MG患者外周血單個(gè)核細(xì)胞TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF的變化與其病情程度的關(guān)系

劉新華 鄧建中 范仲鵬

重癥肌無力（Myasthenia gravis，MG）屬于獲得性自身免疫性疾病，病變常累及神經(jīng)、肌肉接頭突觸后膜，使其信號(hào)傳遞發(fā)生障礙，進(jìn)而出現(xiàn)骨骼肌收縮無力。隨著病情的進(jìn)展，可出現(xiàn)肢體無力、眼瞼下垂、吞咽困難、構(gòu)音障礙等，嚴(yán)重影響患者的身心健康[1]。目前臨床對于MG的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，尚缺乏徹底根治MG的方法，已有的研究認(rèn)為與攜帶易感基因、環(huán)境因素等有關(guān)[2]。

目前臨床上缺乏MG早期診斷的敏感實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，已有的研究認(rèn)為MG的發(fā)生受到多種神經(jīng)細(xì)胞因子的調(diào)控[3]。外周血單個(gè)核細(xì)胞中腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3交互作用蛋白1（TNIP1）蛋白可抑制NF-kB細(xì)胞，可保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，并抑制其凋亡[4]。血清白球蛋白比值（Albumin globulin ratio，AGR）反應(yīng)機(jī)體抗氧化、抗炎能力[5]。血漿血小板源性生長因子（platelet-derived growth factor，PDGF）可調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化和遷移過程，促進(jìn)髓鞘再生，與多種神經(jīng)系統(tǒng)免疫性疾病有關(guān)[6]。本研究探討了MG患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中TNIP1蛋白、AGR、PDGF的變化及與患者病情的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2014年1月至2017年1月在本院收集的90例MG患者（MG組）、選取健康體檢對象90例（對照組）。MG組，年齡26～75歲，平均（51.3±11.3）歲；男42例、女48例，病程3個(gè)月至6年，平均（2.8±1.4）年；MG分型：眼肌型51例、全身型39例。對照組，年齡25～79歲，平均（50.4±13.0）歲；男45例、女45例。兩組對象的年齡、性別比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①M(fèi)G患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《中國重癥肌無力診斷和治療指南2015年版》[7]中的標(biāo)準(zhǔn)；②納入對象年齡19～79歲；③患者入院后經(jīng)肌電圖檢測確診；④本研究取得研究對象的知情同意及醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠及哺乳期婦女；②近3個(gè)月服用激素、免疫抑制劑藥物；③腦卒中病史；④頭顱外傷病史；⑤神經(jīng)系統(tǒng)病史；⑥惡性腫瘤。

1.2 指標(biāo)檢測方法

抽取研究對象空腹靜脈血，3000r/min離心分離血清。采用溴甲酚氯染料結(jié)合法檢測血清總蛋白、白蛋白水平。AGR=白蛋白/（總蛋白-白蛋白）。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清TNIP1蛋白、PDGF。檢測儀器為美國伯騰全自動(dòng)酶標(biāo)儀，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3 QMGS評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

重癥肌無力定量評(píng)分（QMGS）[3]包括復(fù)視、瞼下垂、面肌、吞咽、發(fā)音、左右上肢、肺活量、左右手握力、抬頭、左右腿測試，總分0～39分，評(píng)分越高表示患者的病情越嚴(yán)重。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS 16.0版本，計(jì)量資料用（±s）的表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)、組間比較采用χ2檢驗(yàn)；數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性采用Pearson線性相關(guān)分析法，多因素分析采用多元線性回歸分析法；P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組對象的TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF比較

MG組患者的TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF水平均顯著的低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 2組對象的TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF比較[n=90，（±s）]Table1 Comparison of TNIP1protein，serum AGR and plasma PDGF in 2 groups of subjects[n=90，（±s）]

表1 2組對象的TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF比較[n=90，（±s）]Table1 Comparison of TNIP1protein，serum AGR and plasma PDGF in 2 groups of subjects[n=90，（±s）]

組別MG組對照組t值P值TNIP1蛋白（相對表達(dá)）0.52±0.160.81±0.1014.581＜0.001AGR 1.39±0.171.83±0.2015.902＜0.001PDGF（pg/mL）6.32±1.8010.57±1.16 18.828＜0.001

2.2 不同類型MG患者的TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF比較

眼肌型MG組患者的TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF水平均顯著的高于全身型MG患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），眼肌型MG患者QMGS評(píng)分顯著的低于全身型MG患者（P＜0.05）；（表2）。

表2 不同類型MG患者的TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF比較[n，（±s）]Table2 Comparison of TNIP1protein，serum AGR and plasma PDGF in different types of MG patients[n，（±s）]

表2 不同類型MG患者的TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF比較[n，（±s）]Table2 Comparison of TNIP1protein，serum AGR and plasma PDGF in different types of MG patients[n，（±s）]

分型眼肌型全身型t值P值n 5139 TNIP1蛋白相對表達(dá)0.64±0.120.43±0.1510.371＜0.001AGR 1.48±0.111.28±0.1410.657＜0.001PDGF（pg/mL）7.15±1.655.60±1.736.151＜0.001QMGS評(píng)分（分）18.4±1.4 22.8±2.76.151＜0.001

2.3 MG患者的TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF與患者病情的關(guān)系

MG組患者的TNIP1蛋白（r=-0.682，P＜0.001）、血清AGR（r=-0.558，P＜0.001）、血漿PDGF（r=-0.629，P＜0.001）水平與患者的QMGS評(píng)分均呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。采用多元線性回歸分析，QMGS評(píng)分=38.062-5.571（TNIP1蛋白）-2.664（AGR）-0.883（PDGF）。

3 討論

MG是臨床常見的獲得性自身免疫性疾病，發(fā)病原因不明，可能與自身免疫異常、感染、藥物、環(huán)境等諸多因素有關(guān)[8]。目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)同MG是攜帶易感基因的個(gè)體在環(huán)境影響下出現(xiàn)免疫異常，產(chǎn)生抗體攻擊神經(jīng)肌肉接頭突觸后膜，進(jìn)而引起骨骼肌無力。MG不僅可影響運(yùn)動(dòng)神經(jīng)系統(tǒng)而致殘，隨著病程進(jìn)展還可影響心臟功能而導(dǎo)致患者死亡[9]。

有研究認(rèn)為，MG的發(fā)病與自身反應(yīng)性B細(xì)胞活化為漿細(xì)胞后分泌自身抗體有關(guān)，因此80%以上的MG患者合并胸腺瘤、胸腺增生等胸腺異常情況[10]。因此臨床上常采用胸腺切除術(shù)治療MG，大多數(shù)患者病情可以得到良好的控制[11]。目前臨床對于MG的臨床診斷以新斯的明試驗(yàn)、胸腺CT、MRI、肌電圖、乙酰膽堿受體抗體滴度檢查等為主，常采取多個(gè)檢查結(jié)果相結(jié)合進(jìn)行診斷，尚缺乏特異性好、靈敏度高的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)[12]。

TNIP1蛋白在NF-kB信號(hào)通路中起到負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用。有研究發(fā)現(xiàn)，NF-kB細(xì)胞激活后進(jìn)入細(xì)胞核，促進(jìn)增殖細(xì)胞因子合成。而TNIP1蛋白可抑制NF-kB的上述作用，對炎癥性疾病產(chǎn)生一定的保護(hù)作用[13]。本研究中MG患者的TNIP1蛋白水平顯著的低于健康人群。這一結(jié)果提示，MG患者外周血TNIP1蛋白水平顯著降低，可將其作為MG診斷的輔助指標(biāo)之一。MG患者TNIP1蛋白水平較低，在NF-kB信號(hào)通路中的負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用減弱，不能抑制炎癥性疾病的發(fā)生。

白蛋白是由肝臟合成的重要蛋白，參與機(jī)體抗氧化、抗炎過程，對自身免疫反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)。免疫性疾病患者免疫球蛋白水平升高，白蛋白降低，由此導(dǎo)致血清AGR下降[14]。本研究中MG患者的血清AGR水平顯著的低于健康人群。這一結(jié)果提示，MG患者外周血血清AGR水平顯著降低，可將其作為MG診斷的輔助指標(biāo)之一。MG患者肝臟合成白蛋白減少，對自身免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用減弱，這可能是MG患者自身免疫功能異常的原因之一。

PDGF是人體重要的生長因子，與受體結(jié)合后啟動(dòng)多種信號(hào)通路，參與細(xì)胞增殖、分化、遷移。有研究發(fā)現(xiàn)，PDGF可調(diào)節(jié)少突膠質(zhì)細(xì)胞向脫髓鞘部位遷移而促進(jìn)髓鞘修復(fù)[15]。本研究中MG患者的PDGF水平均顯著的低于健康人群。這一結(jié)果提示，MG患者外周血PDGF水平顯著降低，可將其作為MG診斷的輔助指標(biāo)之一。MG患者PDGF水平下降，影響多種信號(hào)通路，不能較好的調(diào)節(jié)少突膠質(zhì)細(xì)胞向脫髓鞘部位遷移，不利于髓鞘修復(fù)而致肌無力。

根據(jù)病變的嚴(yán)重程度可將MG患者分為眼肌型MG和全身型MG。眼肌型MG患者的病情較輕，病變僅局限于眼肌周圍。而全身型MG患者病情較嚴(yán)重，已累及全身骨骼肌。本研究發(fā)現(xiàn)，眼肌型MG患者QMGS評(píng)分顯著的低于全身型MG患者，這一結(jié)果也證實(shí)，全身型MG患者的病情更加嚴(yán)重。本研究還細(xì)化分析了不同病變程度的MG患者TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF水平的變化，發(fā)現(xiàn)眼肌型MG組患者的TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF水平均顯著的高于全身型MG患者，這一結(jié)果提示，隨著MG病情的進(jìn)展，患者的TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF水平均進(jìn)一步下降。相關(guān)性檢查結(jié)果也證實(shí)，MG組患者的TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF水平與患者的QMGS評(píng)分均呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。這一結(jié)果提示，MG患者外周血TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF水平的下降與患者病情加重有關(guān)，可將其作為評(píng)估MG病情和預(yù)后的指標(biāo)。

綜上所述，MG患者外周血TNIP1蛋白、血清AGR、血漿PDGF水平降低顯著，并且與患者病情加重有關(guān)。