補(bǔ)氣活血生發(fā)酊對(duì)小鼠雄激素性脫發(fā)的影響

景 林余志杰胡婷婷劉蜀坤彭春橋?qū)O 濤?

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，四川 成都611137； 2.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川 成都611137）

正常的脫發(fā)是指一種頭發(fā)自行脫落的現(xiàn)象。病理性的脫發(fā)是指頭發(fā)過(guò)度脫落或者異常脫落。在所有的脫發(fā)中尤以雄激素性脫發(fā)最為常見(jiàn)，是一種常見(jiàn)的慢性皮膚?。?］。該病雖多見(jiàn)于青壯年男性，但也有少量女性患者。男性雄激素性脫發(fā)患者一般表現(xiàn)為發(fā)際線后移乃至一發(fā)不生，而女性常表現(xiàn)為頭發(fā)彌漫性稀疏。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)約有25%的成年男性正飽受脫發(fā)疾病的困擾。目前脫發(fā)已成為臨床皮膚科高發(fā)疾病之一，給患者的身心健康帶來(lái)巨大的負(fù)擔(dān)，是一種臨床亞健康的表現(xiàn)。近年來(lái)，隨著社會(huì)的發(fā)展，生活節(jié)奏的加快，某種程度上加快了該病發(fā)病率的升高。目前該病的有效治療方法局限、研究進(jìn)展緩慢，故該類疾病的針對(duì)性治療研究仍是相關(guān)科研工作的熱點(diǎn)，且理論和臨床意義重大。用于治療雄激素性脫發(fā)的實(shí)驗(yàn)研究及臨床研究文獻(xiàn)較多，相關(guān)作用機(jī)制目前主要是與雄激素代謝異常等有關(guān)，但研究較分散，機(jī)制還有待進(jìn)一步明確。成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院研制的補(bǔ)氣活血生發(fā)酊（外用生發(fā)酊劑），由側(cè)柏葉、紅花、黃芪等中藥組成，具有通絡(luò)生發(fā)、益氣養(yǎng)血的功效，治療雄激素性脫發(fā)。據(jù)此，本實(shí)驗(yàn)探究補(bǔ)氣活血生發(fā)酊治療雄激素性脫發(fā)藥效學(xué)評(píng)價(jià)及機(jī)制。

1 材料

1.1 藥物 補(bǔ)氣活血生發(fā)酊（臨床經(jīng)驗(yàn)方，批號(hào)150703）由黃芪、側(cè)柏葉、紅花等配伍組成，生藥量為0.2 g／mL。將配方藥材與75% 乙醇（1∶5）回流提取3 次，1 次／h。首次提取液移出另存，剩下2 次提取液減壓濃縮直至無(wú)醇味，與首次提取液混勻，然后低溫冷藏72 h 后過(guò)濾，調(diào)整濾液乙醇體積分?jǐn)?shù)為55%，制成1 000 mL 酊劑。陽(yáng)性藥2%米諾地爾（山西振東安特生物制藥有限公司，批號(hào)20170604），臨床用法為1～2 次／d，1 mL／次，每天用量小于等于2 mL，本次實(shí)驗(yàn)中，每只每次給藥0.24 mL，1 次／d。

1.2 給藥劑量換算 補(bǔ)氣活血生發(fā)酊成人每日劑量，按照成人頭皮平均表面積為600 cm2計(jì)算，給藥1 次／d，6 mL／次，則臨床上成人每天單位面積皮膚用藥量為（6 mL／次×1 次／天）÷600 cm2＝0.01 mL／cm2。本次實(shí)驗(yàn)小鼠給藥面積為2 cm×3 cm＝6 cm2則給藥量為（6 mL／次×1 次／天）÷600 cm2×6 cm2＝0.06 mL。將臨床用量折算的等效劑量作為本次實(shí)驗(yàn)的低劑量。實(shí)驗(yàn)分為補(bǔ)氣活血生發(fā)酊高、中、低劑量組，其生藥量分別為200、100、50 mg／mL，每只每次給藥0.24 mL，1 次／d。

1.3 動(dòng)物 SPF 級(jí)，KM 小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2）g。由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，檢驗(yàn)檢疫后備用。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（川）2015-030。

1.4 試劑 丙酸睪酮注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，批號(hào)1508221）；血清睪酮試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)20180302）；雌二醇試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)20180302）；肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)20180302）；多聚甲醛（合肥白鯊生物科技有限公司，批號(hào)1707182）；無(wú)水乙醇（成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)2014051001）；氯化鈉注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)L117110801）；石蠟（中國(guó)石油化工有限公司，批號(hào)69018961）；BSAO（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)714094）；DAB 濃縮型試劑盒（上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司，批號(hào)FL-6001）；中性樹(shù)脂（上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司，批號(hào)G8590）；廣譜二抗（上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司，批號(hào)D2004）；BCA蛋白定量試劑盒（美國(guó)Thermo 公司，批號(hào)PICPI23223）；RIPA 組織細(xì)胞快速裂解液（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)R0020）；Tris-HCl，pH 8.8 電泳緩沖液（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)T1010）；Tris-HCl，pH 6.8電泳緩沖液（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)T1020）；10% SDS（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)S1010）；10% 過(guò)硫酸銨（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)A1030）；TEMED（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)T8090）；蛋白上樣緩沖液（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)P1015）；蛋白預(yù)染Marker（加拿大Fermentas公司，批號(hào)SM1811）；NC 膜（美國(guó)millipore 公司，批號(hào)HATF00010）；PBS 磷酸鹽緩沖液（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)P1010）；脫脂奶粉（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)D8340）；Tween-20（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)T8220）；發(fā)光液（美國(guó)millipore 公司，批號(hào)WBKLS0100）。

1.5 儀器 U410-86VarioskanFlash 酶標(biāo)儀（美國(guó)賽默飛世爾科技公司）；allegra X-30 r centrifuge 高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)beckman coulter 公司）；Tanon-5200 成像系統(tǒng)（上海天能科技有限公司）；TE77XP 電轉(zhuǎn)儀（美國(guó)Hoefer 公司）；mini protean 3 cell 電泳儀（美國(guó)Bio Rad 公司）；BSA224SCW 分析天平（德國(guó)Sartorius 公司）；CK40-F200 倒置顯微鏡（日本Olympus Optical 公司）；Milli-Q reference 超純水制備儀（德國(guó)默克密理博公司）；移液槍（德國(guó)Eppendorf公司）；GZX-GF 干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）；SHHW21-600 電熱恒溫水箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；SB-5200DTDN 超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；XW-80 A 旋渦混合儀（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。

2 方法

2.1 造模 取清潔級(jí)、健康并且毛發(fā)正常，體質(zhì)量（20±2）g，成年KM 小鼠90 只，雌雄各45 只，每只小鼠分籠飼養(yǎng)，每只按照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行編號(hào)。每只小鼠在其頸下平行背部用苦味酸標(biāo)出2 cm×3 cm 的區(qū)域，作為脫毛觀察區(qū)。所有小鼠在合適的環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周。將丙酸睪酮注射液用優(yōu)質(zhì)的注射用油進(jìn)行稀釋，超聲處理，待混勻后配成質(zhì)量濃度為5 mg／mL 的溶液。隨機(jī)選取20 只作為空白組，其余小鼠不分組。參照參考文獻(xiàn)［2-4］造模方法，除空白組注射生理鹽水外，其余未分組小鼠按照5 mg／kg 的劑量進(jìn)行背部皮下注射，持續(xù)注射28 d 丙酸睪酮注射液，建立所需模型?？瞻捉M給予等量的生理鹽水，形成對(duì)照。造模結(jié)束后，分別從造模組和空白組中各隨機(jī)選出10 只小鼠，頸部脫臼處死，評(píng)價(jià)模型是否成功。

2.2 造模成功評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 造模成功的標(biāo)準(zhǔn)可以通過(guò)肉眼觀察、組織病理學(xué)以及血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行判定。如圖1 所示，肉眼觀察結(jié)果，在開(kāi)始造模3 周后，注射了丙酸睪酮的小鼠背部毛發(fā)光澤度漸失，毛發(fā)顏色灰暗，易斷，繼續(xù)注射丙酸睪酮1 周后實(shí)驗(yàn)小鼠背毛逐漸出現(xiàn)脫落。模型組小鼠背部毛發(fā)相比于空白組小鼠毛發(fā)稀疏，未脫毛發(fā)變得纖細(xì)、易斷。毛發(fā)脫落一般從頭部向尾部發(fā)展，小鼠毛發(fā)油膩。如圖2、表1～2 所示，病理學(xué)結(jié)果，可見(jiàn)毛囊微小化，毛囊變細(xì)、變??；總毛囊數(shù)量減少，終毛／毳毛比例下降。如圖3、表3 所示，血清學(xué)指標(biāo)結(jié)果，血清睪酮T 升高；雌二醇降低；T／E2 的比值升高；HGF 降低。此時(shí)可認(rèn)為雄激素性脫毛模型建立成功。

表1 組織病理學(xué)表現(xiàn)

圖1 小鼠造模體征結(jié)果

圖2 小鼠造模毛囊橫切及縱切面

圖3 Western bolt 檢測(cè)HGF 蛋白表達(dá)

表2 造模對(duì)小鼠總毛囊數(shù)、終毛數(shù)、毳毛數(shù)、終毛／毳毛的影響（， n＝10）

表2 造模對(duì)小鼠總毛囊數(shù)、終毛數(shù)、毳毛數(shù)、終毛／毳毛的影響（， n＝10）

注：與空白組比較，?P＜0.05，??P＜0.01。

表3 造模對(duì)小鼠T、E2、HGF 的影響（， n＝10）

表3 造模對(duì)小鼠T、E2、HGF 的影響（， n＝10）

注：與空白組比較，??P＜0.01。

2.3 分組及給藥 取模型組60 只SPF 級(jí)健康成年小鼠，隨機(jī)分為模型組、55%乙醇組、米諾地爾擦劑組及補(bǔ)氣活血生發(fā)酊低、中、高劑量組，每組雌雄各5 只，每只小鼠分籠飼養(yǎng)。模型組不給藥，55%乙醇組和米諾地爾擦劑組分別給予55%乙醇0.24 mL／只，20 mg／mL 米諾地爾擦劑0.24 mL／只。補(bǔ)氣活血生發(fā)酊高、中、低劑量組分別給予補(bǔ)氣活血生發(fā)酊生藥量200、100、50 mg／mL，每只0.24 mL。1 次／d，連續(xù)涂抹30 d。

2.4 肉眼及毛發(fā)鏡觀察小鼠毛發(fā)脫落情況 實(shí)驗(yàn)最后1 天肉眼及使用毛發(fā)鏡觀察小鼠毛發(fā)脫落情況。實(shí)驗(yàn)整個(gè)期間對(duì)各組小鼠背部給藥區(qū)皮膚局部是否紅腫、水腫、糜爛、滲液等異常現(xiàn)象進(jìn)行觀察并記錄。

2.5 小鼠病理組織及毛囊相關(guān)指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死所有小鼠，取背部實(shí)驗(yàn)區(qū)皮膚（面積約2 cm×3 cm）進(jìn)行相應(yīng)處理，觀察毛囊的縱切面及橫斷面；并在顯微鏡（×100）下對(duì)毛囊數(shù)、終毛及毳毛數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)算終毛／毳毛的比例。

2.6 小鼠血清睪酮T、雌二醇以及HGF 的測(cè)定 第8 周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，小鼠進(jìn)行眼眶采血，常溫靜置30 min，5 000 r／min 離心10 min，移出血清，于-80 ℃冰箱保存，按照試劑盒中所列方法檢測(cè)小鼠血清睪酮T、雌二醇以及HGF 水平。

2.7 免疫組化及Western Blot 法檢測(cè)HGF 蛋白表達(dá) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死所有小鼠，取背部實(shí)驗(yàn)區(qū)皮膚（面積約2 cm×3 cm），-80 ℃保存。按照免疫組化及WB 相關(guān)操作步驟對(duì)HGF 蛋白表達(dá)進(jìn)行測(cè)定。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 22.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以（）表示，多組間比較采用方差分析。以P≤0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 小鼠毛發(fā)脫落情況 如圖4 所示，空白組背部標(biāo)志區(qū)域毛發(fā)，未見(jiàn)明顯毛發(fā)脫落；模型組、55% 乙醇組背部標(biāo)志區(qū)域毛發(fā)明顯減少、變薄、毛色灰暗無(wú)光澤；米諾地爾擦劑組背部標(biāo)志區(qū)域毛發(fā)較空白組少而薄，可見(jiàn)毛發(fā)脫落區(qū)域，毛色無(wú)變化；補(bǔ)氣活血生發(fā)酊低劑量組背部標(biāo)志區(qū)域毛發(fā)較空白組略薄而少，可見(jiàn)少量毛發(fā)脫落區(qū)域，毛色光澤；補(bǔ)氣活血生發(fā)酊中劑量組背部標(biāo)志區(qū)域毛發(fā)較空白組略薄而少，偶見(jiàn)少量毛發(fā)脫落區(qū)域，毛色光澤；補(bǔ)氣活血生發(fā)酊高劑量組背部標(biāo)志區(qū)域毛發(fā)較空白組略薄而少，未見(jiàn)毛發(fā)脫落區(qū)域，毛色光澤。如圖5 所示，毛發(fā)鏡下，空白組小鼠毛發(fā)濃密，皮膚完全，基本不見(jiàn)裸露皮膚；模型組、55%乙醇組毛發(fā)明顯變少、細(xì)小、脫落，可明顯看到裸露皮膚；米諾地爾擦劑組背部毛發(fā)變少，未見(jiàn)小塊裸露皮膚；補(bǔ)氣活血生發(fā)酊低劑量組背部毛發(fā)變少，可見(jiàn)小塊裸露皮膚；補(bǔ)氣活血生發(fā)酊中劑量組毛發(fā)稍微減少，少見(jiàn)小塊裸露皮膚；補(bǔ)氣活血生發(fā)酊高劑量組毛發(fā)大致相同，未見(jiàn)小塊裸露皮膚。

圖4 補(bǔ)氣活血生發(fā)酊對(duì)小鼠毛發(fā)的影響（肉眼觀察）

圖5 補(bǔ)氣活血生發(fā)酊對(duì)小鼠毛發(fā)的影響（毛發(fā)鏡觀察）

3.2 皮膚毛囊縱切面情況 如圖6 所示，空白組毛囊數(shù)量及生長(zhǎng)期毛囊數(shù)量多，毛囊呈活躍增生狀態(tài)；模型組和55%乙醇組毛囊數(shù)量減少，生長(zhǎng)期毛囊數(shù)量減少，增生不活躍，休止期及退行期毛囊增多，皮下組織明顯變??；米諾地爾擦劑組及補(bǔ)氣活血生發(fā)酊低、中、高劑量組生長(zhǎng)期毛囊較多，增生較活躍，皮下組織較空白組和55%乙醇組均略有變薄，4 組之間毛囊增生狀態(tài)區(qū)別不大。

圖6 各組小鼠用藥后毛囊縱斷面比較（HE，×100）

3.3 皮膚毛囊橫切面情況 如圖7 所示，空白組，毛囊和終毛很多，毳毛比較少；模型組、55% 乙醇組，視野內(nèi)可見(jiàn)毛囊總數(shù)減少；米諾地爾擦劑組、補(bǔ)氣活血生發(fā)酊低、中、高劑量組，毛囊總數(shù)較空白組略少，終毛數(shù)減少，毳毛增多，4 組間差異不明顯。

圖7 各組小鼠用藥后毛囊縱斷面比較（HE，×100）

3.4 皮膚組織毛囊數(shù)、終毛數(shù)、毳毛數(shù)及終毛／毳毛比值情況 如表4 所示，與空白組比較，模型組、55% 乙醇組毛囊數(shù)、終毛數(shù)減少（P＜0.01），55%乙醇組毛／毳毛比值減少（P＜0.05）；與模型組和55%乙醇組比較，米諾地爾擦劑組和補(bǔ)氣活血生發(fā)酊組毛囊數(shù)、終毛數(shù)均增加（P＜0.05，P＜0.01）。

表4 補(bǔ)氣活血生發(fā)酊對(duì)小鼠毛囊數(shù)、終毛數(shù)、毳毛數(shù)及終毛／毳毛比值的影響（， n＝10）

表4 補(bǔ)氣活血生發(fā)酊對(duì)小鼠毛囊數(shù)、終毛數(shù)、毳毛數(shù)及終毛／毳毛比值的影響（， n＝10）

注：與空白組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與模型組比較，?P＜0.05，??P＜0.01；與55%乙醇組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。

3.5 補(bǔ)氣活血生發(fā)酊對(duì)小鼠血清睪酮、雌二醇和HGF 水平的影響 如表5 所示，與空白組比較，模型組、55% 乙醇組血清睪酮水平升高（P＜0.01），雌二醇和HGF 水平降低（P＜0.05，P＜0.01）；與模型組、55% 乙醇組比較血清睪酮水平降低（P＜0.01），雌二醇和HGF 水平增加（P＜0.05）。

3.6 補(bǔ)氣活血生發(fā)酊對(duì)小鼠皮膚組織HGF 蛋白表達(dá)的影響 免疫組化結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組、55% 乙醇組皮膚組織HGF 蛋白表達(dá)減少（圖8、表6）。Western blot 結(jié)果也顯示，與空白組比較，模型組、55%乙醇組皮膚組織HGF 蛋白表達(dá)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖9。

表5 補(bǔ)氣活血生發(fā)酊對(duì)小鼠血清中睪酮、雌二醇和HGF 水平的影響（， n＝10）

表5 補(bǔ)氣活血生發(fā)酊對(duì)小鼠血清中睪酮、雌二醇和HGF 水平的影響（， n＝10）

圖8 免疫組化檢測(cè)小鼠HGF 蛋白表達(dá)

表6 免疫組化檢測(cè)小鼠HGF 蛋白表達(dá)結(jié)果（， n＝8）

表6 免疫組化檢測(cè)小鼠HGF 蛋白表達(dá)結(jié)果（， n＝8）

圖9 Western blot 檢測(cè)小鼠HGF 蛋白表達(dá)

表7 Western blot 檢測(cè)HGF 蛋白表達(dá)結(jié)果（， n＝8）

表7 Western blot 檢測(cè)HGF 蛋白表達(dá)結(jié)果（， n＝8）

注：與空白組比較，＃P＜0.05。

4 討論

臨床上將脫發(fā)類型分為斑禿、雄激素性脫發(fā)、內(nèi)分泌生理性改變脫發(fā)、內(nèi)分泌異常性改變脫發(fā)等多種類型［5］。其中雄激素性脫發(fā)患病率高、病情頑固、治療困難，是臨床上最常見(jiàn)的脫發(fā)病之一。雄激素性脫發(fā)是一種常見(jiàn)的遺傳性疾病，其和雄激素的表達(dá)失常存在一定的相關(guān)性，研究結(jié)果表明其發(fā)病的主要原因?yàn)檫z傳易感性及頭皮毛囊局部雄激素代謝紊亂。雄激素性脫發(fā)表現(xiàn)出明顯的家族遺傳特征，Hamilton 對(duì)家族遺傳與雄激素性脫發(fā)的關(guān)系進(jìn)行了研究，且證實(shí)了這二者的相關(guān)性［6］。毛囊體積及毛囊密度漸漸變小，終毛逐漸轉(zhuǎn)化為毳毛，終毛／毳毛比值逐漸降低是雄激素性脫發(fā)的主要病理表現(xiàn)。西醫(yī)認(rèn)為雄激素性脫發(fā)原因主要來(lái)自以下幾個(gè)方面，毛發(fā)生長(zhǎng)周期及毛囊的改變（生長(zhǎng)期／休止期比例下降、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子的表達(dá)在雄激素與其受體結(jié)合后增加，誘導(dǎo)了毛乳頭細(xì)胞的凋亡及毛囊休止期的延長(zhǎng)）、雄激素的作用、雄激素受體（Androgen receptor，AR）基因變異，其中激素代謝異常與之高度相關(guān)。此外，研究發(fā)現(xiàn)雄激素性脫發(fā)和二氧睪酮（DHT）的表達(dá)水平存在密切的相關(guān)性［7-8］，而其表達(dá)升高和毛囊單位的Ⅱ型5α 還原酶有一定關(guān)系［9］。睪酮（T）是男性的主要雄激素，在毛囊內(nèi)可檢測(cè)到DHT 和雌二醇（E2）等相關(guān)的物質(zhì)，DHT 進(jìn)入到頭部區(qū)域后和毛囊內(nèi)的Ⅱ型5α-還原酶結(jié)合形成一定的復(fù)合物，這些復(fù)合物進(jìn)入毛囊細(xì)胞，可以對(duì)毛囊內(nèi)的凋亡信號(hào)通路起到一定的調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而影響了真皮乳頭與毛囊細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制，且引發(fā)微型毛囊轉(zhuǎn)變，從而導(dǎo)致脫發(fā)［10］。而由性腺分泌的E2 可以起到一定促進(jìn)毛囊生長(zhǎng)的作用。在正常情況下，睪酮與E2 的水平一般是固定的，且二者相對(duì)平衡。但在5α-還原酶的活性很高時(shí)，睪酮能夠轉(zhuǎn)化為DHT，DHT 的活性顯著高于睪酮，這樣其可以高效地結(jié)合雄激素從而導(dǎo)致毛囊內(nèi)這二者的平衡比例被打破，引發(fā)毛發(fā)脫落。在毛囊的生長(zhǎng)周期中很多因子的表達(dá)水平都出現(xiàn)了一定的變化，而這些因子可以調(diào)節(jié)毛囊的生長(zhǎng)過(guò)程。其中HGF 因子可以促進(jìn)表皮細(xì)胞的分裂，且加速了其分化，試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，HGF 對(duì)人類體外培養(yǎng)毛囊的生長(zhǎng)有一定促進(jìn)作用，但所得結(jié)果存在一定的差異［11-14］。范衛(wèi)新等［15］在進(jìn)行此方面的研究時(shí)，通過(guò)RTPCR 技術(shù)分析了齊墩果酸對(duì)小鼠觸須毛囊生長(zhǎng)周期毛囊HGF 的影響，結(jié)果表明這種物質(zhì)可以提高毛囊HGFmRNA的表達(dá)水平，并據(jù)此發(fā)揮了促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的效果。因此在本實(shí)驗(yàn)中，除了對(duì)試驗(yàn)小鼠毛發(fā)一般觀察、皮膚組織切片觀察之外，對(duì)小鼠睪酮、E2 及HGF 也進(jìn)行測(cè)量，研究結(jié)果表明涂抹補(bǔ)氣活血生發(fā)酊后，試驗(yàn)小鼠體內(nèi)睪酮水平降低、E2 及HGF 升高，激素平衡狀態(tài)得以恢復(fù)。

綜上所述，補(bǔ)氣活血生發(fā)酊育發(fā)機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)了動(dòng)物體內(nèi)激素的水平有一定關(guān)系。它明顯降低模式小鼠體內(nèi)睪酮水平，提高E2 水平，調(diào)節(jié)小鼠體內(nèi)激素的水平，從而促進(jìn)毛發(fā)的生長(zhǎng)。