蜜環(huán)菌提取物改善睡眠及免疫調(diào)節(jié)研究*

魏 毅

（南京森林警察學(xué)院，江蘇 南京 210023）

蜜環(huán)菌（Armillaria mellea） 又名榛蘑、臻蘑，主要產(chǎn)自我國北方地區(qū)，是一種常見的食用菌。蜜環(huán)菌兼具食用和藥用功效，其保健功效也日益浮現(xiàn)出來。而改善睡眠和提高免疫力是食用菌最為重要的保健功效之一，基于小鼠睡眠和免疫試驗角度，從定量分析入手，剖析蜜環(huán)菌提取物改善睡眠和免疫調(diào)節(jié)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗樣品

蜜環(huán)菌提取物在實驗室恒溫恒濕條件下，按照規(guī)范流程，進行試驗樣品前處理（分選，粉碎，提純，分裝等）。

1.2 試驗動物

雄性小鼠，每只小鼠體重（20±2） g，數(shù)量為120只。按照3種戊巴比妥鈉睡眠法分為3批，每批40只；然后將每批按照劑量高低，平均分為4組（包含空白對照組）。

1.3 試劑與劑量

試劑主要為戊巴比妥鈉、巴比妥鈉、無菌蒸餾水，純度均為實驗生化類優(yōu)級純。蜜環(huán)菌提取物劑量從低到高為60 mg·kg-1、150 mg·kg-1、500 mg·kg-1，另外選擇無菌蒸餾水作為空白對照。

1.4 試驗方法

1.4.1 直接睡眠法

將試驗用的120只小鼠，按照劑量高低分別為CK、低、中、高，CK組為小鼠灌胃無菌蒸餾水，其他試劑組為小鼠灌入對應(yīng)劑量蜜環(huán)菌提取物，其是觀察小鼠的睡眠情況，并進行統(tǒng)計。小鼠睡眠情況是通過翻正反射消失為衡量指標(biāo)，如果小鼠在1 min以內(nèi)不能翻正，則可以認定小鼠入睡，如果小鼠恢復(fù)了正常姿態(tài)，即小鼠醒來，這個時間間隔即為小鼠睡眠時間。

1.4.2 戊巴比妥鈉睡眠法

1)延長戊巴比妥鈉睡眠時間試驗

給小鼠針入戊巴比妥鈉（40 mg·kg-1），蜜環(huán)菌提取物針入量為0.2 mL·20-1g-1，判斷試驗組小鼠的睡眠時間與CK組小鼠的睡眠時間是否具有統(tǒng)計學(xué)的關(guān)聯(lián)性。在做試驗之前，根據(jù)翻正反射消失指標(biāo)，判斷小鼠是否入睡，只有當(dāng)小鼠翻正反射消失時，才可以進行試驗。

2)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗

首先通過80%以上試驗小鼠翻正反射不消失的指標(biāo)，確定戊巴比妥鈉閾下最大催眠劑量，然后給不同劑量組小鼠針入20 mg·kg-1溶液，通過觀察試驗小鼠翻正反射消失指標(biāo)，如若超過1 min為小鼠入睡，以此來記錄30 min以內(nèi)入睡小鼠數(shù)量。該試驗適宜在安靜恒溫恒濕環(huán)境中進行，以保證最佳試驗結(jié)果。

3)巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗

在上述兩個試驗基礎(chǔ)上，在給試驗小鼠灌入最后一次不同劑量蜜環(huán)菌提取物之后的20 min后，給試驗小鼠針入巴比妥鈉（200 mg·kg-1），詳細錄入小鼠對該試驗的影響。

1.4.3 遲發(fā)型超敏反應(yīng)法

通過外界誘發(fā)的一種細胞免疫超敏反應(yīng)法，觀察試驗小鼠自身對于蜜環(huán)菌提取物的免疫調(diào)節(jié)作用。該方法的試驗分組和試劑注射，與直接睡眠觀察法相同。按照國家標(biāo)準(zhǔn)進行試驗。

1.4.4 碳粒廓清試驗法

基于將特定濃度含碳粒溶液注入到小鼠靜脈中，讓其與小鼠血液結(jié)合，進而觀察小鼠重要臟器（肝、脾等）中免疫細胞的變化，該試驗可以在一定程度上反映小鼠免疫調(diào)節(jié)作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 蜜環(huán)菌提取物對改善睡眠的影響

2.1.1 蜜環(huán)菌提取物對小鼠體重以及直接睡眠的影響

在進行其他試驗之前，需要通過小鼠體重變化特征，來判斷蜜環(huán)菌提取物對于小鼠本身是否有影響。試驗用不同分組的小鼠，4組小鼠體重變化詳見表1。

表1 蜜環(huán)菌提取物對小鼠體重的影響變化表Tab.1 Effect of Armillaria mellea extract on body weight of mice

如表1所示，灌喂30 d，小鼠體重變化沒有呈現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)上的特征，說明蜜環(huán)菌提取物本身對于小鼠沒有致病性影響。通過觀察各組小鼠直接睡眠試驗，4個分組中的小鼠，在2 h內(nèi)，均未發(fā)現(xiàn)明顯的直接睡眠情況。

2.1.2 蜜環(huán)菌提取物對戊巴比妥鈉睡眠的影響

蜜環(huán)菌提取物對戊巴比妥鈉睡眠的影響主要從3個方面來體現(xiàn)。

1)蜜環(huán)菌提取物在戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時間試驗中的作用

時間上，試驗小鼠需要灌喂蜜環(huán)菌提取物30 d，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時間試驗的結(jié)果詳見表2。

表2 蜜環(huán)菌提取物對睡眠時長的影響Tab.2 Effects of Armillaria mellea extracts on sleep duration

由表2可知，空白對照組相比于試劑劑量組，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時間是比較短的，即說明攝入一定劑量可以讓戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時間在一定程度上變長；對比3組不同劑量組的數(shù)據(jù)，也可以看出隨著劑量的增加，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時間也呈現(xiàn)出不斷增加的趨勢。

2）蜜環(huán)菌取物對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗的影響

戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗，同樣是需要試驗小鼠灌喂蜜環(huán)菌提取物30 d，結(jié)果見表3。

表3 蜜環(huán)菌提取物對入睡率的影響Tab.3 Effect of Armillaria mellea on falling asleep rate

由表3可知，當(dāng)蜜環(huán)菌提取物劑量升高時，小鼠的入睡比率有較為明顯的提升，而灌喂的不是蜜環(huán)菌提取物，是空白對照組的無菌蒸餾水時，小鼠的入睡比率是相對較低的。這可以說明，蜜環(huán)菌提取物在達到一定劑量之后，可以起到提高小鼠入睡比率的積極作用，對改善睡眠有促進影響。

3）蜜環(huán)菌提取物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響

巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗，與前兩個試驗相似，需要試驗小鼠灌喂蜜環(huán)菌提取物30 d，結(jié)果見表4。

表4 小鼠蜜環(huán)菌提取物對巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗變化Tab.4 Changes in sleep latency test of Armillaria mellea extracts against barbituric sodium

由表4可知，當(dāng)灌喂溶劑為無菌蒸餾水時，小鼠的入睡潛伏期是較長的，即小鼠需要較長的時間入睡。當(dāng)灌喂蜜環(huán)菌提取物劑量逐步升高，可以明顯的看到小鼠的入睡潛伏期在不斷縮短，這就說明蜜環(huán)菌提取物對于縮短小鼠的入睡潛伏期有一定的促進作用，蜜環(huán)菌提取物劑量越高，小鼠入睡潛伏期越短，即小鼠入睡速度越快。

2.2 蜜環(huán)菌提取物對免疫作用調(diào)節(jié)的影響

2.2.1 蜜環(huán)菌提取物對小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)影響

遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗過程中，除去空白對照組之外，其他小鼠都攝入了不同劑量的蜜環(huán)菌提取物。在試驗過程中，利用小鼠效應(yīng)T細胞參與抗原反應(yīng)，等待36 h～48 h之后，觀察小鼠的慢性炎癥癥狀，主要表現(xiàn)為局部出現(xiàn)血絲乃至紅腫，對患處進行觀察計量統(tǒng)計，結(jié)果見表5。

表5 蜜環(huán)菌提取物對遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響Tab.5 Effects of Armillaria mellea extracts on delayed-type hypersensitivity

由表5可知，CK組幾乎未見反應(yīng)，而不同劑量組的反應(yīng)，隨著劑量的增大，紅腫效應(yīng)也有增加的趨勢。這說明蜜環(huán)菌提取物的攝入，對于小鼠免疫細胞的針對性反應(yīng)，有一定的正相關(guān)影響。

2.2.2 蜜環(huán)菌提取物對小鼠碳粒廓清試驗的免疫調(diào)節(jié)影響

碳粒廓清試驗過程中，包括空白對照組在內(nèi)，對所有組別的小鼠靜脈血液中注入碳粒溶液，在碳粒與小鼠血液結(jié)合過程中，小鼠免疫細胞發(fā)揮功效。在此過程中，除去空白對照組之外，其他組別的小鼠均攝入了不同劑量的蜜環(huán)菌提取物，通過對比小鼠血液中肝指數(shù)和淋巴指數(shù)的數(shù)值，以及計算碳粒廓清試驗的吞噬指數(shù)α和k值，詳見表6。

表6 蜜環(huán)菌提取物對碳粒廓清試驗的影響Tab.6 Effect of Armillaria mellea extract on carbon particle clearance test

由表6可知，空白對照組的數(shù)值相對較低，劑量組的數(shù)值隨著劑量的增加，呈現(xiàn)逐步增加的趨勢，這說明蜜環(huán)菌提取物的攝入，對于小鼠的免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)，產(chǎn)生了積極影響。

3 結(jié)論

通過小鼠對蜜環(huán)菌提取物的攝取，引入4種睡眠試驗，判斷蜜環(huán)菌提取物對于小鼠睡眠的影響和作用。首先，試驗小鼠的自身重量，隨著蜜環(huán)菌提取物劑量的增加，有不斷增加的趨勢，初步判斷蜜環(huán)菌提取物對于小鼠并無致病性負面影響。然后開展的4種睡眠試驗，直接睡眠試驗法并沒有在試驗結(jié)果數(shù)據(jù)中，找到明顯的小鼠睡眠相關(guān)性支撐。在隨后的3種戊巴比妥鈉睡眠試驗中，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠試驗的結(jié)果說明攝入一定劑量蜜環(huán)菌提取物可以延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時間，對比數(shù)據(jù)，也可以看出隨著劑量的增加，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時間變長；蜜環(huán)菌提取物劑量升高時，小鼠的入睡比率有較為明顯的提升，蜜環(huán)菌提取物在達到一定劑量之后，可以起到提高小鼠入睡比率的積極作用，對改善睡眠有促進影響；巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗的結(jié)果，也呈現(xiàn)出蜜環(huán)菌提取物劑量逐步升高，小鼠的入睡潛伏期在不斷縮短，蜜環(huán)菌提取物對于縮短小鼠的入睡潛伏期有一定的促進作用，隨著蜜環(huán)菌提取物劑量越高，小鼠入睡潛伏期越短，即小鼠入睡速度越快。由此，可以看出，蜜環(huán)菌提取物，在試驗小鼠過程中，達到一定劑量的時候，對于小鼠的睡眠起到了較為明顯的改善效果。

由此可見，蜜環(huán)菌提取物在飽含大量的生物益生特質(zhì)基礎(chǔ)上，蜜環(huán)菌常見的藥用價值，與本文的試驗結(jié)果均呈現(xiàn)出良好的一致性，即規(guī)定劑量的蜜環(huán)菌提取物對于改善睡眠以及免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，都有較為積極的影響。