膜聯(lián)蛋白A1、sd-LDL、Angptl2與冠心病及對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變程度的診斷價(jià)值

吳威 衣欣 蒙奕兵 張雪

冠心病（Coronary heart disease，CHD）作為日益增長(zhǎng)的公共健康問(wèn)題，已發(fā)展成嚴(yán)重威脅中老年群體健康的首要病因[1]。臨床加強(qiáng)CHD病情評(píng)估，并針對(duì)性治療是改善預(yù)后、降低住院率、病死率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。低密度脂蛋白（Low Density Liporotein，LDL）表達(dá)異常已成為醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的CHD獨(dú)立危險(xiǎn)因素[2]。近年隨血脂蛋白研究深入發(fā)現(xiàn)，不同形態(tài)LDL誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化能力存在差異性，其中以小而密低密度脂蛋白（sd-LDL）與CHD發(fā)病發(fā)展關(guān)系最為密切[3]；此外，基礎(chǔ)研究顯示，血清膜聯(lián)蛋白A1（AnxA1）與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化形成存在一定關(guān)聯(lián)性，可作為評(píng)價(jià)斑塊性質(zhì)的特異性指標(biāo)[4]；血管生成素樣蛋白2（Angptl2）是一種內(nèi)臟脂肪細(xì)胞分泌蛋白，與動(dòng)脈粥樣硬化、胰島素抵抗、炎癥反應(yīng)等病理生理有關(guān)，但與CHD患者冠脈病變嚴(yán)重程度的報(bào)道鮮見(jiàn)[5]?；诖?，本研究通過(guò)分析血清AnxA1、sd-LDL、Angpt l2與CHD患者冠狀動(dòng)脈狹窄演化的關(guān)聯(lián)性，旨在為臨床完善診斷、治療方案提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2017年8月至2019年8月102例CHD患者作為研究對(duì)象。符合CHD診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；查體、超聲心動(dòng)圖診斷確診；首次發(fā)病，既往無(wú)相關(guān)治療史；入組前3個(gè)月內(nèi)未服用影響血脂藥物；患者、家屬知情研究簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴其他心血管疾病者；合并嚴(yán)重感染性疾病者；存在惡性腫瘤疾病者；伴血液系統(tǒng)疾病者。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 方法

血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2水平檢測(cè)。①樣本采集：晨空腹坐位以非抗凝真空管取肘靜脈血2mL，靜置10min，離心9min（半徑8 cm，轉(zhuǎn)速3500r/min），分離血清保存至液氮待測(cè)。②檢測(cè)：取血清室溫解凍（避免反復(fù)融凍）用全自動(dòng)生化分析系統(tǒng)（西門子，型號(hào)：Adiva 2400）以過(guò)氧化酶法測(cè)sd-LDL；以酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)AnxA1、Angptl2水平。試劑、試劑盒均為上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司提供。相同資深?？漆t(yī)師參考試劑盒說(shuō)明書(shū)規(guī)范完成。

1.3 觀察指標(biāo)

①不同臨床特征患者血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2水平。②血清Anx A1、sd-LDL、Angptl2與Gensini評(píng)分相關(guān)性。Gensini評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[7]：狹窄＜25%計(jì)1分；25%～50%計(jì)2分；51%～75%計(jì)4分；76%～90%計(jì)8分；91%～99%計(jì)16分；100%計(jì)32分。不同病變節(jié)段冠狀動(dòng)脈×對(duì)應(yīng)系數(shù)：左主干病變×5。左前降支近段×2.5、中段×1.5、遠(yuǎn)段×1，左回旋支近段×2.5、遠(yuǎn)段、后降支×1，后側(cè)支×0.5，第一對(duì)角支×1，第二對(duì)角支×0.5，右冠進(jìn)/中/遠(yuǎn)段×1。各分支積分相加為總分。③血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2與冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)相關(guān)性。④血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重病變的診斷價(jià)值。⑤血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2聯(lián)合對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重病變的診斷價(jià)值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，計(jì)數(shù)資料以%表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性以Pearson分析；符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；應(yīng)用受試者工作特征（Receiver Operating Characteristic,ROC）曲線分析血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重病變的診斷價(jià)值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同臨床特征患者血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2水平

不同年齡、性別患者血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2水平相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同疾病類型、Gensini評(píng)分、冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)患者血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2水平存在顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同臨床特征患者血清Anx A1、sd-LDL、Angptl2水平比較[n，（±s）]Table1 Comparison of serum ANXA 1，SD LDL and Angptl2 levels in patients with different clinical characteristics[n，（±s）]

表1 不同臨床特征患者血清Anx A1、sd-LDL、Angptl2水平比較[n，（±s）]Table1 Comparison of serum ANXA 1，SD LDL and Angptl2 levels in patients with different clinical characteristics[n，（±s）]

臨床病理特征年齡（歲）＜60≥60性別男女疾病類型（例）穩(wěn)定型心絞痛不穩(wěn)定型心絞痛急性心肌梗死Gensini評(píng)分（分）0～2021～60＞60冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)（支）12≥3 n 5547534946223438 34305729 16 AnxA1（μg/L）1.55±0.401.59±0.38 1.56±0.331.58±0.36 1.17±0.201.49±0.352.16±0.571.20±0.221.54±0.38 2.07±0.551.31±0.241.62±0.322.41±0.50 t/F/P值-1.044/0.299-0.293/0.770-63.411/＜0.001-41.118/＜0.001-76.518/＜0.001sd-LDL（mmol/L）1.27±0.301.29±0.271.26±0.28 1.30±0.251.02±0.16 1.27±0.201.64±0.39 1.04±0.121.33±0.18 1.52±0.211.08±0.171.35±0.241.87±0.35 t/F/P值-0.351/0.726-0.759/0.450-53.079/＜0.001-68.751/＜0.001-78.045/＜0.001Angptl2（ng/mL）2.30±0.422.21±0.452.28±0.502.24±0.46 1.41±0.372.53±0.643.24±0.701.42±0.402.38±0.613.19±0.831.57±0.39 2.76±0.573.81±0.86 t/F/P值0.515/0.6080.419/0.676-108.006/＜0.001-69.042/＜0.001-125.570/＜0.001

2.2 血清AnxA1、sd-LDL、Angpt l2與Gensini評(píng)分相關(guān)性

Pearson相關(guān)系數(shù)分析血清AnxA1（r=0.723）、sd-LDL（r=0.784）、Angptl2（r=0.644）與Gensini評(píng)分呈正相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），圖1～3。

圖1 血清AnxA1與Gensini評(píng)分相關(guān)性Figure1 correlation between serum ANXA1and Gensiniscore

圖2 血清sd-LDL與Gensini評(píng)分相關(guān)性Figure2 correlation between serum SD LDL and Gensiniscore

圖3 血清Angpt l2與Gensini評(píng)分相關(guān)性Figure3 correlation between serum Angptl2 and Gensiniscore

2.3 血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2與冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)相關(guān)性

Pearson相關(guān)系數(shù)分析血清AnxA1（r=0.787）、sd-LDL（r=0.780）、Angptl2（r=0.855）與冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)呈正相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），圖4～6。

圖4 血清AnxA1與冠脈病變支數(shù)相關(guān)性Figure4 correlation between serum ANXA1and number of coronary lesions

圖5 血清sd-LDL與冠脈病變支數(shù)相關(guān)性Figure5 correlation between serum SD LDL and number of coronary lesions

圖6 血清Angptl2與冠脈病變支數(shù)相關(guān)性Figure6 correlation between serum Angptl2 and number of coronary lesions

2.4 血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重病變的診斷價(jià)值

將Gensini評(píng)分＞60分定義為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重病變。ROC曲線分析顯示，血清AnxA1診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重病變的ROC曲線下的面積（Area Under Curve,AUC）值為0.791，大于血清sd-LDL、Angptl2，當(dāng)截?cái)嘀担?.61μg/L時(shí)，敏感度為84.72%，特異度為66.67%。見(jiàn)表4。

表4 ROC分析結(jié)果（%）Table4 ROC analysis results（%）

2.5 3者聯(lián)合診斷

血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2聯(lián)合診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重病變AUC為0.895，95%CI為0.819～0.947，診斷敏感度為79.17%，特異度為90.00%，見(jiàn)圖7。

3 討論

sd-LDL是LDL主要類型之一，有學(xué)者對(duì)sd-LDL與CHD間關(guān)系進(jìn)行研究，B型分布的血清LDL是獨(dú)立于年齡、體質(zhì)量、性別之外的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可使CHD患者繼發(fā)心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)提高3倍[9]。學(xué)者孫愛(ài)梅等[10]研究表明，血清LDL在不穩(wěn)定型心絞痛、在急性心肌梗死患者中表達(dá)異常升高，經(jīng)多因素回歸分析其表達(dá)與高血壓史、腰臀比有關(guān)，但校正上述因素后，與健康群體對(duì)比，血清sd-LDL表達(dá)仍與急性冠狀動(dòng)脈綜合征存在相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，不同疾病類型、Gensini評(píng)分、冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)患者血清AnxA1存在顯著差異（P＜0.05），其介導(dǎo)冠狀動(dòng)脈病變的機(jī)制可能是sd-LDL氧化活性強(qiáng)，血漿清除緩慢，與血管壁粘附后易進(jìn)入動(dòng)脈壁內(nèi)并不斷積聚，致動(dòng)脈壁氧化損傷，加重斑塊不穩(wěn)定性[11]。學(xué)者秦明明等[12]研究顯示，血清sd-LDL診斷動(dòng)脈粥樣硬化的敏感度73.6%。本研究顯示，血清AnxA1診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重病變的AUC值最大，為0.791，最佳敏感度為84.72%，略高于上述研究，可能是因本研究采取ROC曲線分析可連續(xù)性、動(dòng)態(tài)分析診斷效能，更接近實(shí)際診斷價(jià)值。

Angptl2是一種分泌型糖蛋白，具有廣泛性生物學(xué)作用，絕大多數(shù)介導(dǎo)血管生成，少量參與血糖、脂質(zhì)代謝過(guò)程[13]。病理研究顯示，Angptl2能通過(guò)加重胰島素抵抗，促進(jìn)血小板凝聚進(jìn)一步惡化機(jī)體炎癥反應(yīng)[14]。炎癥反應(yīng)與CHD發(fā)病關(guān)系密切，已得到臨床廣泛性證實(shí)。因此推測(cè)：Angptl2可能通過(guò)激活、強(qiáng)化機(jī)體炎癥反應(yīng)過(guò)程加重冠脈血管斑塊形成，誘發(fā)CHD發(fā)生。本研究檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，CHD患者普遍存在血清Angptl2高表達(dá)狀態(tài)，且不同冠脈病變類型患者間表達(dá)存在顯著差異（P＜0.05）。Angptl2與Toll樣受體4配體結(jié)合后可通過(guò)整合素有關(guān)途徑大量激活炎癥細(xì)胞因子表達(dá)，繼而產(chǎn)生抗血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷效應(yīng)，促進(jìn)血管壁重塑，介導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化形成，且會(huì)增加斑塊不穩(wěn)定性，加重病情。學(xué)者何攀文等[15]研究顯示，隨CHD患者Gensini評(píng)分升高，血清Angptl2表達(dá)呈上升趨勢(shì)。本研究結(jié)果顯示，血清Angptl2表達(dá)與CHD患者Gensini評(píng)分呈正相關(guān)（P＜0.05），與上述研究結(jié)果近似，同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)，血清Angptl2表達(dá)與冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)存在密切關(guān)系，進(jìn)一步ROC曲線分析顯示，血清Angptl2診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重病變的AUC值為0.723，可為臨床診斷提供參考數(shù)據(jù)。

AnxA1是重要炎癥調(diào)控蛋白之一，在人體大多數(shù)組織細(xì)胞，尤其是單核細(xì)胞、粒細(xì)胞中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，參與中性粒細(xì)胞/單核細(xì)胞、炎癥代謝產(chǎn)物與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附過(guò)程[16]。學(xué)者霍倩倩等[17]采取RT-PCR技術(shù)、Westernblot探究AnxA1與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊間關(guān)系，發(fā)現(xiàn)無(wú)論是基因?qū)用孢€是AnxA1蛋白表達(dá)層面，粥樣硬化斑塊患者均顯著升高。與本研究結(jié)果一致，學(xué)者梁蓉[18]研究顯示，AnxA1基因組異常改變、編碼蛋白質(zhì)失活與動(dòng)脈粥樣斑塊穩(wěn)定性關(guān)系密切。但以往研究中未見(jiàn)血清AnxA1對(duì)CHD診斷價(jià)值分析，本研究ROC曲線分析結(jié)果表明，血清AnxA1診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重病變的敏感度為84.72%，特異度為66.67%，能有效診斷冠狀動(dòng)脈粥樣硬化，但特異性欠佳，可能存在誤診情況，臨床需首先排除腫瘤、其他血管疾病或輔助其他診斷手段。

綜上可知，CHD患者存在血清AnxA1、sd-LDL、Angptl2異常表達(dá)情況，且與冠脈病變嚴(yán)重程度關(guān)系密切，3者聯(lián)合檢測(cè)在CHD患者冠脈嚴(yán)重病變?cè)\斷中價(jià)值最高，可為臨床診斷、完善治療方案提供數(shù)據(jù)參考。