• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    QuEChERS結(jié)合超高效液相色譜質(zhì)譜法測定禽蛋及其制品中42種農(nóng)藥及其代謝物

    2020-03-28 04:12:20呂青骎王瑋梁麗姣滕爽徐幸蓮
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2020年5期
    關(guān)鍵詞:禽蛋菊酯乙腈

    呂青骎,王瑋,梁麗姣,滕爽,徐幸蓮*

    1(南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科技學(xué)院,江蘇 南京,210095)2(南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 國家肉品質(zhì)量安全控制工程技術(shù)研究中心,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部肉及肉制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心(南京),江蘇 南京,210095)3(南京財(cái)經(jīng)大學(xué) 食品科技與工程學(xué)院,江蘇 南京,210095)

    農(nóng)藥的廣泛使用在提高農(nóng)作物產(chǎn)量的同時(shí)也造成了農(nóng)藥殘留,影響農(nóng)產(chǎn)品和食品安全。常見農(nóng)藥種類主要有有機(jī)鹵素農(nóng)藥、有機(jī)磷農(nóng)藥、氨基甲酸酯類農(nóng)藥、擬除蟲菊酯農(nóng)藥、有機(jī)氮農(nóng)藥等[1-2]。在禽類飼養(yǎng)過程中,有些不易降解的農(nóng)藥會通過食物鏈富集并傳遞至禽類體內(nèi)[3],造成禽蛋中農(nóng)藥殘留。另外,噴灑農(nóng)藥防止病害,環(huán)境污染等都會導(dǎo)致禽蛋中殘留農(nóng)藥[4-5]。世界各國和國際組織制定了嚴(yán)格的禽蛋中農(nóng)藥最大允許殘留限量[6],如歐盟為411種,日本為236種,美國為90種,而我國僅為9種,且限量值較高[7]。我國是禽蛋生產(chǎn)和消費(fèi)大國,禽蛋質(zhì)量安全關(guān)系到消費(fèi)者身體健康和國家經(jīng)濟(jì)利益[8]。因此建立簡便快捷,靈敏準(zhǔn)確的禽蛋中農(nóng)殘檢測方法很有必要。

    現(xiàn)行農(nóng)藥測定標(biāo)準(zhǔn)大都針對蔬菜水果飼料等[9-10],不能直接應(yīng)用于禽蛋及制品的檢測。動物性食品中農(nóng)藥殘留樣品前處理方法主要有固相萃取法[11]、凝膠滲透色譜法[12]、加速溶劑萃取法[13]、QuEChERS法[14]等。其中,固相萃取法、凝膠滲透色譜法、加速溶劑萃取法均可準(zhǔn)確分離出農(nóng)藥殘留成分,但操作步驟繁瑣,費(fèi)時(shí)費(fèi)力,且試劑消耗量大,不利于環(huán)保[15];QuEChERS法不僅可準(zhǔn)確分離出農(nóng)藥殘留成分,還具有操作簡便、檢測成本低、環(huán)境友好、檢測高效等優(yōu)勢[16],因此,選取QuEChERS法作為本試驗(yàn)樣品的前處理方法。農(nóng)藥殘留檢測方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)[17]、氣相色譜法(gas chromatography, GC)[18]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS)[19]、高效液相色譜法(high performance liquid chromatography, HPLC)[20]等。其中,ELISA主要用于大規(guī)模樣品的初步篩查[21];GC與GC-MS常用于易揮發(fā)、分子量較小且熱穩(wěn)定性好的樣品,檢測農(nóng)藥殘留的種類有限[22];HPLC易受到復(fù)雜基質(zhì)的干擾且效率較低[23];而超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS)可實(shí)現(xiàn)多種物質(zhì)同時(shí)檢測與分析,檢測速度快、靈敏度高[24]。本試驗(yàn)采用QuEChERS方法對禽蛋及其制品進(jìn)行前處理,建立了可同時(shí)檢測42種農(nóng)藥及其代謝物的UPLC-MS/MS方法,旨在為我國禽蛋及其制品中農(nóng)藥殘留的高通量快速檢測以及食品安全提供科學(xué)支持和技術(shù)保障。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    供試材料為禽蛋及制品,包括雞蛋、鴨蛋、鵝蛋、蛋粉,購自南京農(nóng)貿(mào)市場和超市等。

    標(biāo)準(zhǔn)品:啶蟲脒(acetamiprid)、阿維菌素(avermectin B1a)、氯蟲苯甲酰胺(chlorantraniliprole)、毒死蜱(chlorpyrifos)、苯醚甲環(huán)唑(difenoconazole)、烯酰嗎啉(dimethomorph)、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(emamectin benzoate)、甲氰菊酯(fenpropathrin)、氟蟲腈(fipronil)、氟甲腈(fipronil-desulfinyl)、氟蟲腈硫醚(亞砜)(fipronil-sulfide)、氟蟲腈砜(fipronil-sulfone)、吡蟲啉(imidacloprid)、辛硫磷(phoxim)、噠螨靈(pyridaben)、嘧霉胺(pyrimethanil)、胺菊酯(tetramethrin)、三環(huán)唑(tricyclazole)、抑霉唑(imazalil)、三唑酮(triadimefon)、戊唑醇(tebuconazol)、克百威(carbofuran)、3-羥基克百威(3-hydroxy-carbofuran)、多菌靈(carbendazim)、滅幼脲(chlorbenzuron)、氟啶脲(chlorfluazuron)、二嗪磷(diazinon)、敵敵畏(dichlorvos)、乙霉威(diethofencarb)、除蟲脲(diflubenzuron)、樂果(dimethoate)、水胺硫磷(isocarbophos)、馬拉硫磷(malathion)、滅多威(methomyl)、咪鮮胺(prochloraz)、丙溴磷(profenofos)、氟胺氰菊酯(tau-fluvalinate)、噻蟲嗪(thiamethoxam)、三唑磷(triazophos)、甲基對硫磷(parathion-methyl)、噻嗪酮(buprofezin)、甲萘威(carbaryl),德國Dr. Ehrenstorfer公司,純度均≥95.0%。

    試劑:乙腈、甲醇、乙酸乙酯,均為色譜純,美國Fisher公司;甲酸、乙酸、二氯甲烷、NaCl、MgSO4、Na2SO4,HCOONH4,均為分析純,上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司;QuEChERS多功能針式過濾膜,天津阿爾塔科技有限公司;試驗(yàn)中用水均為一級水。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Vanquish & TSQ Quantis超高效液相色譜質(zhì)譜儀,美國Thermo Fisher Scientific公司;advance EDI純水儀、CPA224S電子天平、D-16C高速離心機(jī),德國Sartorious 公司;X025-12DTD超聲波清洗機(jī),南京先歐儀器制造有限公司;Vortex Genius漩渦混勻器,德國IKA公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 樣品的前處理

    提取:準(zhǔn)確稱取5.00 g均質(zhì)好的樣品,置于50 mL離心管中,加入5 mL一級水,10 mL體積分?jǐn)?shù)為1%的乙酸乙腈,渦旋1 min,40 kHz超聲提取10 min。再加入3 g NaCl,渦旋混合1 min,10 000 r/min離心10 min。

    凈化:用一次性注射器取1 mL上清液(再吸入1 mL空氣),勻速通過QuEChERS多功能針式過濾膜至進(jìn)樣瓶中,進(jìn)行UPLC-MS/MS分析。

    除不稱取試樣,按上述前處理步驟完成試劑空白實(shí)驗(yàn)。

    1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

    分別稱取100.0 mg 42種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)品,乙腈稀釋,定容到100.00 mL容量瓶中,配制成質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

    分別移取100 μL 42種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲備液用乙腈稀釋,定容到100.00 mL容量瓶中,配制成1.00 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

    移取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,用空白樣品提取液配制成不同質(zhì)量濃度的基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,濃度梯度為0.5、1.0、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0 μg/L。基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。

    1.3.3 UPLC-MS/MS方法的建立

    1.3.3.1 液相色譜條件

    色譜柱:Thermo Accucore aQ C18(2.1 mm×150 mm, 2.6 μm);流動相A:體積分?jǐn)?shù)為0.1%的甲酸水溶液,流動相B:5 mmol/L甲酸銨甲醇溶液;梯度洗脫條件:0~1.00 min,90%A保持不變;1.00~5.00 min,90% A線性變化10%;5.00~9.00 min,10%A保持不變,9.00~9.01 min,10%A變化至90%;9.01~11.00 min,90%A保持不變;流速0.3 mL/min;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。

    1.3.3.2 質(zhì)譜條件

    離子源:電噴霧離子源(electrospary ionization, ESI);掃描方式:正反離子掃描;檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測;正離子噴霧電壓:3 500 V;負(fù)離子噴霧電壓:2 500 V;鞘氣流速:40 Arb;輔助氣流速:10 Arb;離子傳輸管溫度:300 ℃;霧化溫度:200 ℃。

    1.3.4 線性范圍的確定

    基于已建立的UPLC-MS/MS方法,將配制好的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液上機(jī)測定,線性范圍為0.5~100 μg/L,最低點(diǎn)設(shè)定為出峰良好的最低濃度,共設(shè)定6個(gè)濃度點(diǎn)。以定量離子質(zhì)量色譜峰面積為縱坐標(biāo)(Y),對應(yīng)溶液濃度(μg/L)為橫坐標(biāo)(X),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求回歸方程,計(jì)算平方相關(guān)系數(shù)(square of correlation coefficient,R2)。

    1.3.5 準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)

    在陰性雞蛋液中分別添加3個(gè)水平農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,添加量為5、10、50 μg/kg,依照1.3.1進(jìn)行提取和凈化,上機(jī)進(jìn)行添加回收率實(shí)驗(yàn),每個(gè)添加濃度平行測定6個(gè)樣品,計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviations, RSD),得到精密度。

    1.3.6 方法的實(shí)際應(yīng)用

    選用市售禽蛋及其制品23份,其中雞蛋8份,鴨蛋5份,鵝蛋3份,蛋粉7份。其樣品前處理和檢測方法參照1.3.1和1.3.3,以此來評價(jià)該方法的實(shí)際應(yīng)用效果。

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    使用Thermo Scientific XCalibur工作站軟件(版本號:4.1.31.9)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和處理。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 前處理方法的優(yōu)化

    2.1.1 提取試劑的優(yōu)化

    根據(jù)分析物在不同溶劑中的溶解性,分別采用乙腈、乙酸乙酯、正己烷、石油醚、二氯甲烷作為提取溶劑進(jìn)行前處理,向陰性雞蛋液中添加10 μg/kg的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)液,參照1.3.1進(jìn)行前處理。

    表1 提取溶劑對42種農(nóng)藥回收率的影響

    結(jié)果表明:使用5種提取溶劑提取42種農(nóng)藥,回收率在70%~120%范圍內(nèi)個(gè)數(shù)分別為42、30、13、13、34種。有機(jī)磷類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類農(nóng)藥極性偏強(qiáng),使用正己烷、石油醚等非極性溶劑提取效果較差;二氯甲烷提取后為乳狀物,難以分離;乙腈總體回收率高于乙酸乙酯,為最優(yōu)選擇。

    部分農(nóng)藥屬于兩性化合物,提取溶劑的pH影響提取效果,因此在乙腈中添加乙酸以改善回收率。分別使用體積分?jǐn)?shù)0.5%、1%、3%、5%的乙酸乙腈進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果表明,乙酸添加量為體積分?jǐn)?shù)1%時(shí),目標(biāo)農(nóng)藥回收率均在70%~120%范圍內(nèi)(表2),且與乙腈相比回收率更好。例如使用乙腈時(shí),氯蟲苯甲酰胺和甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽回收率為118%和74%,而使用1%乙酸乙腈時(shí),回收率分別為98%和94%。因此選用1%乙酸乙腈作為本試驗(yàn)提取溶劑。

    表2 乙酸含量對42種農(nóng)藥回收率的影響

    2.1.2 除水劑的優(yōu)化

    試樣中添加無機(jī)鹽可除水同時(shí)促進(jìn)電離,分離有機(jī)相與水相,防止乳化,常見的除水劑有NaCl、Na2SO4、MgSO4等。向陰性雞蛋液中添加10 μg/kg的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)液,參照1.3.1設(shè)置7組不同劑量無機(jī)鹽作為除水劑進(jìn)行對照試驗(yàn)。結(jié)果表明,增加NaCl用量至3 g時(shí),目標(biāo)農(nóng)藥回收率均在70%~120%范圍內(nèi),繼續(xù)增加NaCl用量回收效果無明顯變化(表3)。

    表3 除水方法對42種農(nóng)藥回收率的影響

    使用MgSO4與Na2SO4時(shí),回收率在70%~120%范圍內(nèi)的目標(biāo)農(nóng)藥數(shù)量均為39種,因此選擇NaCl作為除水劑,添加量為3 g。

    2.1.3 凈化方法的選擇

    向陰性雞蛋液中添加10 μg/kg的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)液,比較固相萃取法與QuEChERS法凈化效果。固相萃取法選用Oasis PRiME HLB(6 cc, 200 mg)小柱,凈化后回收率在70%~120%范圍內(nèi)農(nóng)藥種類僅為33種。QuEChERS法選用含50 mgN-丙基乙二胺(PSA)與50 mg C18的多功能針式過濾膜,PSA可去除脂肪酸、有機(jī)酸、糖類,C18多用于吸附脂肪、多環(huán)芳烴等弱極性物質(zhì),聯(lián)合使用可有效去除動物源性食品中的脂肪及弱極性化合物。凈化后的提取液為淺黃色接近無色,凈化效果較好,回收率為76.77%~113.22%,滿足檢測要求。

    2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

    將濃度為100 ng/mL的42種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液以3 μL/min流速直接注入質(zhì)譜,全掃描模式確定各農(nóng)藥母離子,再進(jìn)行子離子掃描,每個(gè)化合物選定2對響應(yīng)高的特征離子對作為定性、定量離子對,進(jìn)一步優(yōu)化碰撞能量,最終得到質(zhì)譜參數(shù)(表4)。

    表4 42種農(nóng)藥質(zhì)譜參數(shù)

    續(xù)表4

    序號名稱反應(yīng)模式母離子(m/z)子離子(m/z)碰撞能量/V13吡蟲啉+256.13175.14209.10211914辛硫磷+299.1377.31129.15291315噠螨靈+365.15147.11309.00241016嘧霉胺+200.19168.10181.14334017胺菊酯+332.24135.20164.12212518三環(huán)唑+190.01135.97163.04282319抑霉唑+297.13159.04255.02262020三唑酮+294.12111.13141.08472521戊唑醇+308.2070.34125.11243522克百威+222.18123.16165.132515233-羥基克百威+238.06163.04181.04135024多菌靈+192.15132.15160.13332025滅幼脲+309.02138.95155.93271426氟啶脲+539.99247.00382.97462327二嗪磷+305.15153.11169.05202028敵敵畏+221.0279.25109.15292029乙霉威+268.20124.16180.14352030除蟲脲-309.02155.97289.04101031樂果+230.0679.24125.08332432水胺硫磷+312.00236.01269.95151433馬拉硫磷+330.9698.92127.00211034滅多威+160.0488.11106.04101035咪鮮胺+376.0970.35307.98261036丙溴磷+374.98304.84346.92211537氟胺氰菊酯+503.15181.10208.07251638噻蟲嗪+292.10181.10210.97261039三唑磷+314.09119.18162.103521

    續(xù)表4

    序號名稱反應(yīng)模式母離子(m/z)子離子(m/z)碰撞能量/V40甲基對硫磷+264.09122.00231.92251041噻嗪酮+306.2357.45106.22252842甲萘威+202.16127.15145.113111

    2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性,檢出限和定量限

    本試驗(yàn)為基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)曲線,采用外標(biāo)法定量。42種農(nóng)藥在0.5~100 μg/L范圍內(nèi),呈良好線性相關(guān),相關(guān)系數(shù)均大于0.990 0。按已建立的UPLC-MS/MS方法,在陰性雞蛋液中添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行試驗(yàn),以3倍信噪比計(jì)算檢出限,10倍信噪比為定量限(表5),42種農(nóng)藥檢出限為0.01~0.5 μg/kg,定量限為0.034~1.7 μg/kg,表明該方法有較高的靈敏度。

    2.4 準(zhǔn)確度與精密度

    將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液分別添加至陰性雞蛋液中,制備不同添加濃度的樣品,參照1.3.1前處理后上機(jī)檢測,進(jìn)行準(zhǔn)確度和精密度測定。由表6可知,3個(gè)不同濃度水平測得的加標(biāo)回收率在74.13%~113.22%,RSD在0.98%~14.29%,表明本方法準(zhǔn)確度高,精密度好,可以滿足禽蛋中農(nóng)藥檢測。

    2.5 實(shí)際樣品的測定

    為驗(yàn)證該方法的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值,選取23份市售禽蛋及其制品為研究對象,其中雞蛋8份,鴨蛋5份,鵝蛋3份,蛋粉7份。試驗(yàn)結(jié)果雞蛋、鴨蛋、鵝蛋均未檢出農(nóng)藥殘留,蛋粉有3份檢出(表7)。

    3 結(jié)論

    本試驗(yàn)將QuEChERS前處理技術(shù)與UPLC-MS/MS檢測方法相結(jié)合,同時(shí)檢測禽蛋及制品中42種農(nóng)藥及其代謝物殘留,操作簡便快捷,分析時(shí)間短,靈敏度高。低、中、高三水平加標(biāo)回收率在74.13%~113.22%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于15%,表明該方法在不同濃度水平具有較高的精密度與準(zhǔn)確度。將該方法應(yīng)用于實(shí)際禽蛋樣品的檢測,達(dá)到了良好的檢測結(jié)果,可滿足市售禽蛋及制品中多種農(nóng)藥殘留的高通量快速檢測。

    表5 42種農(nóng)藥線性方程、線性平方相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限及線性范圍

    表6 42種農(nóng)藥精密度及添加回收率(n=6)

    續(xù)表6

    序號名稱添加量5 μg/kg添加量10 μg/kg添加量50 μg/kg回收率/%RSD/%回收率/%RSD/%回收率/%RSD/%4毒死蜱75.653.1780.899.3490.375.205苯醚甲環(huán)唑95.776.03100.645.50101.6011.686烯酰嗎啉95.023.9798.585.20103.561.377甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽104.853.61109.004.47108.741.428甲氰菊酯77.383.9379.846.7988.874.799氟蟲腈103.032.13113.222.55111.002.0210氟甲腈102.851.99110.254.64107.612.1311氟蟲腈硫醚(亞砜)103.892.63110.863.52110.441.4312氟蟲腈砜100.461.36108.514.06107.411.2413吡蟲啉97.735.4794.673.8995.136.0314辛硫磷93.937.81103.967.64103.872.2515噠螨靈82.263.6085.996.0091.313.0216嘧霉胺88.684.5790.213.8696.593.7217胺菊酯88.563.4898.665.5197.3652.9318三環(huán)唑83.482.1092.164.26103.462.4619抑霉唑89.694.7592.524.1994.825.4220三唑酮96.552.98105.233.07106.013.0321戊唑醇96.575.0992.426.0399.392.4722克百威97.682.10105.776.68104.102.82233-羥基克百威97.155.24101.791.2299.301.8224多菌靈93.132.8995.492.7999.742.3325滅幼脲90.833.7995.242.7999.762.9726氟啶脲83.0114.2989.235.4791.394.1827二嗪磷95.047.27102.004.64101.731.8528敵敵畏95.434.1396.802.35103.102.5529乙霉威97.620.98103.404.10100.311.2630除蟲脲103.015.73111.592.52103.812.7731樂果98.204.3994.532.73103.802.4932水胺硫磷90.857.03103.933.81101.722.63.33馬拉硫磷92.764.7495.933.31104.212.2234滅多威100.936.4297.003.8798.703.6135咪鮮胺85.377.5595.297.25100.503.0836丙溴磷88.315.3995.915.2897.035.2137氟胺氰菊酯74.132.7076.778.3881.853.6138噻蟲嗪94.512.0194.203.3298.533.9439三唑磷100.472.04105.735.09102.241.6740甲基對硫磷95.366.1698.063.24102.822.3141噻嗪酮88.232.1495.374.5698.353.6642甲萘威91.853.7395.765.29100.832.63

    表7 蛋粉農(nóng)藥檢測結(jié)果

    猜你喜歡
    禽蛋菊酯乙腈
    高純乙腈提純精制工藝節(jié)能優(yōu)化方案
    煤化工(2022年3期)2022-07-08 07:24:42
    HG-AFS測定四種禽蛋各組分中硒含量
    中國測試(2021年4期)2021-07-16 07:49:06
    禽蛋供應(yīng)偏緊格局依舊 后期價(jià)格高位震蕩上行——2019年1-7月我國禽蛋生產(chǎn)形勢及后期走勢分析
    湖南飼料(2019年5期)2019-10-15 08:59:08
    5%氯氟醚菊酯·高效氟氯氰菊酯懸浮劑正相高效液相色譜分析
    歐盟擬修訂高效氯氟氰菊酯在芹菜、茴香和大米中的最大殘留限量
    2018年禽蛋市場展望
    禽蛋市場總體行情及未來走勢
    丁二酮肟重量法測定雙乙腈二氯化中鈀的含量
    亞臨界流體萃取技術(shù)在茶葉降低菊酯類農(nóng)殘方面的應(yīng)用
    氯菊酯在有機(jī)溶劑中的光降解
    亚洲精品自拍成人| 99热6这里只有精品| 99热这里只有精品一区| 高清视频免费观看一区二区 | 一二三四中文在线观看免费高清| 91精品国产九色| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 在线观看av片永久免费下载| 久久久国产一区二区| 日日摸夜夜添夜夜爱| 成年免费大片在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久精品人妻少妇| 欧美另类一区| 天堂俺去俺来也www色官网 | 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 亚洲在线自拍视频| 大陆偷拍与自拍| 男人舔女人下体高潮全视频| 青青草视频在线视频观看| 国产美女午夜福利| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 天堂影院成人在线观看| www.av在线官网国产| 欧美日韩在线观看h| 久久久精品94久久精品| 亚洲成人久久爱视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 免费观看的影片在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| www.av在线官网国产| 五月伊人婷婷丁香| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产精品蜜桃在线观看| 免费看光身美女| 亚洲自拍偷在线| 久久久精品欧美日韩精品| 国产麻豆成人av免费视频| 免费少妇av软件| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产精品一及| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 女人被狂操c到高潮| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 成人特级av手机在线观看| 简卡轻食公司| 人妻一区二区av| 国产亚洲5aaaaa淫片| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 看黄色毛片网站| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 久久久国产一区二区| 在线免费十八禁| 日韩视频在线欧美| 久久热精品热| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产精品一二三区在线看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品自拍成人| 亚洲av一区综合| 女人被狂操c到高潮| 不卡视频在线观看欧美| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国模一区二区三区四区视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 最近中文字幕2019免费版| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 毛片一级片免费看久久久久| 十八禁国产超污无遮挡网站| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 精品久久国产蜜桃| 国产视频内射| 三级经典国产精品| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 毛片一级片免费看久久久久| 免费少妇av软件| 欧美精品一区二区大全| or卡值多少钱| 熟妇人妻不卡中文字幕| 成年女人看的毛片在线观看| 久久久精品94久久精品| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 黄色一级大片看看| 久久久久久伊人网av| 午夜福利视频1000在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 99热6这里只有精品| 尾随美女入室| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久午夜福利片| 高清在线视频一区二区三区| 日韩欧美 国产精品| 有码 亚洲区| 韩国av在线不卡| 色5月婷婷丁香| 深夜a级毛片| 国精品久久久久久国模美| 直男gayav资源| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 亚洲精品自拍成人| 国产av国产精品国产| 九九爱精品视频在线观看| 免费av不卡在线播放| 一级毛片 在线播放| 国内精品宾馆在线| 免费看不卡的av| 国产真实伦视频高清在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲人成网站在线播| 国产男女超爽视频在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 国产乱来视频区| 99re6热这里在线精品视频| 国产一区二区在线观看日韩| 日本欧美国产在线视频| 国产精品人妻久久久久久| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 日韩视频在线欧美| 欧美日韩在线观看h| 午夜福利视频精品| 日韩视频在线欧美| 深夜a级毛片| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 欧美成人一区二区免费高清观看| a级一级毛片免费在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品成人久久久久久| 久久韩国三级中文字幕| 99热这里只有是精品50| 亚洲av中文av极速乱| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 成人亚洲精品av一区二区| 在线a可以看的网站| 日韩三级伦理在线观看| 能在线免费观看的黄片| 国产v大片淫在线免费观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 欧美激情在线99| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 久久久久性生活片| 国产日韩欧美在线精品| 久久精品国产亚洲av涩爱| 欧美精品一区二区大全| 精品午夜福利在线看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 99久久精品一区二区三区| 国产探花极品一区二区| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 日韩强制内射视频| 精品久久久精品久久久| 韩国高清视频一区二区三区| a级一级毛片免费在线观看| 全区人妻精品视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 欧美日韩精品成人综合77777| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲综合精品二区| 国产单亲对白刺激| 日韩视频在线欧美| 亚洲av二区三区四区| 亚洲欧洲国产日韩| 搡老乐熟女国产| 国产老妇伦熟女老妇高清| av黄色大香蕉| 国产成人freesex在线| 国产av在哪里看| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 欧美高清成人免费视频www| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲最大成人手机在线| 国产久久久一区二区三区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产成人精品福利久久| 久久99蜜桃精品久久| 夫妻午夜视频| 国产亚洲精品久久久com| 久久久久久久久久久丰满| 十八禁网站网址无遮挡 | 男女边摸边吃奶| 日韩欧美精品v在线| 日韩av免费高清视频| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲一区高清亚洲精品| 成年女人在线观看亚洲视频 | 十八禁网站网址无遮挡 | 欧美精品国产亚洲| 91在线精品国自产拍蜜月| 精品人妻熟女av久视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 日本黄大片高清| 亚洲自偷自拍三级| 日本一二三区视频观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 一级片'在线观看视频| 最近手机中文字幕大全| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产淫语在线视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 日韩三级伦理在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 一级毛片aaaaaa免费看小| 欧美精品一区二区大全| 综合色av麻豆| 国产精品国产三级国产专区5o| 高清视频免费观看一区二区 | 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 午夜福利高清视频| 色哟哟·www| 能在线免费看毛片的网站| 嘟嘟电影网在线观看| 欧美日本视频| 中文天堂在线官网| 国产 亚洲一区二区三区 | 久久精品久久精品一区二区三区| 最近的中文字幕免费完整| 色尼玛亚洲综合影院| 一个人看的www免费观看视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 国产亚洲91精品色在线| 欧美成人一区二区免费高清观看| 中文在线观看免费www的网站| 看十八女毛片水多多多| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲av免费高清在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 免费黄频网站在线观看国产| 久久鲁丝午夜福利片| 国产 一区精品| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 男女边吃奶边做爰视频| 三级毛片av免费| 亚洲性久久影院| 国产不卡一卡二| 毛片一级片免费看久久久久| 极品少妇高潮喷水抽搐| 永久网站在线| av免费在线看不卡| 国产亚洲精品久久久com| 午夜免费观看性视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 久久精品国产亚洲av天美| 黄色日韩在线| 搡女人真爽免费视频火全软件| 性色avwww在线观看| 黄色欧美视频在线观看| 久久精品人妻少妇| 观看美女的网站| 中文字幕制服av| 亚洲成人一二三区av| 全区人妻精品视频| 亚洲精品国产成人久久av| 欧美高清性xxxxhd video| 成人毛片60女人毛片免费| 日韩av免费高清视频| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲真实伦在线观看| 久久韩国三级中文字幕| 国产乱人偷精品视频| 国产有黄有色有爽视频| 成人国产麻豆网| 最近视频中文字幕2019在线8| 国模一区二区三区四区视频| 久久久久久久久久久丰满| 免费观看av网站的网址| 日日撸夜夜添| 久久国内精品自在自线图片| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲国产精品sss在线观看| 国精品久久久久久国模美| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 在线天堂最新版资源| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久精品夜色国产| 久久这里有精品视频免费| 国产精品无大码| 久久久色成人| 日韩电影二区| 国产极品天堂在线| 免费看美女性在线毛片视频| 国产一级毛片在线| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 狠狠精品人妻久久久久久综合| 内射极品少妇av片p| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 成人无遮挡网站| 日日啪夜夜爽| 欧美区成人在线视频| 少妇的逼好多水| 晚上一个人看的免费电影| 看免费成人av毛片| 国产男人的电影天堂91| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲性久久影院| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲高清免费不卡视频| 免费看av在线观看网站| 国产老妇女一区| 天堂√8在线中文| 免费看av在线观看网站| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲欧洲日产国产| 性插视频无遮挡在线免费观看| 久久久a久久爽久久v久久| 日韩一本色道免费dvd| 久久人人爽人人爽人人片va| 一级黄片播放器| 色5月婷婷丁香| 七月丁香在线播放| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲av不卡在线观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国精品久久久久久国模美| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 一本久久精品| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产精品福利在线免费观看| 一本久久精品| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 少妇丰满av| 一二三四中文在线观看免费高清| av在线老鸭窝| 亚洲精品日韩av片在线观看| 插阴视频在线观看视频| 十八禁国产超污无遮挡网站| 亚洲精品自拍成人| 嫩草影院新地址| 中文字幕亚洲精品专区| 看十八女毛片水多多多| 热99在线观看视频| 两个人视频免费观看高清| 最近最新中文字幕大全电影3| ponron亚洲| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产在视频线在精品| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产综合精华液| 51国产日韩欧美| 伦精品一区二区三区| 国产真实伦视频高清在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲成人精品中文字幕电影| 一级毛片我不卡| 国产成人精品一,二区| 日韩伦理黄色片| 99久国产av精品国产电影| 久久久久国产网址| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产91av在线免费观看| 女人久久www免费人成看片| 国产精品三级大全| 女人被狂操c到高潮| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 有码 亚洲区| 午夜福利成人在线免费观看| 99视频精品全部免费 在线| 国产视频首页在线观看| 欧美成人午夜免费资源| 边亲边吃奶的免费视频| 国产av国产精品国产| 欧美潮喷喷水| 亚洲怡红院男人天堂| 亚洲精品成人av观看孕妇| av福利片在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产在线一区二区三区精| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲国产最新在线播放| 91狼人影院| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日本av手机在线免费观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产免费视频播放在线视频 | 亚洲最大成人手机在线| 精品人妻偷拍中文字幕| 三级国产精品片| 91aial.com中文字幕在线观看| 免费看日本二区| 日韩伦理黄色片| 色尼玛亚洲综合影院| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 欧美+日韩+精品| 青青草视频在线视频观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 久久久久久久久久久免费av| 高清欧美精品videossex| 我的老师免费观看完整版| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 只有这里有精品99| 97超碰精品成人国产| 激情五月婷婷亚洲| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲高清免费不卡视频| 身体一侧抽搐| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产精品无大码| 麻豆av噜噜一区二区三区| 91aial.com中文字幕在线观看| 中文字幕制服av| 亚洲国产精品专区欧美| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产精品三级大全| 欧美人与善性xxx| 国产免费视频播放在线视频 | 国产中年淑女户外野战色| av网站免费在线观看视频 | 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲图色成人| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 高清午夜精品一区二区三区| 国产人妻一区二区三区在| 亚洲精品自拍成人| 干丝袜人妻中文字幕| 又大又黄又爽视频免费| 国产日韩欧美在线精品| 激情 狠狠 欧美| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 丰满少妇做爰视频| 欧美精品一区二区大全| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲精品一二三| 国产av国产精品国产| 欧美区成人在线视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲精品视频女| 女人被狂操c到高潮| 亚洲怡红院男人天堂| 亚洲av成人精品一区久久| 一级毛片电影观看| 九草在线视频观看| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 美女黄网站色视频| 久久久久久久久中文| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 免费黄色在线免费观看| 五月伊人婷婷丁香| 国产成人a区在线观看| 久久久久久久午夜电影| 看免费成人av毛片| 一本一本综合久久| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 欧美成人午夜免费资源| 亚洲内射少妇av| 特级一级黄色大片| 午夜老司机福利剧场| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 久久草成人影院| 亚洲伊人久久精品综合| 国产伦精品一区二区三区四那| 日本av手机在线免费观看| 精品国产露脸久久av麻豆 | 亚洲电影在线观看av| 人妻少妇偷人精品九色| 日韩欧美精品v在线| 又爽又黄a免费视频| 久久久久久国产a免费观看| 国产精品99久久久久久久久| 最近手机中文字幕大全| av在线观看视频网站免费| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产成人福利小说| 亚洲在久久综合| 亚洲欧美清纯卡通| 只有这里有精品99| 午夜久久久久精精品| 亚洲欧洲日产国产| 女人久久www免费人成看片| 在现免费观看毛片| 亚洲欧美日韩无卡精品| av在线老鸭窝| 欧美性感艳星| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 免费在线观看成人毛片| 亚洲欧洲国产日韩| 成人午夜精彩视频在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产免费一级a男人的天堂| 麻豆乱淫一区二区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产伦精品一区二区三区四那| 国精品久久久久久国模美| 国内精品美女久久久久久| 天堂俺去俺来也www色官网 | 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产成人精品婷婷| 搞女人的毛片| 免费观看的影片在线观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 乱码一卡2卡4卡精品| 乱人视频在线观看| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久人人爽人人片av| 热99在线观看视频| 日韩欧美一区视频在线观看 | 三级经典国产精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 美女主播在线视频| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲av一区综合| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲,欧美,日韩| 国产亚洲精品久久久com| 黄片无遮挡物在线观看| 国产成人精品一,二区| 国产黄色小视频在线观看| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲av不卡在线观看| 日韩av免费高清视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 在线 av 中文字幕| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 99久久精品一区二区三区| 男女视频在线观看网站免费| 国产永久视频网站| 久久久久久久久久久丰满| 搡老乐熟女国产| 伦理电影大哥的女人| 日本一二三区视频观看| 久久国产乱子免费精品| 免费少妇av软件| 成人午夜高清在线视频| 国产乱人视频| 国产久久久一区二区三区| 淫秽高清视频在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲内射少妇av| 岛国毛片在线播放| 简卡轻食公司| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 日韩在线高清观看一区二区三区| 日本一二三区视频观看| av国产免费在线观看| 联通29元200g的流量卡| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 久久久亚洲精品成人影院| 精品久久久久久久久久久久久| 久久综合国产亚洲精品| 日本黄大片高清| 亚洲人成网站在线播| 国产精品爽爽va在线观看网站| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久草成人影院| 国产精品三级大全| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 少妇的逼好多水| av福利片在线观看| 日本黄色片子视频| 一级片'在线观看视频| 亚洲经典国产精华液单| 成年免费大片在线观看| 久久久国产一区二区| 波野结衣二区三区在线| 亚洲一区高清亚洲精品| 精品久久久久久久久av| 精品不卡国产一区二区三区| 国产精品伦人一区二区| 九色成人免费人妻av| 免费无遮挡裸体视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚州av有码| 少妇高潮的动态图| 久久久久性生活片| 777米奇影视久久| 国产精品一区二区在线观看99 | 91久久精品电影网| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产精品精品国产色婷婷| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲图色成人| 午夜亚洲福利在线播放| 日韩一本色道免费dvd| av在线老鸭窝| 久久韩国三级中文字幕| 国产精品福利在线免费观看| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 少妇人妻一区二区三区视频| 成人一区二区视频在线观看|