紫外分光光度法測定石榴補血糖漿中總黃酮的含量

周琴，孫瑩，宋明玉，麥麥提艾力·依甘拜爾迪，田芳

（新疆維吾爾藥業(yè)有限責任公司，新疆 烏魯木齊）

0 引言

石榴是石榴科植物石榴（Punica granatum L）的干燥果實，性味甘、酸澀、溫，具有殺蟲、收斂、澀腸、止痢等功效。根據(jù)目前的研究報道，石榴中主要化學成分為多酚類、黃酮類、生物堿和有機酸，此外還含有甾類、磷脂、甘油三酯、揮發(fā)油、氨基酸及礦物質(zhì)等。石榴的根、葉、花、果實、果皮、種子均可入藥。石榴的不同部位所含的化學成分的種類及含量各不相同。石榴的果汁、果皮、葉、樹皮中黃酮類、鞣質(zhì)類、生物堿、有機酸和特殊結(jié)構(gòu)的多元酚的含量各有偏重；石榴籽及其他部位則多含甾類、磷脂、三酰甘油等成分[1-4]。

石榴補血糖漿原名為“阿娜爾補血糖漿”，“阿娜爾”為維語“石榴”之意，用于補血、止血、養(yǎng)心強身的常規(guī)藥品，是新疆維吾爾藥業(yè)有限責任公司獨家品種，功能主治為，維醫(yī)：補血健腦。用于異常膽液質(zhì)偏盛引起的貧血，心悸、氣短、焦慮、頭暈等。中醫(yī)：補氣血。用于氣血虛引起的氣短、頭暈、心悸、健忘等。目前對石榴化學成分研究報道較多，關(guān)于石榴補血糖漿成分研究還未見報道，本文采用紫外分光光度法建立石榴補血糖漿總黃酮含量測定方法，并對15批石榴補血糖漿進行了含量檢測。

1 實驗材料

1.1 儀器

紫外-可見分光光度計Agilent Cary 60（安捷倫科技（中國）有限公司），電子天平（型號AL204，MS105DU）（梅特勒-托利多儀器（上海）養(yǎng)心公司），超聲提取器（SK250HP，上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑

槲皮素對照品（批號：10081-200907，100mg/支，中國食品藥品檢定研究院）；無水乙醇（分析純，500mL/瓶，天津市北聯(lián)精細化學品開發(fā)有限公司）。

1.3 藥品

石榴補血糖漿，規(guī)格：200mL/瓶，批號：0180501，（由新疆維吾爾藥業(yè)有限責任生產(chǎn)）。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

精密量取石榴補血糖漿（批號：0180501）0.5mL，至100mL容量瓶中，加入90%乙醇混勻，超聲20分鐘，取出放冷，定容至刻度，搖勻，過濾，即得。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取槲皮素對照品0.01027g（批號：10081-200907），至100mL容量瓶中，加入適量70%乙醇超聲溶解后，定容至刻度，即得0.1027mg/mL的對照品溶液。

2.3 測定波長的選擇

分別量取上述配制好的供試品溶液和對照品溶液適量，以70%乙醇為空白，在200～800nm波長范圍內(nèi)進行紫外掃描。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，總黃酮在375nm處出現(xiàn)有吸收峰，故選擇檢測波長為375nm，結(jié)果見圖1。

圖1 測定波長的選擇

2.4 標準曲線的繪制

精密移取槲皮素對照品溶液 1mL、2mL、3mL、4mL、5mL 置于50mL容量瓶中加入90%乙醇混勻，定容至刻度。以90%乙醇為空白，在375nm波長處測定吸光度。以吸光度Y為縱坐標，濃度X為橫坐標，最小二乘法直線回歸，得槲皮素標準曲線為：Y=0.07477*X-0.00898，Y為吸光度，X為質(zhì)量濃度，R2=0.99985。結(jié)果表明，槲皮素在2.054ug/mL-10.27ug/mL 范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，結(jié)果見圖2。

圖2 標準曲線

2.5 精密度試驗

精密量取供試品溶液0.5mL，至于100mL容量瓶中，按“2.1”項下方法進行溶液的制備，在375nm波長下測定吸光度，重復(fù)測定6次，測定吸光度。經(jīng)計算得知總黃酮吸光度的RSD=1.45%（n=6），結(jié)果表明該方法精密度良好。

2.6 重復(fù)性考察

精密吸取石榴補血糖漿0.5mL，至100mL容量瓶中，按“2.1”項下方法進行溶液的制備，共6份，在375nm波長下測定樣品吸光度，RSD=1.79%，結(jié)果表明重復(fù)性良好，結(jié)果見表1。

表1 重復(fù)性考察結(jié)果（n=6）

2.7 穩(wěn)定性考察

精密吸取石榴補血糖漿0.5mL，至100mL容量瓶中，按“2.1”項下方法進行溶液的制備，在波長為375nm下于0h、1h、2h、4h、6h、8h、10h、24h 測定樣品吸光度，RSD=0.708%，結(jié)果表明穩(wěn)定性良好，結(jié)果見表2。

表2 穩(wěn)定性考察結(jié)果（n=8）

2.8 加樣回收率考察

精密吸取石榴補血糖漿0.25mL（濃度為238.3μg），共9份，至100mL容量瓶中，分別按照50%、100%、150%加入高、中、低濃度的槲皮素對照品（136μg/mL）1mL、2mL、3mL 各 3份，加 90%乙醇稀釋，超聲處理20分鐘，放冷，定容至刻度，搖勻，在波長為375nm下測定吸光度，平均回收率為101.11%，，RSD=1.17%，結(jié)果表明，該方法回收率良好，結(jié)果見表3。

表3 加樣回收率考察結(jié)果（n=9）

2.9 樣品含量測定

取15批石榴補血糖漿樣品，均為新疆維吾爾藥業(yè)有限責任公司生產(chǎn)，精密量取0.5mL樣品置于100mL容量瓶中，并設(shè)置平行樣，按“2.1”項下方法進行溶液的制備。在375nm下測定吸光度，計算計算含量，結(jié)果見圖3，平均含量為775.21μg/mL。

圖1 15批樣品總黃酮含量測定（n=15）

3 討論

黃酮類化合物泛指2個具有酚輕基的苯環(huán)通過中央三碳原子相互連接而成的一系列化合物[6]。有研究表明，黃酮類化合物有抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫、抗衰老、降血脂作用[7]。目前，對石榴的研究比較多，包括對石榴皮、石榴籽、石榴花等的成分和藥理作用研究較多，對于石榴補血糖漿只有1篇藥理藥效的研究[8]，于石榴補血糖漿的化學成分研究還未見報道。

實驗以槲皮素為對照品，繪制標準曲線，采用紫外-可見分光光度法對石榴補血糖漿中總黃酮進行含量測定，精密性、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和加樣回收率均符合規(guī)定。實驗結(jié)果表明：該方法簡便可行，可用于石榴補血糖漿中總黃酮含量測定。