飼料中添加不同油脂對(duì)草魚生長(zhǎng)、肌肉品質(zhì)的影響

楊 鑫，張正洲，劉 瑜，王自蕊，姜文灝，高 淼，王 穎，胡重華，張文平，周秋白，宋 明

（江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，江西 南昌 330045）

【研究意義】脂肪作為魚類重要能量的來(lái)源，不僅能增加飼料的適口性，促進(jìn)脂溶性維生素的消化吸收，起到節(jié)約蛋白質(zhì)的作用，同時(shí)也是生物體內(nèi)膜脂及機(jī)體合成多不飽和脂肪酸（PUFA）的主要來(lái)源[1-3]。此外，脂肪有一個(gè)其它物質(zhì)無(wú)法取代的作用，即供給魚體所需要的必需脂肪酸?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】實(shí)驗(yàn)己經(jīng)證明，食物脂肪所提供的必需脂肪酸特別是n-3系列高度不飽和脂肪酸（HUFA）能提高水產(chǎn)動(dòng)物親體的繁殖力[4-5]以及提高水產(chǎn)動(dòng)物幼體的生長(zhǎng)率、存活率[6-7]。對(duì)淡水魚而言，脂肪的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值多取決于其不飽和脂肪酸的種類及含量，飼料中添加很少的該類脂肪酸，尤其是n-3系列與n-6系列的合理搭配，可以明顯提高魚類的生長(zhǎng)速度[3，8]。【本研究切入點(diǎn)】魚油中含有大量的不飽和脂肪酸，是魚類配合飼料的理想脂肪源[9]，具有多種優(yōu)勢(shì)[10]。但近年來(lái)，隨著海洋資源的逐年減少，魚油的產(chǎn)量不斷降低[11]，而價(jià)格則不斷上升，因此在飼料中降低魚油的用量來(lái)降低飼料的成本是一種趨勢(shì)?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】草魚（Ctenopharyngodon idellus）作為四大家魚之一，其養(yǎng)殖規(guī)模極大，據(jù)《中國(guó)漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒2018》[12]統(tǒng)計(jì)，2017年草魚產(chǎn)量達(dá)535萬(wàn)t。因此，在草魚飼料中添加恰當(dāng)?shù)闹驹捶浅Ｖ匾?。本試?yàn)以豆油、魚油及二者均勻混合的油脂作為飼料中的脂肪源，以草魚為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，探究飼料中添加不同脂肪源對(duì)草魚生長(zhǎng)、肌肉營(yíng)養(yǎng)成分及脂肪酸組成的影響。

1 材料方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)用草魚及基礎(chǔ)樣草魚來(lái)源于江西省南昌市東西湖區(qū)揚(yáng)子洲農(nóng)場(chǎng)，初期采用常規(guī)飼料（無(wú)外加脂肪）馴食，試驗(yàn)分組時(shí)，平均體質(zhì)量為（1 318.88±2.47）g/尾，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10尾。

1.2 試驗(yàn)飼料

試驗(yàn)日糧分為3組，以粉碎后過(guò)60目的魚粉、豆粕、菜粕、玉米等作原料，配制為3種等能等氮飼料。第1組為豆油組，以4%豆油作為脂肪源，第2組為混油組，以2%豆油+2%魚油作為脂肪源，第3組為魚油組，以4%魚油作為脂肪源。飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。飼料配置完成后經(jīng)制粒機(jī)調(diào)質(zhì)制粒，后風(fēng)干并保存于-20℃冰箱備用。其中，豆油為一級(jí)大豆油，魚油為深海魚油，購(gòu)買自浙江聯(lián)興飼料科技有限公司。

表1 飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Tab.1 Composition and nutrient levels of experimental diets（DM basis） %

1.3 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在江西農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)基地進(jìn)行。在面積為200 m2（平均水深1.5 m）的池塘中設(shè)置網(wǎng)箱，網(wǎng)箱規(guī)格為2 m×3 m×1.2 m，將各組試驗(yàn)草魚隨機(jī)分到9個(gè)網(wǎng)箱中。正式試驗(yàn)開始前先用試驗(yàn)料馴化1周，然后開始正式投喂，于每天08:00，晚18:00投喂，以飽食為準(zhǔn)，試驗(yàn)期為60 d，試驗(yàn)期間水溫25～32℃，溶解氧濃度＞8.0 mg/L，pH 7.8～8.4，氨氮濃度＜0.2 mg/L，亞硝酸鹽濃度＜0.01 mg/L。

1.4 樣品采集

開始養(yǎng)殖試驗(yàn)前，隨機(jī)取2尾草魚，取其背部肌肉、腹部肌肉保存，用于分析未投喂試驗(yàn)料之前其脂肪酸含量，記為基礎(chǔ)樣（Basis）。養(yǎng)殖60 d后，禁食2 d，分別撈取各網(wǎng)箱草魚，將水濾干后稱量并記錄尾數(shù)，用于計(jì)算生長(zhǎng)速度。試驗(yàn)期間統(tǒng)計(jì)各組草魚飼料投喂量，用于計(jì)算餌料系數(shù)；每組隨機(jī)取兩條魚解剖并測(cè)量形體參數(shù)，用于計(jì)算生長(zhǎng)指標(biāo)；將所解剖魚腹腔內(nèi)脂肪剝離干凈后稱量，用于計(jì)算腹脂率；最后取草魚背部肌肉、腹部肌肉保存，用于分析脂肪酸含量及常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分。相關(guān)計(jì)算公式如下：

1.5 分析方法

飼料和肌肉的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分含量分別采用105℃烘干法（GB/T 6435—2014）、凱氏定氮法（GB/T 6432—2018）、索氏抽提法（GB/T 6433—2006）和灼燒稱重法（GB/T 6438—2007）測(cè)定。

脂肪酸含量采用氣相色譜儀測(cè)定：儀器型號(hào)為Agilent-6890型氣相色譜儀。將樣品置于冷凍干燥機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司，SCIENTZ-10N型）中干燥至恒質(zhì)量，然后用研缽磨碎并混勻，再取一定量的樣品置于水解管中，并加入4 mL氯乙酰甲醇溶液（氯乙酰甲醇=1+10），及1 mL C11:0（1.0 mg/mL）內(nèi)標(biāo)溶液，另補(bǔ)加1 mL正己烷。密封置于80℃水浴反應(yīng)2 h，取出冷卻后加7%碳酸鉀5 mL，振搖均勻，以1 000 r/min的速度離心5 min后過(guò)0.2 μm濾膜裝入進(jìn)樣小瓶，上機(jī)檢測(cè)。氣相色譜條件：色譜柱為DB-23（60.0 m×250 μm×0.25 μm），柱溫采用程序升溫（260 ℃max）；氫火焰離子檢測(cè)器（FID），F(xiàn)ID 270℃；載氣為高純氦氣，流速為2.0 mL/min；分流比為30∶1，進(jìn)樣量為1 μL。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±SE）表示，用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。先對(duì)數(shù)據(jù)作單因素方差分析（one-way ANOVA），若試驗(yàn)組間差異顯著，再用Duncan’s進(jìn)行多重比較，顯著水平為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同脂肪源對(duì)草魚生長(zhǎng)性能及飼料利用效果的影響

由表2可知，在試驗(yàn)開始時(shí)，3組魚的體質(zhì)量無(wú)顯著性差異（P＞0.05），經(jīng)60 d的飼養(yǎng)期后發(fā)現(xiàn)，綜合比較而言，3組試驗(yàn)魚的生長(zhǎng)效果以第2組最好，其增重率（WGR）為（37.09±1.74）%，顯著高于第3組（P＜0.05），第1組次之，其增重率（WGR）為（32.27±0.73）%，但與第2組及第三組均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；特定生長(zhǎng)率（SGR）的結(jié)果與增重率（WGR）相同；肝體指數(shù)（HSI）以第3組魚油組最低，顯著低于第1組（P＜0.05），而與第2組混油組無(wú)顯著差異，混油組的肝體指數(shù)（HSI）為（2.70±0.10）%，與其他二組均不顯著（P＞0.05）；3組試驗(yàn)魚的腹脂率（IPFratio）、肥滿度（CF）、飼料系數(shù)（FCR）無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表2 不同脂肪源對(duì)草魚生長(zhǎng)性能及飼料利用效果的影響Tab.2 Effects of different lipid diets on the growth performance and feed utilization of Ctenopharyngodon idellus

2.2 不同脂肪源對(duì)草魚肌肉常規(guī)組成的影響

表3為試驗(yàn)結(jié)束后，草魚肌肉常規(guī)組成的含量。由表3可知，3組試驗(yàn)魚的背肌及腹肌水分含量無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；背肌及腹肌中粗蛋白含量均為混油組最高，顯著高于其他兩組（P＜0.05），魚油組次之，豆油組最低，且豆油組與魚油組之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；背肌中粗脂肪含量為混油組最高，其值為（3.00±0.08）%，顯著高于其他二組（P＜0.05），豆油組與魚油組之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；而腹肌中粗脂肪含量則以豆油組最高，顯著高于混油組及魚油組（P＜0.05），混油組與魚油組腹肌中粗脂肪含量則無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；背肌及腹肌中粗灰分含量均以混油組最高，豆油組次之，魚油組最低，但3者之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表3 不同脂肪源對(duì)草魚肌肉常規(guī)組成的影響Tab.3 Effects of different lipid diets on the muscle composition of Ctenopharyngodon idellus

2.3 不同脂肪源對(duì)草魚肌肉脂肪酸組成的影響

由表4可知，各組草魚肌肉中都含有大量的C16:0、C18:1n9和C18:2n6，其次為C20:4n6及C22:6n3；比較基礎(chǔ)樣與各組試驗(yàn)魚肌肉所含脂肪酸可知，試驗(yàn)魚經(jīng)60 d投喂后，其肌肉所含脂肪酸種類由22種提高到26種，且飽和脂肪酸所占比例明顯降低，但3組試驗(yàn)魚之間差異不顯著（P＞0.05），不飽和脂肪酸所占比例明顯升高，但3組試驗(yàn)魚之間差異不顯著（P＞0.05）。隨著飼料脂肪中魚油比例的升高，背肌、腹肌中EPA及DHA的含量也呈上升趨勢(shì)，它們?cè)隰~油組中的含量最高，混油組次之，均顯著高于豆油組（P＜0.05），但魚油組與混油組相比較差異不顯著（P＞0.05），n-3系列的不飽和脂肪酸趨勢(shì)與之相同。

3 討 論

3.1 不同脂肪源對(duì)草魚生長(zhǎng)性能及飼料利用效果的影響

脂肪源之間的差別，實(shí)質(zhì)上是不同脂肪源的脂肪酸組成不同，而不同的魚類對(duì)脂肪酸的需求也不同[13-16]。Washington[17]和Tocher等[18]報(bào)道了常見(jiàn)淡水養(yǎng)殖魚類對(duì)必需脂肪酸的需求量。據(jù)其報(bào)道可知，草魚需從飼糧中獲得的脂肪酸為n-3系列的亞麻酸（LNA，C18:3n3）及n-6系列的亞油酸（LA，C18:2n6）。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加混合油脂（2%豆油+2%魚油）可使草魚的生長(zhǎng)效果優(yōu)于單獨(dú)添加4%的豆油及單獨(dú)添加4%魚油。豆油中富含C18:2n6和C18:3n3，魚油中富含EPA（C20:5n3）、DHA（C22:6n3）和ARA（C20:4n6）[19]，這可能是本試驗(yàn)中魚油組的增重率最低，而混油組的生長(zhǎng)效果最好的原因，因?yàn)槎褂团c魚油的搭配使飼糧中的各種脂肪酸比例相對(duì)均衡，滿足草魚的必需脂肪酸需求，更有利于草魚的生長(zhǎng)，同時(shí)也使該組的餌料系數(shù)最低，這一結(jié)果與李思萌等[20]在大菱鲆幼魚上的研究結(jié)果相一致；腹脂率（IPF ratio）的高低，意味著腹腔內(nèi)臟團(tuán)脂肪沉積的多少，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，混合油脂組的腹脂率最低，這可能說(shuō)明，魚體利用飼料中混合油脂的效果比單一添加油脂效果好。馬晶晶[6]在黑鯛魚飼料中添加不同含量的n-3PUFA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著n-3PUFA含量的不斷升高，魚體的腹脂率不斷降低，這與本試驗(yàn)的結(jié)果并不相同，可能與魚品種不同有關(guān)；肝體指數(shù)（HSI）通常是衡量魚體健康狀態(tài)的指標(biāo)，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，豆油組肝體比最高，顯著高于魚油組肝體比，而混油組則與二者均無(wú)顯著性差異，這可能說(shuō)明單一添加大豆油會(huì)明顯增加肝臟的負(fù)擔(dān)。有報(bào)道指出，淡水魚有將C18:3n3轉(zhuǎn)化為DHA和EPA的能力[21]，這或許說(shuō)明，單一添加豆油會(huì)增加肝臟的負(fù)擔(dān)來(lái)完成這部分工作，而相應(yīng)地添加部分魚油會(huì)減輕肝臟的負(fù)擔(dān)；本試驗(yàn)3組試驗(yàn)魚的腹脂率及肥滿度未發(fā)現(xiàn)顯著性差異（P＜0.05），這可能說(shuō)明不同脂肪源對(duì)魚體脂肪沉積位置及體型改變未有顯著影響。陳濤等[14]在飼料中添加4%的不同脂肪源探究對(duì)紅羅非魚稚魚生長(zhǎng)及肌肉脂肪酸組成的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)4種脂肪源對(duì)魚體肥滿度結(jié)果與本試驗(yàn)相似。

表4 各組草魚肌肉脂肪酸組成（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Tab.4 Fatty acid composition in muscle of grass carp in different groups（DM basis） %

也有報(bào)道指出，不同脂肪源對(duì)魚體的生長(zhǎng)不會(huì)造成顯著性差異，如陸游等[22]用4種分別添加有椰子油（CO）、蘇子油（PO）、葵花籽油（SO）、魚油與葵花籽油1∶1混合油（FO/SO）的飼料，投喂黃顙魚幼魚，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)魚終末體質(zhì)量、增重率、特定生長(zhǎng)率方面均無(wú)顯著性差異。高堅(jiān)等[23]用5種含有魚油（FO）、大豆油（SO）、玉米油（CO）、花生油（Pe O）和棕櫚油（Pa O）的配合飼料投喂泥鰍稚魚，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，攝食不同脂肪源飼料的泥鰍稚魚在增重率等生長(zhǎng)性能指標(biāo)方面無(wú)顯著性差異，造成這種結(jié)果上的差異可能與所選試驗(yàn)魚及脂肪源不同有關(guān)。

3.2 不同脂肪源對(duì)草魚肌肉常規(guī)組成的影響

本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是背肌還是腹肌其粗蛋白含量均為混油組最高，魚油組次之而豆油組最低，這一結(jié)果可能與魚油富含豐富的n-3系列高度不飽和脂肪酸有關(guān)[24]，從而使攝食添加了魚油飼料的草魚魚體肌肉中的粗蛋白含量升高，而混油組最高可能與其脂肪酸含量更加平衡有關(guān)；針對(duì)背肌而言，粗脂肪含量以混油組最高，顯著高于其他兩組，分析發(fā)現(xiàn)，混油組的粗蛋白含量、粗脂肪含量均顯著高于其他二組，且粗灰分含量無(wú)顯著性差異，獨(dú)水分含量較其他兩組低，這可能說(shuō)明混油組的背肌更富有營(yíng)養(yǎng)[25-26]；針對(duì)腹肌而言，粗脂肪含量以豆油組最高，混油組與魚油組較低，Ribeiro等[27]指出魚油富含n-3HUFA，會(huì)抑制脂肪合成，繼而降低脂肪沉積量，從而使含魚油的飼料組在腹肌中的粗脂肪含量較低。而背肌與腹肌脂肪沉積規(guī)律并不相同，這可能與魚體自身因飼料中脂肪酸含量的不同而調(diào)控了脂肪的沉積位置，具體機(jī)理需進(jìn)一步的探究，杜震宇等[28]發(fā)現(xiàn)了相似的現(xiàn)象，他們發(fā)現(xiàn)在滿足必需脂肪酸需要量的情況下，不同脂肪源對(duì)鱸生長(zhǎng)差異影響不大，但對(duì)體脂沉積有一定影響。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同脂肪源對(duì)草魚背肌、腹肌營(yíng)養(yǎng)成分造成了顯著性差異。這與施則偉[29]試驗(yàn)結(jié)果相似，施則偉用3種分別添加同一水平豆油、魚油、豬油的飼料投喂泥鰍，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同脂肪源對(duì)肌肉的常規(guī)組成含量造成了顯著性差異；張媛媛等[30]以異育銀鯽為研究對(duì)象，用4種分別添加5.4%水平魚油、豆油、菜籽油、亞麻油的飼料投喂異育銀鯽，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同脂肪源對(duì)肌肉的常規(guī)組成含量沒(méi)有顯著性差異。這種研究結(jié)果的差異，可能與試驗(yàn)所用魚種、脂肪源及添加水平不同有關(guān)。

3.3 不同脂肪源對(duì)草魚肌肉脂肪酸組成的影響

研究表明，魚類肌肉組織中脂肪酸組成基本反映了飼料中脂肪酸的組成[31-34]。經(jīng)60 d喂養(yǎng)后，不同脂肪源草魚肌肉中所含脂肪酸量明顯反映了這一點(diǎn)，大豆油中含有豐富的C18:2n6及C18:3n3，魚油中則含有豐富的C20:5n3及C20:6n3[19]，本試驗(yàn)結(jié)果也印證了這一點(diǎn)。如表4所示，豆油組肌肉含有較高的的C18:2n6及C18:3n3，魚油組肌肉則含有較高的C20:5n3及C20:6n3，混油組肌肉在這4種脂肪酸含量上則比較均衡。這可能意味著飼料中添加脂肪酸的比例相對(duì)平衡，則魚體肌肉中所含的脂肪酸比例也會(huì)更加平衡。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與基礎(chǔ)草魚樣相比，試驗(yàn)魚經(jīng)60 d投喂后，其肌肉所含可檢出脂肪酸種類由22種提高到26種，這可能是因?yàn)榛A(chǔ)樣草魚未有脂肪來(lái)源導(dǎo)致魚體部分脂肪酸的合成缺乏原料而受阻，在經(jīng)外源脂肪補(bǔ)充后，該部分脂肪酸合成得以正常進(jìn)行從而SFA的比例較基礎(chǔ)樣降低而UFA的比例上升，同時(shí)說(shuō)明草魚有將短鏈脂肪酸延長(zhǎng)及將飽和脂肪酸去飽和的能力，類似現(xiàn)象出現(xiàn)在紅點(diǎn)鮭及吉富羅非魚上[35-36]。

EPA、DHA對(duì)水生動(dòng)物而言具有多種非常重要的生理功能，如能量供應(yīng)、構(gòu)成細(xì)胞膜組分、保持一些酶的活性、影響一些基因的調(diào)控等[37]。B?hm等[38]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼料中添加魚油，魚體極性磷脂優(yōu)先儲(chǔ)存n-3 HUFAs，投喂植物油飼料則不能提高鯉體內(nèi)的n-3 HUFAs含量，飼喂魚油則更容易沉積，特別是在腹部肌肉組織中。本試驗(yàn)結(jié)果與此類似，綜合比較3種脂肪源背腹肌所含脂肪酸量可以發(fā)現(xiàn)，EPA、DHA含量皆為魚油組最高，豆油組最低，混油組介于二者之間，李思萌等[20]以7種不同脂肪源試驗(yàn)投喂大菱鲆幼魚，探討飼料脂肪源對(duì)其生長(zhǎng)性能和肌肉脂肪酸組成的影響，飼料研究結(jié)果表明，魚油組及豆油+魚油組在這兩種脂肪酸沉積上有相同的結(jié)果。而艾立川[39]的研究表明，提高飼料中n-3 HUFAs的水平，可顯著提高水生動(dòng)物體內(nèi)脂肪酸含量，其中主要是AA、DHA和EPA。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加了魚油的混合油脂組及純魚油組背肌、腹肌中EPA、DHA含量上有顯著變化，且背肌中AA的含量也隨魚油含量的升高而升高，但混油組與豆油組相比，AA的含量沒(méi)有顯著性的提升，腹肌中AA的含量則無(wú)此趨勢(shì)。這可能與所用魚油的質(zhì)量有關(guān)，魚油保存時(shí)間越久，氧化酸敗的可能性越大，而氧化魚油對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生毒副作用，從而導(dǎo)致AA含量的變化呈不規(guī)律性，陳科全等[40]研究報(bào)道飼料中添加氧化魚油會(huì)使草魚肌肉中的PUFA含量降低。

在本試驗(yàn)條件下，魚油和豆油按1:1混合添加能使草魚更好地生長(zhǎng)，飼料中添加魚油可使肌肉中EPA、DHA的含量得到顯著提升，添加豆油可使生長(zhǎng)速度得到顯著提升，因此可知：飼料中豆油和魚油混合作為草魚脂肪源，不僅可促進(jìn)草魚生長(zhǎng)，較單純使用豆油，還可顯著提高肌肉中EPA、DHA的含量，達(dá)到提質(zhì)增效的目的。