2019年遼寧省生豬屠宰企業(yè)非洲豬瘟病毒檢測(cè)能力比對(duì)

蘭德松，崔基賢，周 維，孫世宇，顧貴波，李 利

（1.遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，遼寧沈陽(yáng) 110164；2.營(yíng)口市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，遼寧營(yíng)口 115003）

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)是評(píng)價(jià)和提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力及管理水平的重要手段[1-2]。自2010年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部實(shí)施獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室考核工作以來(lái)，作為加強(qiáng)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室管理的主要抓手[3]，每年國(guó)家、省及部分市級(jí)獸醫(yī)主管部門均組織實(shí)施，在促進(jìn)各級(jí)實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化管理和檢測(cè)能力提升中發(fā)揮了重要作用[1-8]。

2019年4月，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部制定了生豬屠宰企業(yè)非洲豬瘟自檢制度，規(guī)定生豬屠宰企業(yè)必須建立實(shí)驗(yàn)室，具備非洲豬瘟病毒核酸快速檢測(cè)能力方可開展生豬屠宰。按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部的要求，遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心于2019年11月組織開展了全省334家生豬屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測(cè)能力比對(duì)，326家生豬屠宰企業(yè)在規(guī)定時(shí)限內(nèi)完成檢測(cè)并上報(bào)了檢測(cè)結(jié)果。通過(guò)比對(duì)，首次較為客觀地檢驗(yàn)和評(píng)價(jià)了遼寧省生豬屠宰企業(yè)非洲豬瘟病毒檢測(cè)能力水平，及時(shí)發(fā)現(xiàn)存在的主要問(wèn)題，為政府部門優(yōu)化政策措施，督促生豬屠宰企業(yè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力提升提供支持。

1 材料和方法

1.1 比對(duì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)

遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心組織全省334家屠宰企業(yè)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開展非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)比對(duì)試驗(yàn)。比對(duì)方法為熒光PCR快速檢測(cè)方法。標(biāo)準(zhǔn)樣由中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心非洲豬瘟國(guó)家參考實(shí)驗(yàn)室提供。遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)盲樣的制備、標(biāo)定，盲樣序號(hào)隨機(jī)排列后分組。每組5份盲樣，采取部分隨機(jī)組合的方法分配陰、陽(yáng)性樣品，保證每組有1～3份陽(yáng)性。每組盲樣獨(dú)立包裝，并貼上密封條，加蓋騎縫章。盲樣制備后，立即置于-20 ℃條件保存。

省內(nèi)各級(jí)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局統(tǒng)一到遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場(chǎng)領(lǐng)取本轄區(qū)內(nèi)屠宰企業(yè)盲樣，冷藏運(yùn)輸，要求當(dāng)日發(fā)放到相關(guān)屠宰企業(yè)實(shí)驗(yàn)室。每個(gè)參加比對(duì)的實(shí)驗(yàn)室領(lǐng)取1組盲樣。檢測(cè)試劑由企業(yè)自備，但必須使用農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)的或經(jīng)中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心評(píng)價(jià)后公布的診斷試劑。檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)參照試劑盒說(shuō)明書。各屠宰企業(yè)領(lǐng)取樣品次日必須完成檢測(cè)，并于完成檢測(cè)后次日將檢測(cè)原始記錄、檢測(cè)圖譜、結(jié)果報(bào)告單等材料上報(bào)。

1.2 結(jié)果統(tǒng)計(jì)

生豬屠宰企業(yè)實(shí)驗(yàn)室領(lǐng)取的5份盲樣檢測(cè)結(jié)果均與遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)定結(jié)果一致，判為比對(duì)結(jié)果合格；有1份以上（含1份）盲樣檢測(cè)結(jié)果與遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)定結(jié)果不一致，判為比對(duì)結(jié)果不合格。用SPSS statistics25軟件，對(duì)相關(guān)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 比對(duì)結(jié)果

2.1 總體結(jié)果

生豬屠宰企業(yè)在規(guī)定時(shí)限內(nèi)提交結(jié)果的有326個(gè)，其中252個(gè)比對(duì)結(jié)果完全符合，實(shí)驗(yàn)室符合率77.3%。其余74個(gè)分別存在1～4份樣品檢測(cè)結(jié)果不符合情況，樣品符合率為63.24%（234/370），其中，1份結(jié)果不符合的實(shí)驗(yàn)室有30個(gè)，2份不符合的29個(gè)，3份不符合的12個(gè)，4份不符合的3個(gè)。比對(duì)試驗(yàn)共1 630份樣品，結(jié)果符合的1 494份，樣品符合率為91.66%。統(tǒng)計(jì)學(xué)Kappa一致性檢驗(yàn)結(jié)果表明，比對(duì)結(jié)果符合實(shí)驗(yàn)室的樣品符合率明顯高于比對(duì)不符合實(shí)驗(yàn)室的樣品符合率，且兩者之間的一致性較差（Kappa＜0.4）。

2.2 不同規(guī)模類型生豬屠宰企業(yè)比對(duì)結(jié)果

對(duì)上報(bào)檢測(cè)結(jié)果的326家生豬屠宰企業(yè)按規(guī)模進(jìn)行了分類統(tǒng)計(jì)，其中A類（指屠宰量相對(duì)較大，通常要求年屠宰量達(dá)15萬(wàn)頭、屠宰產(chǎn)品可在全國(guó)范圍內(nèi)流通）屠宰企業(yè)72家、B類（指屠宰量較小、屠宰產(chǎn)品僅限省內(nèi)流通）屠宰企業(yè)254家，A類和B類屠宰企業(yè)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果合格率分別為88.9%和74.0%（表1）。統(tǒng)計(jì)學(xué)卡方檢驗(yàn)結(jié)果表明，A類屠宰企業(yè)的檢測(cè)合格率明顯高于B類的，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 遼寧省不同類型生豬屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測(cè)能力比對(duì)結(jié)果

3 討論

3.1 比對(duì)總體情況分析

農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公布的遼寧省生豬屠宰企業(yè)共334家，有326家參加本次比對(duì)試驗(yàn)，占比97.6%；比對(duì)結(jié)果全部符合的實(shí)驗(yàn)室占比77.3%，表明遼寧省生豬屠宰企業(yè)整體檢測(cè)水平有待提高。比對(duì)試驗(yàn)結(jié)束后，由當(dāng)?shù)孬F醫(yī)主管部門責(zé)令比對(duì)結(jié)果不符合的74家及其他8家未上報(bào)檢測(cè)結(jié)果的生豬屠宰企業(yè)立即停產(chǎn)整頓。通過(guò)此次比對(duì)試驗(yàn)，促進(jìn)了國(guó)家落實(shí)生豬屠宰企業(yè)自行開展非洲豬瘟檢測(cè)政策的落實(shí)。降低了屠宰環(huán)節(jié)傳播非洲豬瘟病毒的風(fēng)險(xiǎn)。

3.2 不同類型屠宰企業(yè)比對(duì)結(jié)果的影響因素

從不同規(guī)模類型的生豬屠宰企業(yè)比對(duì)結(jié)果看，A類生豬屠宰企業(yè)符合率要高于B類。經(jīng)初步調(diào)查了解及現(xiàn)場(chǎng)檢查情況看，遼寧省A類生豬屠宰企業(yè)自建的實(shí)驗(yàn)室軟、硬件條件普遍較B類好，盡管遼寧省出臺(tái)了相關(guān)文件，對(duì)生豬屠宰企業(yè)自建非洲豬瘟檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的基本條件作了具體要求，對(duì)實(shí)驗(yàn)室功能區(qū)設(shè)置、各功能區(qū)面積、儀器設(shè)備配置、檢測(cè)人員、檢測(cè)及記錄規(guī)范、廢棄物無(wú)害化處理等作了明確規(guī)定，提出了最低應(yīng)滿足的條件，但屠宰企業(yè)在實(shí)驗(yàn)室功能區(qū)面積達(dá)標(biāo)、儀器設(shè)備配置、檢測(cè)人員配備與培訓(xùn)等方面良莠不齊。

受當(dāng)前生豬出欄量減少的影響，部分A類和B類屠宰企業(yè)（屠宰點(diǎn)），由于日屠宰量小、利潤(rùn)低，他們?yōu)榻档统杀?，采?gòu)價(jià)格較低的國(guó)產(chǎn)熒光PCR儀等儀器設(shè)備。部分屠宰企業(yè)安裝設(shè)備后，未進(jìn)行性能驗(yàn)證，5家屠宰企業(yè)（A類2家、B類3家）在本次比對(duì)試驗(yàn)過(guò)程中熒光PCR出現(xiàn)故障未能上報(bào)檢測(cè)結(jié)果；從調(diào)查情況看，遼寧省生豬屠宰企業(yè)聘用的檢測(cè)人員具有獸醫(yī)中專以上學(xué)歷的比例，A類較B類高，但整體檢測(cè)人員專業(yè)化程度不高，部分企業(yè)甚至有場(chǎng)內(nèi)非獸醫(yī)專業(yè)人員兼任的情況，未經(jīng)過(guò)正規(guī)的核酸檢測(cè)技術(shù)相關(guān)培訓(xùn)。由于平時(shí)檢測(cè)量小，缺少檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，在Ct值接近臨界值等情況出現(xiàn)時(shí)，容易出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果誤判，造成假陽(yáng)性或假陰性的檢測(cè)結(jié)果。

3.3 比對(duì)試驗(yàn)中的試劑因素

參加比對(duì)的326家生豬屠宰企業(yè)共選用了16個(gè)生產(chǎn)廠家的試劑盒，均在中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心公布名單之中。其中的7種試劑，共31家企業(yè)采用，比對(duì)結(jié)果均合格；另外9種試劑，共295家企業(yè)采用，比對(duì)結(jié)果符合率在33.33%至94.74%不等。有的試劑被73家企業(yè)采用，而有的僅3家采用，由于差異較大，加上不同試劑盒操作規(guī)程的差異，造成核酸提取效率的差異。此外，檢測(cè)人員的專業(yè)素養(yǎng)的差異，如能否嚴(yán)格遵守檢測(cè)操作規(guī)程、結(jié)果判讀能力存在差異等，直接影響檢測(cè)結(jié)果。

3.4 屠宰企業(yè)實(shí)驗(yàn)室管理因素

從現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查情況看，遼寧省屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室均為2019年以來(lái)新建或改建，目前均未建立實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系和生物安全管理體系，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果質(zhì)控難以保障，從本次比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果看，比對(duì)不合格的屠宰企業(yè)普遍存在檢測(cè)假陽(yáng)性的結(jié)果，表明部分實(shí)驗(yàn)室存在ASFV核酸污染的情況，屠宰企業(yè)實(shí)驗(yàn)室生物安全隱患不容忽視。

4 有關(guān)思考

4.1 屠宰企業(yè)要切實(shí)加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化建設(shè)和管理

屠宰企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格按照畜牧獸醫(yī)主管部門出臺(tái)的實(shí)驗(yàn)室建設(shè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，切實(shí)加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室軟、硬件建設(shè)，并逐步建立適合自身的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系和生物安全管理體系，提升實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化管理水平，強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的生物安全防護(hù)能力和意識(shí)，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠、環(huán)境和人員生物安全；加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員非洲豬瘟檢測(cè)能力培訓(xùn)學(xué)習(xí)，促進(jìn)檢測(cè)人員扎實(shí)掌握熒光PCR快速檢測(cè)方法的基因原理、標(biāo)準(zhǔn)操作、結(jié)果判讀等相關(guān)知識(shí)技能，如有條件建議聘用中專學(xué)歷以上獸醫(yī)相關(guān)專業(yè)技術(shù)人員，提升檢測(cè)水平；檢測(cè)儀器設(shè)備采購(gòu)后必須經(jīng)過(guò)性能驗(yàn)證，尤其是PCR檢測(cè)儀、生物安全柜等檢測(cè)關(guān)鍵設(shè)備和生物安全防護(hù)設(shè)備必須經(jīng)過(guò)驗(yàn)證合格后才能投入使用，PCR儀在使用過(guò)程中要定期開展檢測(cè)效果驗(yàn)證，生物安全柜要定期進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)、高效濾膜應(yīng)定期更換，確保儀器始終滿足檢測(cè)要求和生物安全防護(hù)要求；檢測(cè)試劑必須采購(gòu)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部或中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心公布的合格試劑名單中的產(chǎn)品，并在規(guī)定保存條件下保存，在有效期內(nèi)規(guī)范使用，采購(gòu)的每批次試劑盒要進(jìn)行驗(yàn)證，確保符合檢測(cè)要求。

4.2 政府部門加強(qiáng)監(jiān)管和技術(shù)支撐

各級(jí)獸醫(yī)主管部門要加強(qiáng)對(duì)生豬屠宰企業(yè)的監(jiān)管，不符合檢測(cè)條件、不參加政府組織的比對(duì)試驗(yàn)或比對(duì)結(jié)果不合格的屠宰企業(yè)責(zé)令停業(yè)整改，整改合格后屠宰企業(yè)可再次申請(qǐng)參加比對(duì)試驗(yàn)，比對(duì)合格后才允許屠宰企業(yè)恢復(fù)生產(chǎn)；各級(jí)疫控部門也可結(jié)合系統(tǒng)內(nèi)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室培訓(xùn)工作組織對(duì)轄區(qū)內(nèi)生豬屠宰企業(yè)開展檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)，并定期或不定期開展檢測(cè)情況抽查，促進(jìn)生豬屠宰企業(yè)檢測(cè)能力的提升。

4.3 政府部門建立長(zhǎng)效獎(jiǎng)懲機(jī)制

政府部門應(yīng)考慮建立對(duì)生豬屠宰企業(yè)的長(zhǎng)效獎(jiǎng)懲機(jī)制，制定生豬屠宰企業(yè)評(píng)價(jià)體系，對(duì)持續(xù)落實(shí)各級(jí)政府主管部門關(guān)于生豬屠宰企業(yè)非洲豬瘟自檢工作各項(xiàng)政策到位、實(shí)驗(yàn)室軟、硬件建設(shè)（實(shí)驗(yàn)室建設(shè)、儀器設(shè)備配置、人員資質(zhì)和檢測(cè)能力等）和管理水平較高、嚴(yán)格按照政策規(guī)定規(guī)范開展檢測(cè)、如實(shí)上報(bào)檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果的企業(yè)，給予適當(dāng)政策傾斜和資金扶持；對(duì)評(píng)價(jià)不合格的屠宰企業(yè)堅(jiān)決給予責(zé)令停業(yè)整改、嚴(yán)重者取消屠宰資質(zhì)等懲罰措施，確保生豬屠宰企業(yè)自檢制度發(fā)揮防控非瘟疫情的重要保壘作用。

4.4 屠宰企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)行業(yè)自律

屠宰企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格行業(yè)自律，自覺遵守相關(guān)法律、法規(guī)和規(guī)章制度，嚴(yán)格按照規(guī)定開展實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、記錄填寫和保存、樣品保存、廢棄物無(wú)害化處理等各項(xiàng)工作，真實(shí)出具檢測(cè)結(jié)果報(bào)告，及時(shí)上報(bào)陽(yáng)性結(jié)果，真正發(fā)揮出非洲豬瘟疫情發(fā)現(xiàn)和防控的前哨作用。