新生兒ABO 溶血病實驗診斷的方法學(xué)與價值分析

陳繼良，章馳

江蘇省泗洪縣婦產(chǎn)兒童醫(yī)院，檢驗科 223900

臨床上對于溶血癥主要分為ABO 溶血癥和RH 溶血癥，RH 溶血率在我國較低， 因為RH 陽性占人口的99%，RH 陰性不到1%。RH 溶血通常發(fā)生在第2 胎。當(dāng)母親為RH 陰性而父親為RH 陽性時，胎兒將繼承父親的RH 陽性。 RH 抗原可以在分娩時進入母親的血液循環(huán)，刺激其抗體的產(chǎn)生。 在第2 次懷孕時，如果胎兒是RH 陽性，母體的RH 抗體會迅速增加，可以通過胎盤進入胎兒血液循環(huán)，導(dǎo)致胎兒溶血，其中，RH 溶血癥狀胎兒的發(fā)病率較高。 新生兒的ABO 溶血?。ˋBO hemolytic disease of the newborn, ABO HDN） 是指出生的新生兒的血型與母親血型不符合， 而導(dǎo)致的溶血現(xiàn)象[1]。 大多數(shù)母親為 O 型，新生兒為 A 型或者 B 型，主要原因是當(dāng)胎兒從父親處取得的血型抗原與母親不同時，進入母親體內(nèi)會刺激母親產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。 它可以通過胎盤進入胎兒體內(nèi)， 抗原抗體與胎兒體內(nèi)紅細胞發(fā)生反應(yīng)，引起溶血。 該研究方便選取2017 年7 月—2019 年3 月232 例疑似新生兒ABO 溶血病作為研究對象，篩選出診斷最為準(zhǔn)確的診斷方法，并探討早期診斷早期干預(yù)的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析方便收集的臨床疑似ABO 溶血病的新生兒案例232 例， 其中有118 例男性新生兒，114 例女性新生兒， 年齡范圍：3 d 以內(nèi) 133 例，4～7 d 76 例，7 d以上23 例，早產(chǎn)兒68 例，足月產(chǎn)兒141 例，過期產(chǎn)兒23 例。該次研究所有新生兒直系親屬全部簽署同意書，并經(jīng)過倫理委員會批準(zhǔn)，納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均初步診斷為ABO 溶血病，臨床主要表現(xiàn)為貧血、黃疸、肝脾腫大、高膽紅素血癥等；排除標(biāo)準(zhǔn)：感染，凝血障礙，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏，其他新生兒并發(fā)癥，血液疾病[2]。

1.2 檢查方法

紅細胞懸液，血清和放散液的制備[3]：將新生兒的血液不放入抗凝劑，采集后直接離心，上層為血清，下層為紅細胞，用生理鹽水充分洗滌患兒紅細胞4 次，保留最后一次洗滌液， 向洗滌后的紅細胞內(nèi)加入等量的生理鹽水或6%牛血清白蛋白，在56℃水浴中振蕩混勻10 min，在預(yù)溫的離心管中離心后，立即轉(zhuǎn)移放散液到潔凈的試管中。

微柱凝膠法[4]：用微柱凝膠卡標(biāo)記直抗，游離、放散，在微柱的凝膠孔中加入新生兒的紅細胞懸液，血清和放散液，并在血清和放散液的孔中加入同型對照，用最后一次洗滌液做平行對照，孵育15 min 后，用卡式離心機進行離心，分析結(jié)果。 紅細胞聚集在凝膠卡上或中部者為陽性，紅細胞沉積凝膠卡底部者為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

分析微柱凝膠法溶血3 項實驗結(jié)果。 對3 項試驗同時陽性者可確診新生兒溶血??； 未同時出現(xiàn)陽性者以抗體釋放試驗陽性為診斷標(biāo)準(zhǔn)； 直接抗人球蛋白試驗和（或）游離抗體試驗陽性而抗體釋放試驗陰性者為可疑，結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合分析[5]。

2 結(jié)果

2.1 溶血3 項試驗結(jié)果

微柱凝膠法的溶血3 項實驗結(jié)果為1 例 （0.43%）直接抗人球蛋白試驗陽性，1 例（0.43%）游離抗人球蛋白試驗陽性，67 例 （28.88%） 熱放散試驗陽性，1 例（0.43%） 直抗陽性+游離抗陽性，2 例 （0.86%） 直抗陽性+熱放散陽性，73 例（31.47%）游離抗陽性+熱放散陽性，13 例（5.60%）直抗陽性+游離抗陽性+熱放散陽性，74 例（31.90%）全部陰性。 見表1。

3 討論

新生兒ABO 溶血癥 （ABO hemolytic disease of the newborn, ABO HDN）臨床較為常見，主要就是因為母嬰血型不合，導(dǎo)致的同族免疫性溶血，溶血又是指紅細胞膜破裂，紅細胞發(fā)生溶解的現(xiàn)象[6]。 主要原因是當(dāng)胎兒從父親處取得的血型抗原與母親不同時， 進入母親體內(nèi)后會刺激母親產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。 它可以通過胎盤進入胎兒體內(nèi)，抗原抗體與胎兒紅血球發(fā)生反應(yīng)，引起溶血[7]。在ABO 系統(tǒng)中，因為具有抗A 或O 型人的數(shù)量高于A 型和B 型的數(shù)量：A 抗原比B 抗原強，所以母親型和胎兒型更容易生病[8]。 ABO 溶血大多在第1 胎上發(fā)生， 母體已經(jīng)受到類似自然界中A 和B 物質(zhì)的抗原的刺激，并與抗A 或抗B 抗體有關(guān)聯(lián)。 RH 溶血的免疫抗體只能由人的血細胞作為抗原刺激而產(chǎn)生。 胎兒紅細胞在分娩時進入母親體內(nèi)時，除了有輸血史外，第1 胎出現(xiàn)溶血是罕見的[9]。我國大部分人的RH 血型為陽性，因此RH 溶血在我國是罕見的。 ABO 溶血的新生兒會有黃疸出現(xiàn)并迅速增加的癥狀。 并且隨著黃疸的加深，可出現(xiàn)貧血、肝脾腫大，嚴(yán)重時會出現(xiàn)膽紅素腦病。 也可導(dǎo)致心臟衰竭、全身水腫，甚至死亡[10]。嚴(yán)重危害新生兒的健康和生命， 因此對于ABO 的溶血及時診斷是十分必要的， 只有早診斷早干預(yù)才會保障新生兒的健康和生命。 溶血3 項試驗是指的直接抗球蛋白試驗、游離抗體試驗、放散試驗，直接抗球蛋白試驗主要是檢測新生兒的紅細胞是否被來自母體的IgG 抗A 或抗B 所致敏，游離抗體試驗是檢測血清，如果新生兒血清中發(fā)現(xiàn)與其紅細胞不配合的IgG 抗A(B)時，表明嬰兒體內(nèi)有抗體，可能受害。

該次研究， 微柱凝膠法的溶血3 項實驗結(jié)果為1例（0.43%）直接抗人球蛋白試驗陽性，1 例（0.43%）間接抗人球蛋白試驗陽性，67 例（28.88%）熱放散試驗陽性，1 例（0.43%）直抗陽性+間抗陽性，2 例（0.86%）直抗陽性+熱放散陽性，73 例（31.47%）間抗陽性+熱放散陽性，13 例（5.60%）直抗陽性+間抗陽性+熱放散陽性，74 例（31.90%）全部陰性。 覃日吉等[11]依據(jù)其所選擇的ABO血型不合致HDN 的患兒， 應(yīng)用微柱凝膠卡法實施檢查，確診率為98.9%，顯著高于試管法86.9%。 另外，微柱凝膠卡組抗體釋放試驗、游離抗體試驗、抗球蛋白試驗陽性率依次為100.0%，96.7%，97.8%， 高于試管組77.2%，75.0%，68.5%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 與該次研究結(jié)果一致。

表1 微柱凝膠法的溶血3 項實驗結(jié)狀況[n(%)]

微柱凝膠法是用微柱凝膠卡標(biāo)記直抗， 游離、放散，在微柱的凝膠孔中加入新生兒的紅細胞懸液，血清和放散液，并在血清和放散液的孔中加入同型對照，當(dāng)紅細胞聚集在凝膠卡上或中部者為陽性， 紅細胞沉積凝膠卡底部者為陰性[12]。 該方法血清、紅細胞懸液以及放散液的用量較小，檢測結(jié)果較為準(zhǔn)確。 并且通過調(diào)節(jié)凝膠的濃度，使得陰陽性的區(qū)分更為明顯，診斷更為準(zhǔn)確。 微柱凝膠法則是最新的免疫學(xué)測量技術(shù)，微柱凝膠法中使用的微柱含有大分子溶液，無紅細胞清洗，即可進行抗人球蛋白試驗，檢測靈敏度得到大大的提高，也可用于其他檢測方法難以檢測的弱凝集試樣， 使其被準(zhǔn)確的檢測。 此外，微柱凝膠法對于操作者的技術(shù)和驗證要求較低，易操作，短時間內(nèi)即可完成測試，相關(guān)因素所造成的影響程度明顯降低，易于解釋，可作為常規(guī)的檢測方法。另外ABO 溶血會導(dǎo)致新生兒的心臟衰竭，甚至是死亡， 因此對于ABO 溶血的早期診斷也是十分重要的， 一般對于ABO 溶血的早期診斷主要是檢測孕婦血清中的IgG 亞類， 研究證明新生兒ABO 溶血發(fā)病隨母體IgG 抗體效價水平升高而上升， 對于夫妻血型不合的O 型血孕婦應(yīng)提早進行IgG 抗體效價水平和IgG 亞類含量的檢測， 早期的診斷可以降低ABO 溶血發(fā)病率。

綜上所述， 在新生兒ABO 溶血病診斷中使用微柱凝膠法方法，與試管法相比操作更為簡單、靈敏，特異性也較高，結(jié)果客觀，對新生兒ABO 溶血病診斷的診斷具有較大的臨床價值。