• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    大強度間歇運動對肥胖大鼠骨骼肌AMPK/PGC-1α通路的影響

    2020-04-02 02:45:02房華玉徐建方王曉靜李良孔喜良路瑛麗馮連世
    中國運動醫(yī)學雜志 2020年2期
    關(guān)鍵詞:腓腸肌附睪有氧

    房華玉 徐建方 王曉靜 李良 孔喜良 路瑛麗 馮連世

    1 國家體育總局體育科學研究所(北京100061)

    2 曲阜師范大學(山東曲阜 273165)

    由于體力活動的減少和/或不科學的飲食行為引起的肥胖及肥胖并發(fā)癥發(fā)生率急劇增加。大量研究已經(jīng)證明,長期有氧運動能夠改善健康和肥胖人群的體成分、心肺功能以及其它與健康相關(guān)的指標[1,2]。但長期單純有氧運動存在運動時間過長、運動過程單調(diào)等不足,導致運動的積極性下降,效果下降。隨著探討大強度間歇運動(high-intensity interval training,HIIT)對超重青少年[3]、老年人[4]以及慢病人員[5,6]的減脂效果及對健康影響研究的深入,越來越多的證據(jù)表明,HIIT能提高機體有氧能力[7,8]、減少腹部脂肪含量[9-11]、改善胰島素敏感性[6,12]以及久坐老年人的心血管功能和代謝能力[4]。HIIT能激活骨骼肌細胞自噬[13],抵抗增齡大鼠肌肉質(zhì)量丟失;影響骨骼肌超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase2,SOD2)活性水平,防止骨骼肌氧化損傷[14];促進衰老小鼠腓腸肌蛋白質(zhì)合成,引起肌力增長[15]。

    5'單磷酸腺苷激活蛋白激酶(adenosine 5'-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)是細胞內(nèi)能量變化的感受器[16],可通過啟動脂肪酸氧化和糖酵解等分解代謝途徑來增加ATP(adenosine triphosphate,三磷酸腺苷)的產(chǎn)生,同時亦可以降低脂肪酸和蛋白合成來減少ATP的消耗,其激活程度與運動強度和時間成正相關(guān),且受運動強度的影響較大[17]。骨骼肌中AMPK的活化能促進葡萄糖的攝取和脂肪酸的氧化[18]。過氧化物酶體增殖受體γ輔助激活因子α(peroxisome proliferators-activated receptor γ co-activator 1 alpha,PGC-1α)作為AMPK的調(diào)控因子可通過調(diào)節(jié)機體適應性產(chǎn)熱、糖脂代謝、血糖平衡[19],參與線粒體生物合成,提高線粒體的呼吸與氧化能力[20,21],調(diào)節(jié)脂肪酸氧化,達到減肥目的。

    本研究通過建立肥胖大鼠模型,觀察HIIT和有氧運動2種不同運動方式對肥胖大鼠體重、腎周和附睪脂肪重量、脂體比、血脂,以及腓腸肌AMPK/PGC-1α mRNA和蛋白表達的影響,探討不同方式運動時AMPK/PGC-1α通路在減脂過程中的骨骼肌適應機制。

    1 材料與方法

    1.1 實驗對象、分組與訓練安排

    出生3 周的離乳雄性SD 大鼠,每籠5只,室溫21℃~23℃,濕度40%~60%,自然光照,自由飲食,高脂飼料喂養(yǎng)10周后,驗證肥胖模型。肥胖模型驗證標準[22]:①高脂飲食組大鼠體重超過普通飲食組20%以上;②高脂飲食組大鼠的Lee's指數(shù)顯著升高,Lee's指數(shù)=體重(g)1/3×1000/體長(cm)。

    肥胖模型驗證成功后,繼續(xù)高脂飼料分籠飼養(yǎng),選取30只肥胖大鼠隨機分3 組:安靜對照組(OC 組)、有氧運動組(OA 組)、大強度間歇運動組(HIIT 組),每組10只,1周跑臺適應性訓練。運動前測試VO2max,根據(jù)VO2max 確定相應跑速,第4 周結(jié)束后調(diào)整一次跑速。VO2max 測試采用動物氣體代謝分析儀(Oxymax Deluxe System,哥倫布斯,美國)進行;運動方案根據(jù)Leandro 等[23]的研究進行改良。高脂飼料喂養(yǎng),自由飲食。OC 組大鼠不運動;OA 組和HIIT 組均進行0 坡度跑臺訓練,干預總時間為8 周,5次/周。OA 組每天以60%~70%VO2max 速度運動60 min。HIIT 組先以70% VO2max 速度熱身后,再以90% VO2max、50%VO2max 速度交替訓練[24],最后以70% VO2max 速度進行恢復;跑速根據(jù)VO2max的測試結(jié)果確定,運動時間以與OA 組運動距離一致計算。訓練期間每周固定時間測量體重。

    1.2 取材

    最后一次運動后恢復24 h,按0.4 ml/100 g 體重腹腔注射10%水合三氯乙醛溶液麻醉,腹主動脈取血,離心取血清用于檢測血脂指標;取腎周和附睪脂肪稱重,計算脂體比=(腎周脂肪重量+附睪脂肪重量)/體重*100%;取右側(cè)腓腸肌迅速放入液氮中驟冷后-80℃超低溫冰箱保存,待測。

    1.3 試劑與儀器

    主要試劑:引物(BPI),DEPC(Sigma),氯仿、異丙醇、無水乙醇(上?;瘜W試劑公司),RT 試劑(TAKARA),熒光定量PCR 試劑(TAKARA),SYBR Green I(TAKARA),蛋白裂解液(北京普利萊),BCA蛋白定量試劑盒(Thermo),5XSDS 上樣緩沖液(上海生工),PVDF膜(Millipore公司),濾紙(Whatman公司),預染蛋白marker(Fermentas),HRP 二抗(Jackson),內(nèi)參一抗(GenScript),ECL 化學發(fā)光試劑(Perce),TC、TG、HDLC和LDL-C試劑盒。

    主要儀器:MULTISKAN MK3 全自動多功能酶標儀(Thermo,USA),F(xiàn)TC2000熒光定量PCR儀(Canada),高速離心機(上海安亭),玻璃勻漿器(寧波新芝DY89-1),分光光度儀(上海欣茂UV-7504),垂直板電泳轉(zhuǎn)移裝置(上海天能),電泳儀(北京君意JY300C),多用脫色搖床(蘇州捷美SYC-2101)。

    1.4 血脂指標測試方法

    血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high density liptein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)指標采用全自動生化分析儀進行測試,具體操作過程依說明書進行。

    1.4.1 RT-PCR檢測腓腸肌AMPK和PGC-1α mRNA表達量

    引物序列β-actin F:CCCATCTATGAGGGTTACGC,R:TTTAATGTCACGCACGATTTC,產(chǎn)物長度150 bp;AMPK F:CAACCGTTCTATTGCCACTCTG,R:TTAGCATCATAGGAGGGGTCTTC,產(chǎn)物長度147 bp;PGC-1α F:CAAGTATCTGACCACAAACGATG,R:ACTGCGGTTGTGTATGGGAC,產(chǎn)物長度110 bp。

    采用SYBR Green I 熒光染料RT-PCR 對腓腸肌AMPK和PGC-1α mRNA 表達量進行檢測,主要步驟如下:參照說明書提取RNA,1%瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果。反轉(zhuǎn)錄過程按試劑盒說明書進行。反轉(zhuǎn)錄總反應體系為20 μl,10 μl 2×RT buffer,1 μl 反轉(zhuǎn)錄引物(100 pmol/μl),1 μl RT-mix,5 μl 模板(RNA),3 μl DEPC水;混勻后25℃10 min,加入反轉(zhuǎn)錄酶2 μl,42℃50 min,85℃15 min。反應條件:94℃4 min、94℃20 s、60℃20 s、72℃20 s,循環(huán)35次、72℃檢測。每個樣本重復三次取均值,相對表達量=2-△△Ct。

    1.4.2 Western Blot 檢測腓腸肌AMPK和PGC-1α 蛋白表達

    取50 mg 腓腸肌組織液氮研磨,勻漿裂解,4°C 12000 r/min 離心5 min,取上清,用考馬斯亮藍法測定總蛋白含量。采用BCA法測定蛋白濃度。SDS-PAGE電泳,抗體稀釋比例見表1。ECL 發(fā)光液(Millipore,美國)顯影后用Image J軟件進行圖像灰度值分析。

    1.5 統(tǒng)計學分析

    所有數(shù)據(jù)通過SPSS19.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理。所有數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,結(jié)果用平均值±標準差表示,采用單因素方差分析比較各組均值的差異是否具有統(tǒng)計學意義,以P<0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

    表1 抗體稀釋比例及來源

    2 結(jié)果

    2.1 體重及腎周、附睪脂肪重量

    2.1.1 訓練期間大鼠體重變化情況

    由表2可以看出,在8周的訓練期間,第1周時,OA組的體重低于OC 組(P<0.05);從第2 周到訓練結(jié)束,OA組和HIIT組的體重均低于OC組(P<0.01),但OA組與HIIT組之間無顯著性差異。

    表2 訓練期間大鼠體重變化

    2.1.2 干預后大鼠腎周、附睪脂肪重量

    從圖1 可以看出,與OC 組相比,HIIT 組腎周和附睪脂肪重量均下降(P<0.01);OA組腎周和附睪脂肪重量均下降(P<0.05,P<0.01)。HIIT 組腎周和附睪脂肪重量較OA組分別低21.3%和22.4%,但無顯著性差異。

    圖1 各組大鼠腎周脂肪重量及附睪脂肪重量

    從圖2 可以看出,OA和HIIT 組的脂體比低于OC組,但只有HIIT組有顯著性差異(P<0.05)。OA組脂體比較OC 組低了24.1%,HIIT 組脂體比較OA 組低了22.2%,但均無顯著性差異。

    圖2 各組大鼠脂體比圖

    2.2 血脂結(jié)果

    圖3 顯示,與OC 組相比,HIIT 組TC、TG和LDL-C均降低,有顯著性差異(P<0.01,P<0.05,P<0.05);與OC組相比,OA組TC降低,有顯著性差異(P<0.01),而TG、LDL-C也有不同程度的下降,但不具顯著性差異。HIIT 組TC、TG和LDL-C 雖然較OA 組均下降,但不具顯著性差異。三組間HDL-C無顯著性差異。

    圖3 各組大鼠血脂水平

    2.3 腓腸肌AMPK和PGC-1α mRNA及蛋白表達情況

    2.3.1 腓腸肌AMPK mRNA及蛋白表達情況

    圖4 顯示,與OC 組相比,HIIT 組AMPK mRNA 表達量上調(diào)9.6%,有顯著性差異(P<0.05);與OA組相比,高出104%,有顯著性差異(P<0.01)。而OA 組AMPK mRNA 表達量與OC 組相比出現(xiàn)下調(diào),有顯著性差異(P<0.01)。

    圖5顯示,與OC組相比,HIIT組和OA組AMPK 蛋白相對表達量分別上調(diào)11%和10%(P<0.05)。HIIT組AMPK 蛋白相對表達量與OA組無顯著性差異。

    圖4 各組AMPK mRNA表達

    2.3.2 腓腸肌PGC-1α mRNA及蛋白表達情況

    由圖6 可以看出,與OC 組相比,HIIT 組和OA 組PGC-1α mRNA 表達量分別上調(diào)520%和860%,有顯著性差異(P<0.01)。與OA 組相比,HIIT 組PGC-1α mRNA下調(diào)35.4%,有顯著性差異(P<0.01)。

    圖5 各組AMPK蛋白表達

    圖6 各組PGC-1α mRNA表達

    由圖7 可以看出,與OC 組相比,HIIT 組和OA 組PGC-1α蛋白表達量分別上調(diào)9%和18%,但無顯著性差異;OA組雖然高于HIIT組7%,但無顯著性差異。

    3 討論

    3.1 HIIT對體重、腎周及附睪脂肪重量的影響

    研究表明,單純有氧運動干預可以減輕體重[25,26],且男性下降幅度大于女性[27]。本研究中,8周有氧運動干預期間,OA組大鼠體重基本穩(wěn)定,而OC組體重以每周大約20 g 左右的速度增長,且干預后腎周脂肪和附睪脂肪重量分別低于OC 組38.0%和53.3%,說明有氧運動對抑制體重增長有明顯作用。

    長期有氧運動具有不錯的減肥效果,但是在日常實施過程中難在堅持。已有研究證明,在受試者身體條件允許的前提下,大強度間歇運動能達到更好的減肥效果[9,28]。對于減脂肪來說,運動中和運動后總能量消耗比單純運動中的能量消耗更重要。本研究中,8周運動干預后,HIIT組體重與干預前相比變化很小,腎周和附睪脂肪均顯著低于OC 組,且脂體比相對OC 組有顯著性差異,這表明HIIT 具有良好的降低體重的效果。一般認為HIIT 以肌糖原供能為主,但有研究證明HIIT干預過程中主要以有氧氧化供能為主[6,9]。在HIIT干預后觀察到生長激素、甲狀腺素分泌增加[29],導致機體靜息代謝率提高,引起脂肪消耗增加。另外,HIIT使瘦體重增加[30,31],而肌肉質(zhì)量增加能提高基礎代謝水平,進而使得脂肪消耗增多。

    比較HIIT和OA 組體重、腎周和附睪脂肪重量變化可以發(fā)現(xiàn),雖然HIIT組體重略高于OA組,但HIIT組腎周和附睪脂肪重量以及脂體比均低于OA組,這說明HIIT組在降低體脂的同時能有效提高瘦體重,提示HIIT在減少腎周和附睪脂肪方面較有氧運動效果好。究其原因可能是,HIIT由于強度較高,對機體產(chǎn)生的刺激程度要大于有氧運動,增加了運動中的能量消耗;而且有研究顯示,HIIT 干預后,脂肪氧化率顯著提高[32],使得HIIT運動過程中和運動后恢復期的總消耗量大于單純有氧運動,因此導致HIIT 組腎周和附睪脂肪重量低于OA組。運動在引起脂肪下降的同時促進肌肉生長,使瘦體重增加[30,31,33]。因此,本研究認為,HIIT和有氧運動均可顯著降低肥胖大鼠的體重、腎周和附睪脂肪重量,且HIIT 降低腎周和附睪脂肪重量以及改善瘦體重的效果優(yōu)于有氧運動。

    3.2 HIIT對血脂的影響

    研究已經(jīng)證實,運動對改善肥胖機體的脂代謝紊亂有較好的效果[2,19]。運動對TC、HDL-C、LDL-C的影響與運動方式、運動時間以及運動者自身的健康狀態(tài)有關(guān),長時間中、小強度有氧運動會引起TC和LDL-C的降低[34],而對HDL-C的影響結(jié)論不一致。有研究發(fā)現(xiàn),有氧運動2個小時以上或能量消耗超過900 kcal時,HDL-C才會出現(xiàn)顯著下降,認為運動時間和運動強度是影響HDL-C 水平的主要因素[35];大部分的研究認為有氧運動可以提高HDL-C[2,19]。本研究中,OA 組的TC低于OC組;與OC組相比,OA組HDL-C無顯著性差異,可能與運動時間有關(guān);與OC 組相比,OA 組LDL-C雖然無顯著性差異,但降低了15%。HIIT 組的TC和LDL-C均顯著低于OC組,HDL-C與OC組相比無顯著性差異。HIIT組的TC、LDL-C均低于OA組,但兩組之間無顯著性差異。

    本研究中,OA 組TG 與OC 組之間無顯著性差異;HIIT 組TG 顯著低于OC 組(P<0.05)。已有研究證明,耐力訓練可以顯著提高長跑運動員的血漿脂蛋白脂肪酶活性,提高TG 清除率;中低強度的耐力運動有利于血漿TG的降低和肝臟TG的轉(zhuǎn)運。而HIIT 對TG的影響尚未有統(tǒng)一結(jié)論,有研究認為HIIT 可以顯著降低TG[2,34],也有研究證明HIIT 對TG 不會產(chǎn)生明顯影響[19]。本研究認為HIIT和有氧運動均能通過降低肥胖大鼠血清TC、TG和LDL-C 水平,改善血脂狀況,且HIIT對TG和LDL-C的改善效果優(yōu)于有氧運動。

    3.3 HIIT對AMPK、PGC-1α的影響

    3.3.1 HIIT對AMPK的影響

    AMPK 是異源三聚體蛋白,包括催化亞基α1、α 2,支架亞基β1、β2,以及核苷酸結(jié)合亞基γ1、γ2、γ3[36]。AMPK是細胞的能量變化感受器[16,36],可通過啟動脂肪酸氧化和糖酵解等分解代謝途徑來增加ATP的產(chǎn)生,同時又可以關(guān)閉脂肪酸和蛋白合成等合成代謝途徑來減少ATP的消耗。運動時AMP/ATP 發(fā)生變化,進而激活AMPK。梁春瑜等[7]在觀察HIIT 運動對AMPK 影響時發(fā)現(xiàn),第2 周時HIIT 組的AMPK 蛋白表達量顯著高于安靜對照組和中等強度運動組;而第4周、6周、10周時其表達水平無顯著性差異。本研究中8 周干預后,HIIT 組AMPK mRNA的表達量顯著高于OC 組和OA組,而OA組表達量顯著低于OC組和HIIT組。有研究顯示,以雄性SD 大鼠為研究對象,與安靜組相比,AMPK 活性在小強度運動時不變,中到大強度運動時分別增加50%和180%,表明AMPK的激活程度與運動強度成正相關(guān)[17]。OA 組的表達量為什么會低于OC組?可能是長時間的低強度運動干預,機體的適應性改變導致其表達量降低[7,37]。

    圖7 各組PGC-1α蛋白表達

    從AMPK蛋白表達量的結(jié)果來看,HIIT組和OA組分別高于OC 組11%和10%。這與AMPK mRNA的表達并不一致,OA 組AMPK mRNA 表達量顯著低于OC組,而OA 組蛋白表達則顯著高于OC 組,但HIIT的AMPK mRNA和蛋白表達基本一致。從結(jié)果可以看出,8周的HIIT能顯著提高大鼠骨骼肌AMPK的mRNA和蛋白表達量。有氧運動后大鼠腓腸肌AMPK mRNA表達水平顯著性下降,但AMPK 蛋白表達量有顯著升高,結(jié)合本研究運動干預方案分析,可能是有氧運動適應后隨著AMPK 蛋白表達量的升高,引起AMPK mRNA表達水平適應性下調(diào)。

    3.3.2 HIIT對PGC-1α的影響

    脂肪是安靜狀態(tài)和運動過程中重要的供能物質(zhì),長鏈脂肪酸需在線粒體內(nèi)經(jīng)β氧化才能被分解,而長鏈脂肪酸不能直接進入線粒體,需在肌細胞漿內(nèi)活化為脂酰CoA 后才能通過載體運輸,跨過線粒體膜進而被分解。肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1(CPT-1)和中鏈?;o酶A脫氫酶(MCAD)是脂酰CoA進入線粒體的重要酶,在脂肪酸氧化中起著重要作用。解偶聯(lián)蛋白3(UCP3)可通過氧化磷酸化促進ATP 合成,促進脂肪酸β氧化,其表達增加表明骨骼肌脂肪酸氧化增強[21],而PGC-1α可以上調(diào)UCP3 在骨骼肌的表達來提高骨骼肌中脂肪酸的氧化速率[38]。已有研究證明,PGC-1α能夠調(diào)節(jié)機體適應性產(chǎn)熱、糖脂代謝和血糖平衡[19],參與線粒體生物合成,提高線粒體的呼吸與氧化能力[20,21],通過調(diào)節(jié)CPT-1、UCP3和MCAD[39]功能進而影響脂肪的氧化。因此,PGC- 1α被認為是影響肥胖的一個重要因素。

    研究證實,急性和長期運動均能增加骨骼肌PGC-1α的表達[40-42],本研究中,HIIT 組和OA 組PGC-1α mRNA 表達量都顯著高于OC 組,這與之前的研究一致。還有研究發(fā)現(xiàn),不同強度的一次性跑臺運動后,大鼠骨骼肌PGC-1α mRNA表達量與運動強度成正相關(guān)[43],但本研究中OA 組卻顯著高于HIIT 組(P<0.01),這可能與運動強度、運動干預時間以及實驗對象為肥胖大鼠有關(guān)。HIIT 組和OA 組PGC-1α蛋白表達量分別高于OC組9%和18%,但無顯著性差異,且兩者之間亦無顯著性差異。這與之前的研究結(jié)果基本一致,但本研究中HIIT組PGC-1α蛋白表達低于OA組,其原因可能是在HIIT干預后,PGC-1α的蛋白表達會有一個先上升后下降再小幅上升的趨勢,8周的訓練時間可能正處于其表達的下降期,有研究證明10 周HIIT 對PGC-1α的蛋白表達有顯著促進作用[7]。

    3.3.3 HIIT對AMPK-PGC-1α通路的影響

    環(huán)境、能量、Ca2+濃度以及激素的變化均可以引起PGC-1α蛋白表達量的變化,但運動引起的PGC-1α蛋白表達量的變化主要與AMPK參與的能量變化過程有關(guān)[41,44]。有研究表明,有氧耐力運動[40]和HIIT[7,45]均可引起PGC-1α表達量的增加,AMPK的激活能誘導PGC-1α 表達的增 加,以 上 研 究 顯 示PGC-1α 是AMPK的下游靶點之一。PGC-1α一方面可以直接對骨骼肌脂代謝進行調(diào)控,另一方面也可以通過促進線粒體生物合成加快脂肪酸的氧化來達到減肥的目的。

    本研究結(jié)果顯示,有氧運動后肥胖大鼠腓腸肌AMPK mRNA 表達水平顯著性下降,但AMPK 蛋白表達量有顯著升高;而PGC-1α mRNA和蛋白表達均有所升高。結(jié)合本研究運動干預方案分析,有氧運動適應后隨著AMPK 蛋白表達量的升高,AMPK mRNA 表達水平適應性下調(diào),而PGC-1α mRNA 則隨著AMPK蛋白的調(diào)節(jié)呈現(xiàn)表達上調(diào)趨勢,這提示有氧運動可能通過調(diào)節(jié)AMPK-PGC-1α通路,改善脂代謝。

    HIIT可以顯著提高肥胖大鼠腓腸肌AMPK mRNA和蛋白以及PGC-1α mRNA和蛋白表達量。比較有氧運動發(fā)現(xiàn),HIIT隨著運動強度的增加,作用于機體的負荷強度增強,使得肥胖大鼠腓腸肌AMPK mRNA 表達上升,持續(xù)高強度運動干預使得AMPK和PGC-1α蛋白表達水平升高,這表明HIIT 作用方式和影響程度有別于有氧運動,提示HIIT 可以通過激活AMPK/PGC-1α通路,加快脂肪酸氧化達到減肥目的。另外,HIIT組和有氧運動組AMPK和PGC-1α蛋白表達量均高于安靜對照組,說明運動可以激活AMPK/PGC-1α通路,并且HIIT激活作用大于有氧運動。HIIT組AMPK蛋白表達稍微高于OA 組,而PGC-1α蛋白表達低于OA 組,AMPK和PGC-1α蛋白表達變化趨勢不一致,提示AMPK 可能不是誘導PGC-1α表達增加的唯一因素。有研究顯示,P38MAPK-ATF-PGC-1α 信號通路在PGC-1α的表達中有重要作用,Ca2+和CaMKⅡ也是影響PGC-1α表達的重要因子[46]。

    4 結(jié)論

    (1)8 周HIIT和有氧運動均能顯著減少肥胖大鼠的體重、腎周和附睪脂肪重量、脂體比,降低血清TC、TG和LDLC水平,改善血脂情況,且HIIT效果優(yōu)于有氧運動。

    (2)HIIT和有氧運動兩種運動方式均能通過影響AMPK/PGC- 1α通路調(diào)節(jié)機體脂代謝,但兩種作用產(chǎn)生的機制可能存在差異,且HIIT效果更明顯。

    猜你喜歡
    腓腸肌附睪有氧
    高頻超聲評估2型糖尿病患者腓腸肌病變的診斷價值
    老人鍛煉,力量、有氧、平衡都需要
    中老年保健(2022年3期)2022-11-21 09:40:36
    有氧運動與老年認知障礙
    中老年保健(2022年2期)2022-08-24 03:21:54
    如何從零基礎開始有氧運動
    中老年保健(2022年4期)2022-08-22 03:01:18
    石氏三色膏治療小腿腓腸肌損傷60例
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:40
    高頻超聲探查用于診斷附睪病變男性不育的價值探討
    腓腸肌損傷的MRI臨床診斷研究
    磁共振成像(2015年5期)2015-12-23 08:52:53
    糖有氧代謝與運動訓練
    人附睪蛋白4(HE4)在乳腺癌診斷中的價值
    高頻超聲對附睪結(jié)核的臨床診斷價值探討
    日韩亚洲欧美综合| 日韩欧美在线乱码| 欧美日韩综合久久久久久 | 中文资源天堂在线| 午夜精品久久久久久毛片777| 少妇人妻精品综合一区二区 | 成年女人看的毛片在线观看| 精品久久久久久久久亚洲 | 在线播放国产精品三级| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲精品一区av在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 久久久久久久久久黄片| 精品欧美国产一区二区三| 在线播放国产精品三级| 亚洲电影在线观看av| 国产一区二区在线观看日韩| 极品教师在线免费播放| 又爽又黄无遮挡网站| 看黄色毛片网站| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产精品一及| 毛片女人毛片| 国产成人a区在线观看| 在线观看66精品国产| 3wmmmm亚洲av在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲avbb在线观看| av专区在线播放| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲av成人av| 男女视频在线观看网站免费| 成年免费大片在线观看| 韩国av一区二区三区四区| av.在线天堂| 亚洲精品成人久久久久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 中文字幕高清在线视频| 黄色一级大片看看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 99热网站在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 如何舔出高潮| 久久久久久久久久成人| 久久人人精品亚洲av| 免费高清视频大片| 99久久精品国产国产毛片| 久99久视频精品免费| 亚洲成人久久爱视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚洲精品在线观看二区| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产成人av教育| 九色国产91popny在线| 少妇高潮的动态图| 一a级毛片在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 午夜爱爱视频在线播放| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲中文字幕日韩| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久久色成人| 午夜精品一区二区三区免费看| 波野结衣二区三区在线| 久久久成人免费电影| 露出奶头的视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 免费在线观看成人毛片| 成人欧美大片| 国产极品精品免费视频能看的| 久久这里只有精品中国| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| or卡值多少钱| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产探花在线观看一区二区| 日韩欧美 国产精品| 香蕉av资源在线| 天堂√8在线中文| 性插视频无遮挡在线免费观看| 女人被狂操c到高潮| 色综合婷婷激情| 精品人妻偷拍中文字幕| 欧美一区二区国产精品久久精品| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产乱人视频| 舔av片在线| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲在线观看片| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 精华霜和精华液先用哪个| 舔av片在线| 日本欧美国产在线视频| 九色国产91popny在线| 国产视频一区二区在线看| 精品国产三级普通话版| 精品久久久久久久末码| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 黄色日韩在线| 美女黄网站色视频| 久9热在线精品视频| 99久久成人亚洲精品观看| 看十八女毛片水多多多| 国产三级在线视频| 一级毛片久久久久久久久女| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 亚洲自拍偷在线| 嫩草影院精品99| 99riav亚洲国产免费| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲国产精品合色在线| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 18禁在线播放成人免费| 亚洲av免费高清在线观看| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲专区国产一区二区| 国产亚洲91精品色在线| 成人鲁丝片一二三区免费| 99久久九九国产精品国产免费| 国产不卡一卡二| 久久6这里有精品| 老司机午夜福利在线观看视频| 一个人看视频在线观看www免费| 精品久久久久久,| 一级毛片久久久久久久久女| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲美女视频黄频| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 亚洲一区高清亚洲精品| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产伦精品一区二区三区视频9| 欧美激情在线99| 亚洲欧美精品综合久久99| 看免费成人av毛片| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲精华国产精华精| 日本在线视频免费播放| 亚洲第一区二区三区不卡| 88av欧美| 少妇人妻精品综合一区二区 | 精品人妻1区二区| 国产精品日韩av在线免费观看| 在线免费十八禁| 免费观看精品视频网站| 12—13女人毛片做爰片一| 国产成年人精品一区二区| 久久午夜亚洲精品久久| 免费看光身美女| 免费看光身美女| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲国产欧美人成| 久久精品91蜜桃| 内射极品少妇av片p| 美女高潮的动态| 熟女人妻精品中文字幕| 毛片一级片免费看久久久久 | 亚洲经典国产精华液单| 久久国产乱子免费精品| 久久6这里有精品| 欧美丝袜亚洲另类 | 丰满乱子伦码专区| 欧美成人免费av一区二区三区| 少妇熟女aⅴ在线视频| 成人国产麻豆网| www.www免费av| 国产色婷婷99| 少妇人妻一区二区三区视频| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲三级黄色毛片| 成人三级黄色视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产一区二区三区av在线 | 我的老师免费观看完整版| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 麻豆成人午夜福利视频| 中亚洲国语对白在线视频| 听说在线观看完整版免费高清| 精品久久久久久久久av| 综合色av麻豆| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国国产精品蜜臀av免费| 国产精品爽爽va在线观看网站| 色哟哟·www| 听说在线观看完整版免费高清| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产高清视频在线观看网站| 此物有八面人人有两片| 亚洲经典国产精华液单| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚州av有码| 搡老岳熟女国产| 免费观看在线日韩| 小说图片视频综合网站| 免费在线观看影片大全网站| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美日韩黄片免| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日本成人三级电影网站| 身体一侧抽搐| 欧美人与善性xxx| 免费黄网站久久成人精品| 国产av麻豆久久久久久久| 亚洲美女黄片视频| 久久国内精品自在自线图片| 一个人看视频在线观看www免费| 久久久成人免费电影| 99在线视频只有这里精品首页| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产 | 最后的刺客免费高清国语| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 午夜爱爱视频在线播放| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲18禁久久av| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲经典国产精华液单| 欧美性感艳星| 黄色欧美视频在线观看| 最新中文字幕久久久久| 国产中年淑女户外野战色| 99久久九九国产精品国产免费| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲一区高清亚洲精品| 不卡一级毛片| 免费人成视频x8x8入口观看| 看黄色毛片网站| 热99在线观看视频| 国产精品一区www在线观看 | 精品无人区乱码1区二区| 伦理电影大哥的女人| 国产av不卡久久| 中出人妻视频一区二区| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲国产精品成人综合色| 免费观看精品视频网站| 日日撸夜夜添| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产精华一区二区三区| 成年女人毛片免费观看观看9| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产精品国产高清国产av| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 99热网站在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 精品免费久久久久久久清纯| 国产日本99.免费观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 欧美+日韩+精品| 午夜免费成人在线视频| 亚洲内射少妇av| 久久久色成人| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美+日韩+精品| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美性感艳星| 国产视频内射| 国产精品不卡视频一区二区| 日本五十路高清| a级毛片免费高清观看在线播放| 久9热在线精品视频| 国产av麻豆久久久久久久| 热99在线观看视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 51国产日韩欧美| 一级黄色大片毛片| 久久6这里有精品| 免费av观看视频| 国产精品,欧美在线| 免费看日本二区| 22中文网久久字幕| 一本一本综合久久| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产精品98久久久久久宅男小说| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲男人的天堂狠狠| 神马国产精品三级电影在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 一区二区三区激情视频| 最近最新免费中文字幕在线| 又黄又爽又免费观看的视频| 超碰av人人做人人爽久久| 国产探花在线观看一区二区| 日韩欧美三级三区| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 久9热在线精品视频| 99视频精品全部免费 在线| 一区二区三区四区激情视频 | 日韩欧美精品免费久久| 天堂影院成人在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 免费高清视频大片| videossex国产| 午夜精品一区二区三区免费看| 久久香蕉精品热| 波野结衣二区三区在线| 欧美又色又爽又黄视频| 日日撸夜夜添| 亚洲黑人精品在线| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 欧美色视频一区免费| 真人做人爱边吃奶动态| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 真人做人爱边吃奶动态| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 久久久午夜欧美精品| 久久久久久久久久黄片| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲最大成人av| 国产v大片淫在线免费观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 免费电影在线观看免费观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 可以在线观看毛片的网站| 免费看a级黄色片| 天天一区二区日本电影三级| 成人av一区二区三区在线看| 99热只有精品国产| 久9热在线精品视频| 赤兔流量卡办理| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲av免费在线观看| 丝袜美腿在线中文| 在线观看舔阴道视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国内精品久久久久精免费| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国产探花极品一区二区| 国产一区二区在线观看日韩| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产精品永久免费网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产av不卡久久| 日本黄色片子视频| 少妇高潮的动态图| 在线免费观看的www视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产精品一区二区免费欧美| 22中文网久久字幕| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 干丝袜人妻中文字幕| 伦理电影大哥的女人| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 成人美女网站在线观看视频| 国内精品美女久久久久久| av在线天堂中文字幕| 午夜激情欧美在线| 中文资源天堂在线| 国产乱人视频| 男女边吃奶边做爰视频| 51国产日韩欧美| 国产精品乱码一区二三区的特点| av中文乱码字幕在线| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲自偷自拍三级| 又爽又黄无遮挡网站| 999久久久精品免费观看国产| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 校园春色视频在线观看| 国内精品美女久久久久久| 日本免费a在线| 国产在视频线在精品| 亚洲乱码一区二区免费版| 免费观看的影片在线观看| 欧美+日韩+精品| 在线免费观看的www视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 中文字幕av成人在线电影| 嫩草影院入口| 在线国产一区二区在线| 国产精品久久久久久精品电影| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲美女黄片视频| 久久国内精品自在自线图片| 赤兔流量卡办理| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| aaaaa片日本免费| 一区二区三区激情视频| 丝袜美腿在线中文| 国产在线男女| 在线免费观看的www视频| 亚洲人与动物交配视频| 一个人看的www免费观看视频| 嫩草影院精品99| 黄色欧美视频在线观看| 91av网一区二区| 嫁个100分男人电影在线观看| av专区在线播放| 日日撸夜夜添| 亚洲av免费高清在线观看| 在线免费十八禁| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 天堂√8在线中文| 国产欧美日韩精品一区二区| 欧美性感艳星| 国语自产精品视频在线第100页| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲av免费高清在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 麻豆av噜噜一区二区三区| 一级a爱片免费观看的视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 联通29元200g的流量卡| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 日韩国内少妇激情av| 亚洲五月天丁香| 日本黄大片高清| 亚洲成人久久爱视频| 色在线成人网| 久久久久久久久久久丰满 | 欧美色欧美亚洲另类二区| av国产免费在线观看| 精品久久久久久成人av| 深夜精品福利| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 亚洲最大成人av| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 久久精品人妻少妇| 成人二区视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产高清三级在线| 嫩草影院精品99| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲va在线va天堂va国产| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 欧美3d第一页| 国产私拍福利视频在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 观看美女的网站| 亚洲色图av天堂| 男人的好看免费观看在线视频| 国产乱人视频| 中文字幕免费在线视频6| 久久亚洲精品不卡| 91精品国产九色| 亚洲真实伦在线观看| 最近在线观看免费完整版| 国产精品久久久久久久电影| 日本 欧美在线| 成年版毛片免费区| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲无线观看免费| 国产男人的电影天堂91| 国产在视频线在精品| 色在线成人网| x7x7x7水蜜桃| 久久热精品热| 久99久视频精品免费| 成人特级黄色片久久久久久久| 一个人观看的视频www高清免费观看| 在线观看舔阴道视频| 中文字幕熟女人妻在线| 中文字幕av在线有码专区| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产一区二区激情短视频| 直男gayav资源| 精品久久久久久久久av| 亚洲国产精品合色在线| 午夜福利视频1000在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 校园春色视频在线观看| 九色成人免费人妻av| 国产午夜精品论理片| 成人无遮挡网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久久国产成人精品二区| 国产私拍福利视频在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 久久久久国内视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产男人的电影天堂91| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 成人无遮挡网站| 97碰自拍视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产精华一区二区三区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 中文在线观看免费www的网站| 国产精品日韩av在线免费观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲欧美清纯卡通| 久久人人精品亚洲av| 老女人水多毛片| 俄罗斯特黄特色一大片| 小说图片视频综合网站| 99热这里只有是精品在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 欧美最新免费一区二区三区| 美女 人体艺术 gogo| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产激情偷乱视频一区二区| 性插视频无遮挡在线免费观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 欧美极品一区二区三区四区| 床上黄色一级片| 婷婷亚洲欧美| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产精品av视频在线免费观看| 午夜视频国产福利| 国模一区二区三区四区视频| 国产三级中文精品| 亚洲图色成人| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 熟女电影av网| 国产精品伦人一区二区| 国产精品人妻久久久影院| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲国产色片| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产精品久久视频播放| 久久欧美精品欧美久久欧美| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产精品女同一区二区软件 | 国产亚洲欧美98| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲性久久影院| 亚洲四区av| eeuss影院久久| 精品国内亚洲2022精品成人| av视频在线观看入口| 精品人妻偷拍中文字幕| 又爽又黄a免费视频| 欧美一区二区亚洲| 精品一区二区三区人妻视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产精品三级大全| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 精品无人区乱码1区二区| 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 成人av在线播放网站| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产精品精品国产色婷婷| 色5月婷婷丁香| 一夜夜www| 国产伦一二天堂av在线观看| 天美传媒精品一区二区| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美激情在线99| 欧美区成人在线视频| 亚洲最大成人手机在线| 日本免费一区二区三区高清不卡| 三级毛片av免费| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 免费黄网站久久成人精品| 深夜精品福利| 午夜日韩欧美国产| 嫩草影院新地址| av福利片在线观看| 久久久国产成人免费| 色在线成人网| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 精品久久久久久久久亚洲 | 国产精品,欧美在线| 麻豆一二三区av精品| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲专区国产一区二区| 99在线视频只有这里精品首页| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲美女搞黄在线观看 | 黄色视频,在线免费观看| 精品福利观看| 在线免费十八禁| 91av网一区二区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产成人一区二区在线| 欧美激情在线99| 999久久久精品免费观看国产| 少妇人妻精品综合一区二区 |