湖南省新化縣高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)羊布魯氏菌病橫斷面研究及活羊流通網(wǎng)絡(luò)調(diào)查

譚慶輝，丁朝陽(yáng)，曹 琰，楊志峰，熊德友，沈朝建，李 印

（1.婁底市動(dòng)物疫病預(yù)防控中心，湖南婁底 417000；2.新化縣畜牧水產(chǎn)局，湖南新化 417600；3.中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032）

布魯氏菌?。╞rucellosis，以下簡(jiǎn)稱布?。┦怯刹剪斒暇鷮偌?xì)菌引起多種動(dòng)物的急性或慢性人獸共患傳染病[1]。本病流行廣泛，幾乎遍布世界各地，共有170多個(gè)國(guó)家和地區(qū)存在布病流行，每年造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)數(shù)十億美元[2]。目前，除澳門和臺(tái)灣疫情未知外，我國(guó)其他地區(qū)均已報(bào)告發(fā)現(xiàn)布病病例[3]，都有不同程度的布病流行，給我國(guó)畜牧業(yè)和人類健康帶來(lái)了嚴(yán)重危害[4]。為此，在《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》[5]中，我國(guó)將布病列為優(yōu)先防治的動(dòng)物疫病病種。按照規(guī)劃要求，到2020年湖南省需達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。按照《國(guó)家布魯氏菌病防治計(jì)劃（2016—2020年）》，湖南省為二類地區(qū)，禁止免疫接種，應(yīng)采取以監(jiān)測(cè)凈化為主的防控策略[6]。

新化縣隸屬湖南省婁底市，位于湖南中部，資江中游，森林覆蓋率達(dá)54.9%，境內(nèi)多為山丘盆地，植被豐富，適宜山羊養(yǎng)殖。近年來(lái)，受飲食習(xí)慣和消費(fèi)水平影響，當(dāng)?shù)匮蛉庀M(fèi)量逐年攀升，羊養(yǎng)殖數(shù)量逐年增加。截至2017年7月，新化縣共有816戶養(yǎng)羊場(chǎng)戶，存欄山羊36 783只。2015—2017年，該縣出欄肉羊分別為6.3、7.5、8.2萬(wàn)只。

2015年前，該縣為布病清凈區(qū)。自2015年11月發(fā)現(xiàn)首例人間病例以來(lái)[7]，3年內(nèi)該縣人間病例增加到14例，占全市的58.3%（14/24）；動(dòng)物布病疫點(diǎn)增加到5個(gè)，占全市的45.5%（5/11）。疫點(diǎn)均在縣城周邊鄉(xiāng)鎮(zhèn)，人間病例中92.9%（13/14）發(fā)生在養(yǎng)羊場(chǎng)戶，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室鑒定均為羊種3型布魯氏菌。

此次研究以新化縣10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)現(xiàn)存欄羊15只以上養(yǎng)殖場(chǎng)戶為研究對(duì)象，重點(diǎn)調(diào)查出現(xiàn)動(dòng)物布病疫情和人間病例鄉(xiāng)鎮(zhèn)的養(yǎng)羊場(chǎng)戶，以及活羊販運(yùn)經(jīng)紀(jì)人和經(jīng)銷商等從業(yè)人員，采用估計(jì)流行率方法，按照置信水平95%、預(yù)期流行率5%，確定抽樣場(chǎng)戶數(shù)，以期掌握羊群布病的群體流行率，了解養(yǎng)羊場(chǎng)戶、販運(yùn)戶和經(jīng)銷商對(duì)布病防控知識(shí)的知曉情況以及羊販運(yùn)戶和經(jīng)銷商的一般經(jīng)濟(jì)行為，尋找養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中導(dǎo)致布魯氏菌感染的風(fēng)險(xiǎn)因素，從而為新化縣布病防控提供依據(jù)，同時(shí)也為全國(guó)布病防控積累經(jīng)驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)域和研究對(duì)象

重點(diǎn)調(diào)查新化縣出現(xiàn)動(dòng)物布病疫情和人間病例的5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（科頭、桑梓、上梅、石沖口、維山），以及縣城周圍的5個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（曹家、西河、游家、上渡辦事處、經(jīng)濟(jì)開(kāi)發(fā)區(qū)）。研究單元是上述10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)內(nèi)現(xiàn)存欄羊15只以上的養(yǎng)殖場(chǎng)戶，共有382戶，存欄山羊16 589只（表1）。

表1 研究區(qū)域內(nèi)羊養(yǎng)殖場(chǎng)戶數(shù)量和存欄情況統(tǒng)計(jì)

1.2 抽樣策略和樣本量

采用兩階段隨機(jī)抽樣策略[8-10]：第一階段，以場(chǎng)戶為單元，確定抽樣場(chǎng)戶數(shù)。以10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)內(nèi)所有現(xiàn)存欄羊15只以上養(yǎng)殖場(chǎng)戶為抽樣框，簡(jiǎn)單隨機(jī)抽取場(chǎng)戶；采用估計(jì)流行率方法，按照置信水平95%、預(yù)期場(chǎng)戶流行率5%、可接受誤差3%，用Epi Info 7.2軟件[11]，計(jì)算需要抽取的養(yǎng)殖場(chǎng)戶數(shù)為132戶（圖1）。第二階段，確定場(chǎng)內(nèi)羊只個(gè)體抽樣數(shù)。場(chǎng)內(nèi)個(gè)體抽樣數(shù)量依其規(guī)模而定，以發(fā)現(xiàn)疫病為目的，按照置信水平95%、預(yù)期個(gè)體流行率50%，用Epi Info 7.2軟件計(jì)算抽取的羊只數(shù)量。現(xiàn)場(chǎng)抽樣時(shí)，優(yōu)先抽取種公羊、有流產(chǎn)史母羊、年齡超過(guò)6個(gè)月的羊以及外地新引進(jìn)的羊，每場(chǎng)最低采樣數(shù)不低于15只。

圖1 抽樣場(chǎng)戶分布

1.3 檢測(cè)方法

2017年10—11月，根據(jù)上述抽樣策略采集羊全血，每只2 mL。使用虎紅平板凝集試驗(yàn)（GB/T 18646）進(jìn)行初篩，對(duì)初篩陽(yáng)性樣品使用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)核。經(jīng)查閱資料[8]，虎紅平板凝集和cELISA垂直試驗(yàn)的敏感性為89%，特異性為97%。

1.4 病例定義

群內(nèi)至少有1只羊經(jīng)虎紅平板凝集和cELISA垂直試驗(yàn)檢測(cè)為陽(yáng)性的，定義為布病陽(yáng)性場(chǎng)戶；經(jīng)虎紅平板凝集和cELISA垂直試驗(yàn)檢測(cè)為陰性的，定義為陰性場(chǎng)戶。

1.5 問(wèn)卷調(diào)查

設(shè)計(jì)“養(yǎng)羊場(chǎng)戶布魯氏菌病流行病學(xué)調(diào)查表”。第一部分為養(yǎng)殖管理情況調(diào)查，圍繞養(yǎng)殖場(chǎng)基本信息和綜合防控兩大方面，調(diào)查23個(gè)因素；第二部分為養(yǎng)羊從業(yè)人群布病防控知曉情況調(diào)查，從“是否知道布病是人獸共患病、人感染后的臨床表現(xiàn)”等12個(gè)因素，對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)戶、販運(yùn)戶和經(jīng)銷商進(jìn)行調(diào)查；第三部分為羊販運(yùn)戶和經(jīng)銷商一般經(jīng)濟(jì)行為調(diào)查，圍繞進(jìn)貨來(lái)源、頻次等9個(gè)因素開(kāi)展調(diào)查。養(yǎng)殖場(chǎng)戶問(wèn)卷調(diào)查，按照采樣場(chǎng)戶抽樣策略平行進(jìn)行；販運(yùn)戶和經(jīng)銷商，采用便利抽樣方法進(jìn)行。

1.6 數(shù)據(jù)分析

對(duì)采集的血清樣品通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，獲得10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的場(chǎng)群血清流行率。將問(wèn)卷調(diào)查數(shù)據(jù)匯總錄入Excel 2010軟件，對(duì)養(yǎng)殖管理情況和養(yǎng)羊從業(yè)人群布病防控知曉情況調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 羊群血清流行率

共采集132戶養(yǎng)羊場(chǎng)戶的3 281份血清樣品。經(jīng)虎紅平板凝集試驗(yàn)初篩，檢出4份陽(yáng)性樣品，對(duì)4份陽(yáng)性樣品用cELISA試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)核，結(jié)果全為陰性。假設(shè)100%的群體特異性和敏感性，以epiR軟件包在R語(yǔ)言環(huán)境中計(jì)算，得出場(chǎng)群布病血清流行率為0（95%CI：0～2.8%）。

2.2 問(wèn)卷調(diào)查

2.2.1 養(yǎng)殖基本情況 對(duì)每個(gè)采樣場(chǎng)戶發(fā)放問(wèn)卷調(diào)查表132份，回收有效問(wèn)卷129份，分別對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)年限、飼養(yǎng)規(guī)模、養(yǎng)殖類型等信息進(jìn)行調(diào)查。結(jié)果顯示：抽樣場(chǎng)戶中，93.8%的為自繁自養(yǎng)，飼養(yǎng)年限為2～9年的占79.8%；戶主年齡以中老年為主，30歲以上的占77.5%；養(yǎng)殖方式以放牧為主，且單獨(dú)放牧比例較高，約為82.9%；種公羊來(lái)源方面，自留種公羊占62.0%、交換占33.3%、外購(gòu)占4.7%；74.4%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶1年內(nèi)沒(méi)有羊群調(diào)入；33個(gè)有羊群調(diào)入史的場(chǎng)戶中，19個(gè)存在跨省調(diào)入，占57.6%；養(yǎng)殖場(chǎng)戶飼養(yǎng)羊只主要在本縣銷售的占69.8%，以自宰自銷為主的占57.4%（表2）。

2.2.2 養(yǎng)殖場(chǎng)生物安全防護(hù) 對(duì)129份問(wèn)卷調(diào)查中涉及的生物安全措施等進(jìn)行調(diào)查統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)38.8%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶附近1 km范圍內(nèi)有其他牛羊養(yǎng)殖戶，47.3%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶附近有狗、貓活動(dòng)，82.9%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶員工進(jìn)入羊舍無(wú)換鞋、換工作服工序，69.0%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶羊舍與生活區(qū)之間無(wú)有效隔離屏障，43.4%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶無(wú)專用產(chǎn)羔場(chǎng)地，59.7%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶在母羊產(chǎn)羔后沒(méi)有對(duì)場(chǎng)地進(jìn)行清洗消毒，48.8%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶對(duì)產(chǎn)后胎衣沒(méi)有采取深埋等無(wú)害化處理措施，9.3%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶在過(guò)去1年內(nèi)有流產(chǎn)情況；關(guān)于流產(chǎn)物及流產(chǎn)母羊的處理，44.2%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶對(duì)流產(chǎn)物沒(méi)有進(jìn)行無(wú)害化處理，39.5%的對(duì)流產(chǎn)場(chǎng)地沒(méi)有進(jìn)行專門消毒，還有少部分養(yǎng)殖場(chǎng)戶主還兼職販羊、屠宰銷售等工作（表3）。

表2 調(diào)查養(yǎng)殖場(chǎng)戶基本養(yǎng)殖情況統(tǒng)計(jì)

2.2.3 布病知識(shí)知曉情況 在152份有效問(wèn)卷調(diào)查表中，養(yǎng)殖場(chǎng)戶129份、屠宰零售商17份、販運(yùn)經(jīng)紀(jì)人6份。對(duì)于“是否聽(tīng)說(shuō)過(guò)布病”等12個(gè)基礎(chǔ)知識(shí)，養(yǎng)殖場(chǎng)戶的總體知曉率為80.6%，屠宰零售商為15.2%，販運(yùn)經(jīng)紀(jì)人為25.0%。具體結(jié)果見(jiàn)表4。

2.2.4 經(jīng)銷商行為 對(duì)縣城周圍17戶活羊及羊肉經(jīng)銷商的調(diào)查顯示：平均年齡在45歲左右，初中以上學(xué)歷8人，占47.1%，平均從業(yè)時(shí)間為14.5年；經(jīng)營(yíng)種類以屠宰零售居多，占88.2%，有2個(gè)戶存在從北方地區(qū)購(gòu)進(jìn)冰鮮羊肉售賣的情況。在屠宰零售商中，29.4%的商戶存在跨省進(jìn)貨，70.6%的從養(yǎng)殖場(chǎng)直接購(gòu)進(jìn)羊只；進(jìn)羊頻次以每月2～5次為主，占58.8%；每次進(jìn)羊數(shù)量一般為10～49只，平均每月銷售15只，冬春季節(jié)銷售量較大，主要銷售給居民和餐館飯店（表5）。

表3 養(yǎng)殖場(chǎng)戶生物安全防護(hù)調(diào)查統(tǒng)計(jì) 單位：戶

2.2.5 經(jīng)紀(jì)人行為 調(diào)查的6位販運(yùn)人員年齡均在30歲以上，文化程度低，從業(yè)時(shí)間均較長(zhǎng)，平均為9.3年；有4戶販運(yùn)戶為跨省調(diào)運(yùn)，通常一次從多個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)羊，統(tǒng)一裝車，平均每次100只以上，到達(dá)目的地后再分銷給當(dāng)?shù)乜蛻?；主要銷售對(duì)象為屠宰零售商，也向養(yǎng)殖場(chǎng)戶銷售活羊（表6）。

2.3 活羊流通交易情況

對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)戶、販運(yùn)經(jīng)紀(jì)人和屠宰零售商關(guān)于活羊的流通情況進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)經(jīng)紀(jì)人在活羊流通中起著極重要的作用。養(yǎng)殖場(chǎng)戶和屠宰經(jīng)銷商確定所需活羊數(shù)量后，由經(jīng)紀(jì)人負(fù)責(zé)聯(lián)系貨源（主要為省外北方牧區(qū)和活羊交易市場(chǎng)），成年羊分銷給屠宰經(jīng)銷商，種羊和小羊分銷給養(yǎng)殖場(chǎng)戶。養(yǎng)殖場(chǎng)戶的育成羊主要銷給當(dāng)?shù)赝涝咨毯途用?，基本無(wú)調(diào)出情況。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，部分養(yǎng)殖場(chǎng)戶主也充當(dāng)經(jīng)紀(jì)人角色。活羊的跨省調(diào)運(yùn)存在明顯的季節(jié)性，冬季調(diào)運(yùn)最頻繁，調(diào)入羊主要進(jìn)入屠宰環(huán)節(jié)。具體流通情況見(jiàn)圖2。

3 討論

本研究應(yīng)用流行病學(xué)法研究方法，完成了新化縣高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)羊布病檢測(cè)凈化工作的本底調(diào)查?；陲L(fēng)險(xiǎn)的抽樣方法、估計(jì)流行率的抽樣策略，以最少的樣本量檢測(cè)羊群中的布病感染抗體。結(jié)果顯示，新化縣高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)抽樣羊群中陽(yáng)性病例為0。用虎紅平板凝集試驗(yàn)初篩出4份陽(yáng)性樣品，但cELISA試驗(yàn)復(fù)核均為陰性，且經(jīng)調(diào)查疑似陽(yáng)性場(chǎng)戶羊群表現(xiàn)正常，近3年無(wú)調(diào)入情況，不符合布病感染場(chǎng)流行病學(xué)特征，說(shuō)明虎紅平板凝集試驗(yàn)敏感性高，但特異性不高，易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果?？紤]到新化縣布病流行性率低，為盡可能發(fā)現(xiàn)疫病，故在樣品檢測(cè)方面選擇敏感性高的方法。

表4 布病知識(shí)知曉情況調(diào)查統(tǒng)計(jì)

表5 經(jīng)銷商行為調(diào)查統(tǒng)計(jì)匯總

問(wèn)卷調(diào)查表明，新化縣羊養(yǎng)殖場(chǎng)戶以小規(guī)模自繁自養(yǎng)為主，一般放牧于自家附近山頭，出欄羊主要在縣內(nèi)流通，這在一定程度上阻止了布病的傳入和擴(kuò)散。但是養(yǎng)殖場(chǎng)戶在引種、場(chǎng)內(nèi)生物安全防護(hù)方面存在很大漏洞，部分養(yǎng)殖場(chǎng)戶的圈舍和生活區(qū)沒(méi)有有效隔離，在從事喂養(yǎng)、接生等高危行為時(shí)，采取“穿工作服”“戴手套”“換鞋”等個(gè)人防護(hù)措施的比例很低，甚至對(duì)接產(chǎn)、流產(chǎn)物徒手操作，沒(méi)有養(yǎng)成良好的衛(wèi)生消毒習(xí)慣。

在對(duì)布病知識(shí)知曉情況調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖場(chǎng)戶對(duì)布病知識(shí)知曉率較高，基本上能做到正確防護(hù)，但是屠宰零售商和販運(yùn)經(jīng)紀(jì)人的總體知曉率不足30%，甚至有部分從業(yè)人員對(duì)布病一無(wú)所知。通過(guò)走訪調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在2015年首次布病疫情發(fā)生后，當(dāng)?shù)匦竽辆旨哟罅藢?duì)養(yǎng)殖場(chǎng)戶的布病知識(shí)宣傳，每年春秋兩次集中免疫時(shí)，先對(duì)村級(jí)防疫員開(kāi)展專題培訓(xùn)，再由他們傳達(dá)到各養(yǎng)殖場(chǎng)戶，所以養(yǎng)殖場(chǎng)戶的總體知曉率比屠宰零售商和販運(yùn)經(jīng)紀(jì)人要高。但是養(yǎng)殖戶的自我防護(hù)措施不到位，防護(hù)意識(shí)依然較低。屠宰零售商和販運(yùn)經(jīng)紀(jì)人都是易接觸病原的高風(fēng)險(xiǎn)人群，建議對(duì)所有高風(fēng)險(xiǎn)人群繼續(xù)開(kāi)展布病相關(guān)的健康宣教和行為干預(yù)，提高職業(yè)人群預(yù)防布病的意識(shí)，培養(yǎng)其良好的職業(yè)行為和習(xí)慣。

對(duì)活羊調(diào)運(yùn)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，經(jīng)紀(jì)人和屠宰經(jīng)銷商從業(yè)時(shí)間均較長(zhǎng)，經(jīng)紀(jì)人進(jìn)羊渠道復(fù)雜，易受價(jià)格利益驅(qū)動(dòng)，主要從北方牧區(qū)和活羊交易市場(chǎng)購(gòu)進(jìn)。雖然購(gòu)買回來(lái)的大部分羊只進(jìn)入屠宰環(huán)節(jié)，但仍有部分羊只再次進(jìn)入養(yǎng)殖環(huán)節(jié)。羊群調(diào)運(yùn)存在明顯的季節(jié)性，冬季調(diào)運(yùn)頻繁。這一現(xiàn)象同當(dāng)?shù)夭疾∫咔榛景l(fā)生在冬春季節(jié)的特征很相似。建議加強(qiáng)對(duì)活羊流通領(lǐng)域的檢疫監(jiān)管，特別是冬季，對(duì)進(jìn)入養(yǎng)殖環(huán)節(jié)的羊，要做到逢進(jìn)必檢，杜絕病羊引入。

本研究主要調(diào)查的是存欄15只以上的養(yǎng)殖場(chǎng)戶，采用估計(jì)流行率方法，預(yù)設(shè)場(chǎng)群流行率5%，場(chǎng)戶內(nèi)個(gè)體預(yù)期流行率為50%。但實(shí)際上每個(gè)養(yǎng)羊場(chǎng)戶的群內(nèi)流行率不同，可能出現(xiàn)假陰性群的情況。采用基于風(fēng)險(xiǎn)的采樣策略，優(yōu)先抽取種公羊、有流產(chǎn)史母羊、年齡超過(guò)6個(gè)月的羊以及外地新引進(jìn)的羊，且采用虎紅平凝集和cELISA垂直試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，這樣可以有效提高群特異性，降低假陽(yáng)性率。本次研究沒(méi)有找到陽(yáng)性場(chǎng)，無(wú)法進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)因素分析；由于時(shí)間、人力、物力原因，本研究也沒(méi)有對(duì)新化縣所有鄉(xiāng)鎮(zhèn)進(jìn)行調(diào)查，經(jīng)紀(jì)人和屠宰經(jīng)銷商的樣本數(shù)量過(guò)少，部分問(wèn)卷填寫(xiě)不完整，導(dǎo)致數(shù)據(jù)有空白，影響了分析的有效性；在信息收集過(guò)程中，少部分調(diào)查者不愿意參與答題，對(duì)“種公羊來(lái)源”“羊羔出生地消毒”等問(wèn)題，存在極少部分無(wú)應(yīng)答偏倚。

4 結(jié)論

本研究應(yīng)用流行病學(xué)法研究方法，完成了新化縣高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)羊布病檢測(cè)凈化工作的本底調(diào)查，沒(méi)有檢出陽(yáng)性病例，表明凈化效果較好。這主要是因?yàn)樾禄h羊養(yǎng)殖以自繁自養(yǎng)的放牧飼養(yǎng)方式為主，出欄羊主要在縣內(nèi)流通，養(yǎng)殖場(chǎng)戶對(duì)布病知識(shí)知曉率較高。但部分養(yǎng)殖場(chǎng)戶生物安全防護(hù)措施不到位，經(jīng)紀(jì)人和屠宰經(jīng)銷商布病知曉率低，職業(yè)人群自我防護(hù)差，活羊調(diào)入以省外為主，因此存在較大的布病引入風(fēng)險(xiǎn)及人群感染風(fēng)險(xiǎn)。建議當(dāng)?shù)乩^續(xù)實(shí)行“監(jiān)測(cè)+撲殺”的防控策略，持續(xù)開(kāi)展布病相關(guān)的健康宣教和行為干預(yù)，尤其是針對(duì)屠宰經(jīng)銷商和經(jīng)紀(jì)人，同時(shí)加強(qiáng)對(duì)活羊流通領(lǐng)域的檢疫監(jiān)管，特別是冬季。