng)的毒理學(xué)試驗(yàn)方法向快速、靈敏和高效的試驗(yàn)方法轉(zhuǎn)變,例如,作為系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分,基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)在化學(xué)品毒性作用機(jī)制研究中具備很大優(yōu)勢。

    基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用于毒理學(xué)評價(jià)并不能直接提供毒性終端信息,而所有生理病理狀態(tài)的改變都可以通過直接的生物化學(xué)反應(yīng),從內(nèi)源代謝物的濃度和種類上體現(xiàn)出來,所以,繼基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)之后,代謝組學(xué)被納入新的研究策略[5]。將代謝組學(xué)技術(shù)應(yīng)用于毒理學(xué)研究的主要原理是通過分析生物化學(xué)通路中小分子代謝物(碳水化合物、脂肪酸、核酸和氨基酸等)的變化情況篩選出早期暴露的重要生物標(biāo)記物,揭示化學(xué)品暴露之后的主要干擾通路和毒性機(jī)理。雖然,近年來代謝組學(xué)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于毒性評價(jià)領(lǐng)域,但是尚未見系統(tǒng)地介紹代謝組學(xué)在化學(xué)品毒理學(xué)研究中的優(yōu)勢與應(yīng)用。鑒于此,本文對此進(jìn)行綜述。

    1 代謝組學(xué)概述(Overview of metabolomics)

    1.1 代謝組學(xué)起源

    代謝組(metabolome)最初是由Stephen Oliver在1998年提出的,主要指基因缺陷或過表達(dá)過程中導(dǎo)致的代謝物的變化情況[6];1999年,Jeremy Nicholoson提出了代謝組學(xué)(metabonomics)的概念,指出代謝組學(xué)是通過考察生物體在經(jīng)過生理、病理刺激或者遺傳修飾后,其內(nèi)源代謝物的動(dòng)態(tài)變化[7];2001年,Oliver Fiehn對代謝組學(xué)(metabolomics)概念進(jìn)行更新,提出代謝組學(xué)主要是對所研究的生物系統(tǒng)的所有代謝產(chǎn)物進(jìn)行全面定量分析[8]。

    1.2 代謝組學(xué)的發(fā)展

    代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)之后發(fā)展起來的一門學(xué)科,是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分。代謝組學(xué)主要是研究細(xì)胞、組織或生物液體中自然發(fā)生的低分子量(<1 000)有機(jī)代謝物(糖、有機(jī)酸、脂質(zhì)、維生素、氨基酸和芳香烴類化合物等)的科學(xué)。代謝組學(xué)研究主要分為靶向代謝組學(xué)和非靶向代謝組學(xué)。非靶向代謝組學(xué)是非目標(biāo)性地對所有可能發(fā)生改變的代謝物進(jìn)行檢測,篩選出目標(biāo)代謝物及相應(yīng)的代謝通路,而靶向代謝組學(xué)是有目標(biāo)地對特定通路中的代謝物進(jìn)行檢測分析。

    代謝物的檢測有多種方法,可以選擇核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)、氣質(zhì)聯(lián)用(gas chromatography-mass spectra, GC-MS)和液質(zhì)聯(lián)用(liquid chromatography-mass spectra, LC-MS)等分析儀器,各個(gè)方法的優(yōu)缺點(diǎn)如表1所示。其中,NMR具有較高的分辨率,并且對樣品的損傷小,檢測時(shí)間短,但是靈敏度差;GC-MS有完整的數(shù)據(jù)庫支持,靈敏度要比NMR高,但是樣品前處理過程繁瑣;LC-MS具有較高的分辨率和靈敏度,但是不具備完整的數(shù)據(jù)庫,目前,可供參考的數(shù)據(jù)庫有Human Metabolome Database (HMDB)、Madison Metabolomics Consortium Database (MMCD)、Metlin、Lipidmaps和Mzcloud等。

    代謝組學(xué)數(shù)據(jù)分析常用的方法為主成分分析法(principle component analysis, PCA)、偏最小二乘法-判別分析(partial least squares-discriminant analysis, PLS)和正交偏最小二乘法-判別分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis, OPLS)。根據(jù)模式識別結(jié)果篩選出顯著變化的代謝物,之后利用一些網(wǎng)絡(luò)工具及公共數(shù)據(jù)庫如MetaboAnalyst、HMDB和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)等進(jìn)行代謝物的信息解釋,利用P值和推測變異重要性值(variable importance in the projection, VIP)尋找受到顯著影響的代謝通路,進(jìn)一步通過代謝通路的變化對致毒機(jī)制進(jìn)行深入探究。

    代謝組學(xué)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃(Metabolomics Standard Initiatives, MSI)于2005年啟動(dòng),意在對代謝組學(xué)方法進(jìn)行規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)化。2007年,連續(xù)發(fā)表10篇關(guān)于代謝組學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化的相關(guān)文章[9-18],特別是針對將代謝組學(xué)應(yīng)用于毒理學(xué)研究過程中的質(zhì)量保證和質(zhì)量控制問題展開研究[19]。經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(Organization for Economic Co-operation and Development, OECD)在2018年開始著手起草代謝組學(xué)報(bào)告框架(Metabolomics Reporting Framework, MRF),這一項(xiàng)目的實(shí)施也將為代謝組學(xué)數(shù)據(jù)庫的建立打下基礎(chǔ)。

    表1 代謝物檢測方法的總結(jié)Table 1 The summary of metabolite detection methods

    1.3 代謝組學(xué)應(yīng)用范圍

    不同于基因組學(xué)和蛋白組學(xué),代謝組學(xué)的研究可以反映某一時(shí)刻下正在發(fā)生的生命活動(dòng)情況。研究代謝物的表達(dá)量、代謝物與生理病理變化的關(guān)系,能夠幫助尋找新的生物標(biāo)記物,發(fā)現(xiàn)新的代謝途徑。目前,代謝組學(xué)可以應(yīng)用于疾病的早期診斷[26-29]、環(huán)境監(jiān)測與毒性評價(jià)[30-32]、轉(zhuǎn)基因和育種[33-35]等多個(gè)方面。

    代謝組學(xué)在毒理學(xué)評價(jià)中的應(yīng)用主要分為以下3個(gè)方面:第一,作為毒理學(xué)研究工具發(fā)現(xiàn)化學(xué)品毒性作用通路和分子關(guān)鍵事件(key event, KE),并根據(jù)KE對化學(xué)品進(jìn)行分類[36];第二,在分子水平上提供細(xì)胞或者有機(jī)體表型的功能,與不良有害結(jié)局路徑(adverse outcome pathway, AOP)之間的聯(lián)系[37];第三,通過分析暴露化學(xué)品及其代謝物的濃度來評價(jià)化學(xué)品的毒性效應(yīng)[38-39]。

    2 代謝組學(xué)應(yīng)用于毒理學(xué)評價(jià)的優(yōu)勢(The advantages of metabolomics applying in toxicological assessment)

    傳統(tǒng)評估化合物毒性的方法在很大程度上依賴于動(dòng)物實(shí)驗(yàn),但是多種動(dòng)物模型的安全性試驗(yàn)結(jié)果用于人類是不可靠的[3]。同時(shí),大量試驗(yàn)動(dòng)物的使用造成化學(xué)品毒性評價(jià)的成本過高。例如歐盟化學(xué)品的注冊、評估、授權(quán)和限制(registration, evaluation, authorization and restriction of chemicals, REACH)為了評價(jià)68 000種化學(xué)品的毒性,在未來10年間將花費(fèi)95億歐元和消耗5 400萬脊椎動(dòng)物[2]。而基于代謝組學(xué)的毒理學(xué)評價(jià)方法可以從體外細(xì)胞水平或者組織水平來評價(jià)化學(xué)品的毒性風(fēng)險(xiǎn),不僅大大減少了試驗(yàn)動(dòng)物的用量,降低了實(shí)驗(yàn)成本,而且增加了評估化學(xué)品對人類健康風(fēng)險(xiǎn)的準(zhǔn)確性。

    傳統(tǒng)毒理學(xué)基于半數(shù)致死劑量(LD50/LC50)、臨床檢查(血液學(xué)檢查、血液生化檢查)和病理學(xué)觀察(系統(tǒng)解剖、臟器重量和組織學(xué)改變)對化學(xué)品毒性進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估,這種表觀毒性評價(jià)方法不僅試驗(yàn)周期長(幾天甚至幾年時(shí)間),而且不能從本質(zhì)上揭示化學(xué)品對生命體的毒性作用機(jī)制。應(yīng)用代謝組學(xué)進(jìn)行毒性評價(jià)可以直接監(jiān)控生物對污染物最早期的反應(yīng),在幾乎一出現(xiàn)毒性反應(yīng)時(shí)就能檢測出發(fā)生變化的全部代謝物表達(dá)情況及受干擾的代謝通路。因此,比起傳統(tǒng)的毒理學(xué)測試方法,利用新的毒理學(xué)方法評估化學(xué)品毒性可能會(huì)提供一個(gè)更早更靈敏的毒性反應(yīng)的生物標(biāo)記。

    同時(shí),利用代謝組學(xué)可以將一類化學(xué)品的毒性作用機(jī)制進(jìn)行總結(jié)與外推[40],也可以將化學(xué)品對模式生物的毒性外推到非模式生物,比如通過對比小鼠和人類代謝系統(tǒng)的相似度,由此從化學(xué)品對小鼠的毒性外推到其對人類的風(fēng)險(xiǎn)[41]。

    3 代謝組學(xué)在毒理學(xué)評價(jià)中的應(yīng)用案例(Application of metabolomics in toxicological assessment)

    3.1 生殖毒性的研究

    對人類而言,化學(xué)品暴露的潛在生殖毒性是公眾、衛(wèi)生專業(yè)人員和環(huán)境學(xué)家都十分關(guān)心的問題??紤]到繁殖的重要性,利用代謝組學(xué)對化學(xué)品的生殖毒性展開研究不僅可能有助于開發(fā)新的、更細(xì)微和更有洞察力的生物標(biāo)記,而且還可能為評價(jià)化學(xué)品生殖毒性開辟新的途徑。

    根據(jù)OECD的測試方法來粗略計(jì)算大型溞的后代數(shù)量不能表現(xiàn)出化學(xué)品對生殖系統(tǒng)的毒性作用機(jī)制,所以Taylor等[42-43]利用NMR技術(shù)檢測了鎘、2,4-二硝基苯酚和心得安早期暴露后的差異代謝物,揭示了短期化學(xué)品暴露后大型溞體內(nèi)標(biāo)志代謝物可以預(yù)測化學(xué)品長期暴露后的生殖毒性情況和潛在毒性作用機(jī)理。Yan等[44]通過性激素分析、性腺軸相關(guān)基因分析及代謝組分析(應(yīng)用NMR和LC-MS技術(shù)),對比了硫丹的2個(gè)對映體和其中1個(gè)代謝產(chǎn)物(暴露濃度為0.3 mg·kg-1bw·d-1和3 mg·kg-1bw·d-1)對成年小鼠睪丸的毒性差異,研究表明,14 d暴露后血清中性激素水平的變化和睪丸中內(nèi)源代謝物的變化呈現(xiàn)顯著相關(guān)性,預(yù)示著硫丹對小鼠性腺系統(tǒng)的干擾機(jī)制可以通過代謝組學(xué)手段進(jìn)行揭示。

    4-溴聯(lián)苯醚(4-bromophenoxybenzene, BDE-3)是多溴聯(lián)苯醚在光照下的分解產(chǎn)物,對生殖功能具有一定的影響。Wei等[45]將不同濃度(0.0015、1.5、10和30 mg·kg-1bw·d-1)的BDE-3染毒小鼠42 d,通過精子數(shù)量和睪丸損傷情況發(fā)現(xiàn)BDE-3對小鼠的生殖系統(tǒng)的功能造成了干擾,進(jìn)一步通過超高效液相-四級桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-QTOF/MS)技術(shù)對睪丸內(nèi)代謝物及代謝通路進(jìn)行分析,通過結(jié)果可知,酪氨酸代謝、嘌呤代謝和核黃素代謝通路有望解釋BDE-3對小鼠生殖系統(tǒng)的干擾機(jī)制。

    壬基酚是一種被證實(shí)的內(nèi)分泌干擾物,可以引起生殖和發(fā)育毒性。Di等[46]研究了壬基酚低濃度長期暴露(500 μg·kg-1bw·d-1,暴露8周)下對雌性老鼠生殖系統(tǒng)的影響,壬基酚暴露不僅使血清中雌二醇(E2)水平顯著變化,子宮內(nèi)膜增生,卵子發(fā)生改變,并且尿液、血液、子宮和卵巢內(nèi)的代謝譜(采用超高液相-靜電場軌道阱質(zhì)譜(UPLC-Orbitrap-MS)方法)也隨之發(fā)生了顯著變化。其中,與能量代謝相關(guān)的12種代謝物,特別是9種肉毒堿,被認(rèn)為是壬基酚低濃度早期暴露下的敏感生物標(biāo)志物。

    有機(jī)磷阻燃劑磷酸三(1,3-二氯異丙基)酯(tris(1,3-dichloro-2-propyl)phosphate, TDCIPP)可以對水生生物造成生殖毒性,Zhu等[47]利用轉(zhuǎn)錄組學(xué)和代謝組學(xué)手段探究了TDCIPP對陸生生物蚯蚓的生殖毒性。蚯蚓暴露于不同濃度(50、500和5 000 ng·g-1)TDCIPP污染的土壤28 d,其類固醇合成通路被抑制,同時(shí)通路中膽固醇濃度顯著上調(diào),表明TDCIPP暴露影響了蚯蚓的生殖系統(tǒng)。

    去氫孕酮(dedrogesterone, DDG)暴露可以干擾硬骨魚類的性別組成,但是其毒性作用機(jī)制尚不清楚。Jiang等[48]將不同濃度(4.4、44和440 ng·L-1)的DDG染毒處于性別分化關(guān)鍵期的斑馬魚胚胎140 d,結(jié)果發(fā)現(xiàn),高濃度暴露下98%斑馬魚為雄性?;贚C-MS和GC-MS平臺對斑馬魚胚胎的代謝譜進(jìn)行分析,結(jié)果顯示,多不飽和脂肪酸、肌醇、?;撬?、棕櫚油酸、油酸、乳酸、反丁烯二酸和尿嘧啶的濃度增加,尿酸和膽汁酸的濃度降低。這些代謝物起到抑制斑馬魚性別分化通路的作用,其中,包括NF-κB、COX-2和Wnt/β-catenin通路,同時(shí)p53通路被激活。以上結(jié)果表明,DDG在環(huán)境濃度暴露下就可以干擾斑馬魚胚胎的代謝譜,最終對其性別分化造成影響。

    17α-炔雌醇對生物體的生殖系統(tǒng)具有重要影響,Zhou等[49]通過生理性觀察和代謝組分析(采用GC-MS方法)研究了其對淡水魚生殖系統(tǒng)的作用機(jī)制,研究結(jié)果表明,環(huán)境濃度(17.1 μg·L-1)暴露下17α-炔雌醇沒有對淡水魚的生理上(體重、體長、肝指數(shù)和性腺指數(shù))產(chǎn)生顯著影響,然而性腺中24種代謝物和腎臟中16種代謝物均出現(xiàn)了顯著性變化,這些代謝物主要調(diào)控著氨基酸代謝、脂質(zhì)代謝、能量代謝和氧化應(yīng)激通路,其中,脂質(zhì)代謝通路的變化影響了淡水魚體內(nèi)性激素穩(wěn)態(tài)。以上結(jié)果表明,利用代謝組學(xué)手段可以從環(huán)境濃度揭示化學(xué)品對生物體性腺系統(tǒng)的干擾機(jī)制。

    3.2 肝臟毒性的研究

    肝臟作為化學(xué)品暴露之后的主要靶向器官,化學(xué)品暴露對肝臟的毒性研究較為廣泛,然而環(huán)境濃度暴露下化學(xué)品對肝臟的損傷情況并不顯著,需要利用更加靈敏的技術(shù)來探究其潛在毒性風(fēng)險(xiǎn)。例如,Wang等[50]通過NMR非靶標(biāo)代謝物分析和LC-MS靶標(biāo)代謝物分析發(fā)現(xiàn),苯霜靈(6 mg·kg-1bw·d-1和60 mg·kg-1bw·d-1)經(jīng)口染毒SD大鼠30 d后,大鼠在沒有出現(xiàn)明顯肝臟損傷的情況下,其代謝譜發(fā)生了顯著變化。以上結(jié)果表明,應(yīng)用代謝組學(xué)來評價(jià)化學(xué)品對生命體肝臟的毒性比傳統(tǒng)毒理學(xué)手段更加靈敏可靠。

    有研究指出,短鏈氯化石蠟暴露后,其可以與大鼠肝臟中的過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)結(jié)合,干擾PPARα的信號通路,PPARα主要調(diào)控脂肪酸的代謝過程,通過分析脂肪酸的含量(采用液相-四級桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(LC-QTOF-MS)方法)發(fā)現(xiàn),短鏈氯化石蠟暴露(1、10和100 mg·kg-1bw·d-1)28 d使大鼠肝臟中脂肪酸總量顯著降低,脂肪酸過氧化加劇,這一研究揭示了短鏈氯化石蠟對大鼠肝臟的毒性作用靶點(diǎn)[51]。

    有研究發(fā)現(xiàn),在大西洋鱈魚進(jìn)食含有痕量甲基毒死蜱農(nóng)藥的食物之后,鱈魚肝臟中可以富集高濃度的甲基毒死蜱,使血漿中膽堿酯酶活性發(fā)生顯著變化,肝臟中膽固醇和激素合成通路受到顯著影響,同時(shí)能量代謝通路,包括碳水化合物代謝、三羧酸循環(huán)和運(yùn)輸、碳水化合物代謝、丙酮酸代謝和運(yùn)輸途徑中的代謝物均發(fā)生顯著變化,揭示了環(huán)境濃度下甲基毒死蜱的肝臟毒性作用機(jī)制[52]。

    Dong等[53]通過肝臟組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),低濃度三氯生(0.05 mg·kg-1bw·d-1)的暴露使小鼠肝臟中的脂肪含量顯著增加,進(jìn)一步通過代謝物分析可知,脂肪酸、磷脂和神經(jīng)酰胺化合物的含量也隨之顯著上調(diào),揭示了三氯生對小鼠肝臟的毒性。Geng等[54]利用轉(zhuǎn)錄組和代謝組聯(lián)合分析的手段,研究了三氯生對小鼠的肝臟毒性,揭示了三氯生對肝臟的主要作用機(jī)制為抑制能量代謝通路和激活PPARα通路。Zhang等[55]進(jìn)一步研究了三氯生對人類肝臟細(xì)胞的毒性作用機(jī)制,發(fā)現(xiàn)三氯生暴露主要干擾了肝臟細(xì)胞的能量代謝通路、抗氧化系統(tǒng)和二相代謝排毒系統(tǒng)。以上研究結(jié)果證明了代謝組學(xué)手段分析肝臟毒性的準(zhǔn)確性和靈敏性。

    3.3 腎臟毒性

    腎臟毒性常由多種治療藥物和環(huán)境污染物暴露引起,但是導(dǎo)致腎臟毒性的復(fù)雜分子和病理生理機(jī)制仍然不清楚,主要是由于腎臟損傷的生物標(biāo)志物在敏感性和特異性方面存在不足[56]。近年來,利用代謝組學(xué)對化學(xué)品的腎臟毒性進(jìn)行研究的報(bào)道越來越多。

    在已知煙酸受體-SCH900424可以引起小鼠腎臟損傷的情況下,Zgoda等[57]通過GC-MS、LC-MS分析內(nèi)源代謝物含量的變化發(fā)現(xiàn),血清和腦中的3-硫酸吲哚是較為靈敏的生物標(biāo)記物,它可以指示SCH900424引起的腎臟毒性情況。Ranninger等[58]利用人類腎臟近管上皮細(xì)胞RPTEC/TERT1進(jìn)行暴露實(shí)驗(yàn),通過LC-MS分析非靶標(biāo)代謝物的變化情況,來探究異環(huán)磷酰胺代謝物——氯乙醛的腎臟毒性。研究結(jié)果表明,氯乙醛高濃度暴露(35 μmol·L-1)下主要干擾了腎臟細(xì)胞中谷胱甘肽和氧化應(yīng)激相關(guān)的代謝物,進(jìn)一步通過轉(zhuǎn)錄組和蛋白組驗(yàn)證了代謝組學(xué)技術(shù)的可靠性。1,4-二氧己烷在環(huán)境和生物樣品中被廣泛檢測到,具有潛在的腎臟毒性。Qiu等[59]結(jié)合腎臟轉(zhuǎn)錄組和尿液代謝組分析揭示了1,4-二氧己烷對大鼠腎臟的毒性作用機(jī)理。研究表明,低濃度(0.5 mg·L-1)暴露對腎臟中的信號通路產(chǎn)生顯著影響,基于NMR的代謝物分析顯示早期暴露主要影響了甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸的代謝通路而長期暴露使?;撬釢舛蕊@著減少。

    3.4 神經(jīng)毒性的研究

    通?;瘜W(xué)品的神經(jīng)毒性一般通過受試生物的運(yùn)動(dòng)和感覺功能、反應(yīng)靈敏度、聯(lián)想學(xué)習(xí)能力、記憶和認(rèn)知能力等參數(shù)來表征[60],但是其在分子層面上的毒性作用機(jī)理還處于空白階段。大腦中央神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝物對化學(xué)品的神經(jīng)毒性作用十分敏感[61],所以,研究化學(xué)品暴露后對神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝物的影響將有望揭示其神經(jīng)毒性作用通路和致毒機(jī)理。

    丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性,但是其對神經(jīng)系統(tǒng)的干擾機(jī)制尚不清楚。Faria等[62]研究了0.75 mmol·L-1丙烯酰胺暴露3 d后對斑馬魚神經(jīng)系統(tǒng)的作用機(jī)制,在行為水平上,丙烯酰胺暴露后斑馬魚表現(xiàn)出抑郁型與焦慮型并存的行為狀態(tài);在轉(zhuǎn)錄水平上,丙烯酰胺誘導(dǎo)相關(guān)再生基因的下調(diào),少突膠質(zhì)細(xì)胞和反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物上調(diào),也改變了參與突觸前囊泡周期基因的表達(dá);在代謝水平上,基于液相-三重四級桿質(zhì)譜(LC-MS-MS)平臺檢測了斑馬魚腦中38種神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)的變化情況,其中,多巴胺前體苯丙氨酸和血清素代謝物5-HIAA的變化與焦慮癥的行為相一致,說明丙烯酰胺通過干擾斑馬魚腦中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)對其造成了神經(jīng)毒性。

    短裸甲藻毒素(PbTxs)具有神經(jīng)毒性,Yau等[63]用丹氯衍生法在LC-MS-MS上測定了青鳉魚43種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)遞質(zhì)和代謝物的變化情況,來揭示PbTxs對青鳉魚神經(jīng)系統(tǒng)的干擾機(jī)制。研究表明,與電壓鈉離子通路相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)和代謝物、N-甲基-D-天冬氨酸受體、膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)與PbTxs的暴露顯著相關(guān)。

    苯并芘作為一種常見的環(huán)境污染物被認(rèn)為對哺乳類動(dòng)物具有的神經(jīng)毒性,Wang等[64]將2 mg·kg-1bw·d-1苯并芘染毒SD大鼠7周,通過表觀遺傳學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),苯并芘可以影響大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力,利用GC-MS分析大腦海馬體代謝物變化情況,發(fā)現(xiàn)苯并芘主要干擾了酪氨酸代謝通路,為深入研究苯并芘對大鼠神經(jīng)毒性的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

    Zeng等[65]利用毛細(xì)管電泳-飛行時(shí)間質(zhì)譜(CE-TOF/MS)研究了不同濃度(0、1、10和100 mg·kg-1bw)雙酚A(BPA)對SD大鼠尿液代謝物的干擾,42種內(nèi)源代謝物發(fā)生了變化,其中,神經(jīng)遞質(zhì)(谷氨酸、γ-氨基丁酸和去腎上腺素)以及神經(jīng)傳遞相關(guān)的代謝物(酪氨酸、組胺、結(jié)氨酸和牛磺酸)在BPA低劑量暴露(<50 mg·kg-1)時(shí)發(fā)生顯著改變,表明環(huán)境濃度下BPA具有神經(jīng)毒性作用。

    4 代謝組學(xué)用于評價(jià)化學(xué)品毒性的前景展望(The prospect of metabolomics in chemical risk assessment)

    雖然,很多學(xué)者堅(jiān)信代謝組學(xué)技術(shù)在化學(xué)品風(fēng)險(xiǎn)評估中的有利地位,代謝組學(xué)技術(shù)仍然存在著一些挑戰(zhàn)。利用代謝組學(xué)評價(jià)化學(xué)品毒性,目前面臨的主要問題有以下幾點(diǎn):

    (1)從復(fù)雜的代謝譜中識別出哪些是對生命體的健康有害的生物標(biāo)記物,哪些代謝物的波動(dòng)只是對穩(wěn)態(tài)的短暫適應(yīng)或變異[66]。

    (2)雖然越來越多的數(shù)據(jù)表明,代謝組學(xué)將從根本上提高我們從個(gè)體水平對不良結(jié)果進(jìn)行的分子預(yù)測[67],但是目前很難將個(gè)體水平的結(jié)果外推到種群或者整個(gè)生態(tài)系統(tǒng)。主要原因是模式生態(tài)系統(tǒng)尚未建立,所以如果能夠推進(jìn)模式生態(tài)系統(tǒng)的建立則將有機(jī)會(huì)通過組學(xué)技術(shù)來評價(jià)化學(xué)品對整個(gè)生態(tài)系統(tǒng)的干擾機(jī)制。

    (3)代謝組學(xué)在毒理學(xué)評價(jià)與管理中應(yīng)用較少,這與較少的案例分析,培訓(xùn)機(jī)會(huì)缺失以及分析和計(jì)算工具有限有關(guān),然而最重要的原因還是缺少標(biāo)準(zhǔn)的評價(jià)方法,包括代謝組數(shù)據(jù)庫,實(shí)驗(yàn)方法的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化,檢測終點(diǎn)的量化和報(bào)告格式等方面,都需要進(jìn)一步的發(fā)展。

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