超高效液相色譜法測定茶葉中三氯殺螨醇

彭臻菲 黃慧 李泳寧

摘要 [目的]建立一種超高效液相色譜快速測定茶葉中三氯殺螨醇的方法。[方法]采用Waters H-Class超高效液相色譜儀，ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），測定波長230 nm，流動相為A（甲醇）∶B（1%乙酸水）=90∶10，流速0.5 mL/min。茶葉中的三氯殺螨醇采用丙酮和正己烷進行提取，經(jīng)濃硫酸凈化和濃縮后，用甲醇定容后進行分析檢測。[結(jié)果]三氯殺螨醇在0.05～1000 mg/L具有較好的線性關(guān)系（R2=0.999 2），檢測限為0.05 mg/L。茶葉樣品中添加3個濃度三氯殺螨醇的平均回收率為93.9%～106.0%，變異系數(shù)為3.3%～11.1%。[結(jié)論]該方法快速、準確、靈敏，可用于茶葉中三氯殺螨醇的分析檢測。

關(guān)鍵詞 超高效液相色譜;三氯殺螨醇;茶葉

中圖分類號 O657.7;TS272.7 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2020）03-0200-03

Abstract [Objective]The research aimed to establish a method for the rapid determination of dicofol in tea by ultra performance liquid chromatography（UPLC）. [Method]The system composed of a Waters HClass UPLC and a ACQUITY UPLC BEH C18 column （100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）， and detection wavelength was set at 230 nm. The mobile phase was A （methanol）：B （water containing 1% acetic acid）=90∶10 and the flow rate was 0.5 mL/min. The dicofol residues in the tea were extracted by acetone and hexane， and purified by concentrated sulfuric acid. The final residues were fixed in methanol for detection. [Result]The good linear range was 0.05-10.00 mg/L （R2=0.999 2）. The limit of detection was 0.05 mg/L. The average recoveries of dicofol which were added into the tea were 93.9%-106.0% and variation coefficients （CVs） ranged from 3.3%-11.1%. [Conclusion]The method is rapid， accurate and high sensitivity， which can be used for the detection of dicofol in the tea.

Key words Ultra performance liquid chromatography;Dicofol;Tea

三氯殺螨醇是一種具有殺螨譜廣、高效的有機氯殺螨劑，被廣泛應(yīng)用于蔬菜、果樹和棉花等種植中病蟲害的防治。但近年來研究發(fā)現(xiàn)，由于三氯殺螨醇具有不易分解、殘留量高，對動物和人類有毒性和雌激素效應(yīng)等作用而受到關(guān)注[1-3]。我國是茶葉產(chǎn)品生產(chǎn)和出口大國，大量茶葉因農(nóng)藥殘留不達標而被阻止出口，其產(chǎn)生的綠色壁壘對我國茶葉出口貿(mào)易具有一定的制約作用[4-6]。目前，由于三氯殺螨醇使用效果顯著，部分茶葉中仍可檢出三氯殺螨醇，因此茶葉中三氯殺螨醇的殘留情況越來越受到關(guān)注[7-8]。

三氯殺螨醇的檢測方法主要有氣相色譜法[9-10]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[11-12]和液相色譜法等[13-14]。氣相色譜法為最常用的檢測方法，靈敏度高，但檢測時間較長;氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法更為準確和靈敏，但其對儀器有較高的要求;液相色譜法是目前進出口茶葉中三氯殺螨醇殘留量的檢測方法，其檢測準確度和靈敏度也相對較高。超高效液相色譜（ultra performance liquid chromatography，UPLC）是近年來快速發(fā)展的一種基于1.7 μm 顆粒度填料的液相色譜技術(shù)，比高效液相色譜分析速度更快更靈敏，具有更高的柱效、分析時間短、減少溶劑消耗等優(yōu)點[15]，被廣泛應(yīng)用于中草藥、農(nóng)藥和藥物的檢測分析[16-20]。筆者采用超高效液相色譜法，建立三氯殺螨醇殘留量的檢測方法，以期為檢測茶葉中三氯殺螨醇殘留量提供有效方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

三氯殺螨醇標準品購自上海源葉生物科技有限公司;甲醇為色譜純;其他試劑均為分析純。

超高效液相色譜系統(tǒng)H-class，配二極管陣列檢測器，美國Waters 公司。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件。

色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱溫25 ℃，進樣量5 μL，檢測波長230 nm。流動相為A（甲醇）∶B（1%乙酸水）=90∶10;流速0.5 mL/min。

1.2.2 三氯殺螨醇標準曲線的繪制。

先配制三氯殺螨醇標準溶液10.0 mg/L，再稀釋成一系列不同濃度的標準溶液（001、0.05、0.10、0.50、1.00、2.50、5.00 mg/L），在“1.2.1”色譜條件下進樣檢測，將不同三氯殺螨醇濃度與峰面積作圖，計算出回歸方程式。

1.2.3 茶葉中三氯殺螨醇的提取方法。

準確稱取1.000 g茶葉樣品于10 mL試管中，加入1.0 mL丙酮和2.0 mL正己烷。置于旋渦振蕩器上劇烈振蕩30 s。3 000 r/min離心2 min，將上清移入另一10 mL試管中。殘渣再重復(fù)提取2次，將提取上清液合并。將合并的上清液置于恒溫水浴中，60 ℃恒溫蒸發(fā)、濃縮至4～5 mL，取出。往試管中緩慢加入1.5 mL濃硫酸，輕輕混勻后，3 500 r/min離心2 min，取出。將下層磺化液吸出，再加入1.5 mL濃硫酸，重復(fù)1次，最后將上清液移入一干凈試管中，在取出上清液的原試管中再加入2.0 mL正己烷，混勻30 s，3 500 r/min離心2 min，取出，將上清液小心移入同一干凈試管中。將試管于50 ℃恒溫水浴中，空氣流下，蒸干，準確加入1.0 mL甲醇溶解殘留物，作為待測液。

1.2.4 加標回收率試驗。

準確稱取1.000 g未檢出三氯殺螨醇的茶葉樣品，向樣品中添加三氯殺螨醇標準品（通過液體稀釋后加入），得到0.1、1.0和10.0 mg/kg。按“1.2.3”的方法進行提取，進行液相分析。根據(jù)三氯殺螨醇標準曲線，計算出樣品的三氯殺螨醇含量。每個樣品設(shè)6個重復(fù)，以回收率和變異系數(shù)確定其準確度。

2 結(jié)果與分析

2.1 三氯殺螨醇標準曲線的繪制

按照“1.2.2”方法進行色譜檢測，色譜結(jié)果如圖1所示。從圖1可以看出，在該色譜條件下，三氯殺螨醇標準品（1.0 mg/L）的保留時間為3386 min，峰型較好。不同濃度下測定的結(jié)果表明，在三氯殺螨0.05～10.00 mg/L具有較好的線性關(guān)系，線性方程為y=79.268x-0.803 4（R2=0.999 2），檢測限為0.05 mg/L。茶葉樣品中加入三氯殺螨醇標準品，提取后采用超高效液相色譜檢測的色譜圖見圖2所示。從圖2可以看出，提取后茶葉樣品中的三氯殺螨醇峰型較好，未與其他雜質(zhì)干擾，可用于茶葉樣品中三氯殺螨醇的分析檢測。

2.2 茶葉中三氯殺螨醇加標回收率

按照“1.2.4”方法操作，通過提取后采用超高效液相色譜儀進行測定樣品的三氯殺螨醇含量，計算茶葉樣品的三氯殺螨醇回收率，結(jié)果如表1所示。從表1可以看出，在添加3個濃度的三氯殺螨醇標準品的平均回收率為93.9%～106.0%，回收率較高，CV值 為33%～11.1%，具有較好的重復(fù)性。表明該研究建立的超高效液相色譜法檢測具有較高的準確度和重復(fù)性。

3 討論

近年來，隨著經(jīng)濟全球化和貿(mào)易自由化的發(fā)展，各國對我國茶葉進入國際市場提出了更苛刻的要求，綠色貿(mào)易壁壘成為茶葉貿(mào)易出口的主要障礙[21-22]。我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布自2018年10月1日起，全面禁止三氯殺螨醇銷售和使用，世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)將三氯殺螨醇列在3類致癌物清單中。但由于長期以來茶樹病蟲的發(fā)生，而三氯殺螨醇的使用效果顯著，目前仍有被違法使用于茶葉種植中，使得在部分茶葉中仍可檢出三氯殺螨醇殘留。河南省茶葉中重金屬污染和農(nóng)藥殘留狀況調(diào)查分析，結(jié)果表明，茶葉中可檢測到禁用農(nóng)藥三氯殺螨醇，檢出率為5.00%[8]。可見，由于我國茶葉的農(nóng)藥殘留問題長期以來未被得到重視和解決，導(dǎo)致大量茶葉因不達標而被阻止出口[23]。因此，建立快速、靈敏的農(nóng)藥殘留檢測方法是目前工作的一個重點。

目前，在茶葉的有機農(nóng)藥殘留檢測中，其中有機類農(nóng)藥包括有機氯農(nóng)藥、有機磷農(nóng)藥、有機金屬類農(nóng)藥、氨基甲酸脂類農(nóng)藥和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥等[24]。多數(shù)具有熱穩(wěn)定、弱極性和揮發(fā)性的農(nóng)藥如有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯等則采用氣相色譜法進行檢測[25]，一些熱不穩(wěn)定或蒸汽壓較低的殺蟲劑，如氨基甲酸酯類和N-甲基氨基甲酸酯類，則可采用液相色譜法[26]。三氯殺螨醇報道的較多是氣相色譜法，而液相色譜法報道的較少。倪曉琳等[13]建立了液相色譜法測定茶葉中三氯殺螨醇的方法，在0.1～10.0 mg/L具有良好的線性關(guān)系，檢出限為0.02 mg/kg，加標回收率為95.4%～1052%，RSD為1.4%～5.5%，該方法操作簡便、快速、準確度高。張雷等[14]建立了茶葉中三氯殺螨醇殘留量的高效液相色譜快速檢測方法，在0.02～5.00 mg/kg，三氯殺螨醇線性關(guān)系良好，在綠茶、紅茶、黃茶、青茶、白茶、黑茶6種茶葉中的加標回收率為80.9%～108.3%，RSD為1.2%～140%。目前，已經(jīng)有部分液相色譜法被應(yīng)用于成品茶（干茶）和茶制品的農(nóng)殘定量分析[25]。

UPLC是以小顆粒填料（<2 μm）和超高壓系統(tǒng)（>105 kPa）為特征的超高效液相色譜，可以獲得更加高效和快速的色譜分離性能[27]。UPLC由于其具有的速度、靈敏度及分離度均比HPLC有數(shù)倍的提高，近年來被廣泛應(yīng)用于各種中藥、藥物、化妝品和環(huán)境等領(lǐng)域的分析檢測中，而結(jié)合質(zhì)譜的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS）檢測方法更被廣泛應(yīng)用于食品、蔬菜、水果和茶葉中多菌靈、啶蟲脒、氟蟲腈等氨基甲酸酯類和有機磷類等農(nóng)藥殘留檢測中[27-31]。因此，UPLC的應(yīng)用越來越廣泛。該研究應(yīng)用UPLC建立的檢測三氯殺螨醇的方法，出峰時間短、靈敏度高、重復(fù)性好，該方法可用于茶葉中三氯殺螨醇的快速檢測。

4 結(jié)論

該研究中采用UPLC建立了一種快速檢測茶葉中三氯殺螨醇的方法，三氯殺螨醇濃度在0.05～10.00 mg/L具有較好的線性范圍，最低檢測限為0.05 mg/L。茶葉樣品中添加3個濃度的三氯殺螨醇平均回收率為93.9%～106.0%，CV值為3.3%～11.1%。該方法快速、準確、靈敏，可用于茶葉樣品中三氯殺螨醇的分析檢測。

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