柯拉斯那沉香的化學(xué)成分研究

吳亞麗，李 薇，王 昊，梅文莉，蓋翠娟，董文化，陳志寶*，戴好富*

1黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，大慶163319；2中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所，海南省沉香工程技術(shù)研究中心；3海南省黎藥資源天然產(chǎn)物研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，?？?571101

沉香為瑞香科(Thymelaeaceae)沉香屬(Aquilaria)或擬沉香屬(Gyrinops)植物中含有樹脂的芯材[1]，是中國、日本、印度以及其他一些東南亞國家的傳統(tǒng)名貴藥材和天然香料，被譽(yù)為“藥中黃金”和“香中之王”[2]。沉香在兩千多年前的傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)、傳統(tǒng)印度醫(yī)學(xué)里就有將其入藥使用的記載。其味辛、苦，性微溫，具有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘、嘔吐呃逆、腎虛氣逆喘急等功效，用于治療胸腹脹悶疼痛、胃寒嘔吐呃逆、腎虛氣逆喘急有顯著功效[3]。并且沉香是世界五大宗教(佛教、道教、基督教、伊斯蘭教和天主教)共同認(rèn)可的圣物，以其唯一能通三界的香氣而聞名[4]。沉香由于在藥用、香料及文化等各個(gè)方面都具有很大的市場價(jià)值。而野生沉香形成緩慢，產(chǎn)量低，市場需求量又大，其次由于人為的濫砍濫伐，其野生沉香資源面臨枯竭[5]。所有沉香屬植物均被列入了《瀕危野生動(dòng)植物種國際貿(mào)易公約》[6]。

迄今為止，全世界共報(bào)道23種沉香屬植物，從南亞次大陸的東北部，到印度尼西亞群島及巴布亞新幾內(nèi)亞群島均有分布，其中柯拉斯那沉香樹(A.crassna)主要分布于老撾、泰國、越南和柬埔寨[7]。據(jù)報(bào)道，目前已從馬來西亞、老撾、國產(chǎn)等沉香中分離鑒定出了400多個(gè)化學(xué)成分，其主要成分是2-(2-苯乙基)色酮類化合物和具有多種骨架類型的倍半萜類化合物[4,8-10]。而柯拉斯那沉香作為國際市場上交易的沉香的重要組成之一，到目前為止，關(guān)于柯拉斯那沉香的化學(xué)成分和生物活性研究報(bào)道較少，因此本課題組對(duì)野生柯拉斯那沉香進(jìn)行系統(tǒng)性研究。課題組前期對(duì)野生柯拉斯那沉香進(jìn)行化學(xué)成分研究，發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了一系列的2-(2-苯乙基)色酮類單體化合物和聚合物，以及少量的倍半萜類單體化合物[9,10]。本次研究選用柬埔寨野生柯拉斯那沉香為材料，對(duì)柯拉斯那沉香進(jìn)行化學(xué)成分研究，以期豐富柯拉斯那沉香的化合物結(jié)構(gòu)類型，并為柯拉斯那沉香的開發(fā)和利用提供科學(xué)依據(jù)，也為柯拉斯那沉香的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。本次實(shí)驗(yàn)從柬埔寨柯拉斯那沉香中分離得到了8個(gè)倍半萜類化合物，3個(gè)2-(2-苯乙基)色酮類化合物和1個(gè)2-(2-苯乙烯基)色酮類化合物?；衔?～11均是首次從柯拉斯那沉香分離?；衔锝Y(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～12的結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of compounds 1-12

1 儀器與材料

Bruker AV-500型超導(dǎo)核磁儀購于德國Bruker公司；質(zhì)譜儀(Bruker amazon SL公司)；紫外光譜儀(UV-2550 Shimadzu)；紅外光譜儀(Nicolet 380美國賽默飛世爾Thermo公司)；旋光儀MCP 5100(奧地利Anton Paar有限公司)；CA-1111冷卻水循環(huán)裝置(上海愛朗儀器有限公司)；BSA-100A自動(dòng)部分收集器(上海青浦滬西儀器廠)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國 HeidolphLaborota)；METTLER TOLEDO ME204精密和分析天平[萬分之一，梅特勒-托力多儀器(上海)公司]；超凈工作臺(tái)(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)；ELX-800酶標(biāo)儀(美國寶特公司)；TMS為內(nèi)標(biāo)層色譜硅膠板G，柱層析硅膠G(H，200～300目，60～80目)(青島海洋化工廠)；凝膠Sephadex LH-20(德國Merck公司)；乙酰膽堿酯酶；碘化硫代乙酰膽堿；二硫代二硝基苯甲酸(DNTB)；他克林(美國Sigma公司)。

沉香樣品于2017年11月購于柬埔寨金邊，經(jīng)中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所王軍博士鑒定其基源植物為柯拉斯那(A.crassna)，標(biāo)本編號(hào)為(JPZ20171101)，保存于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所。

2 提取與分離

將干燥的柬埔寨野生柯拉斯那沉香芯材樣品(928.0 g)，機(jī)械粉碎后用95%乙醇通過加熱回流提取3次(每次3 h，每次加入乙醇5 L)，經(jīng)減壓濃縮得乙醇浸膏375.2 g。用水將乙醇浸膏分散形成懸濁液，再用石油醚進(jìn)行萃取，得到浸膏440.0 mg，剩余部分經(jīng)減壓柱色譜，以氯仿-甲醇(1∶0→0∶1)梯度洗脫，得到20個(gè)流份(Fr.1～Fr.20)。

Fr.6(3.0 g)經(jīng)ODS柱色譜，以甲醇-水(3∶10→1∶0)梯度洗脫，得到25個(gè)亞組分(Fr.6-1～Fr.6-25)。Fr.6-8(43.6 mg)經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮(120∶1)為洗脫劑，得到化合物1(0.9 mg)。Fr.6-17(210.6 mg)經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-二氯甲烷-丙酮(500∶1∶1)得到3個(gè)流份(Fr.6-17-1～Fr.6-17-3)。Fr.6-17-1(7.1 mg)經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-氯仿-丙酮(50∶1∶1)為洗脫劑，得到化合物2(1.7 mg)。Fr.6-17-2(54.5 mg)經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮(400∶1)為洗脫劑，得到化合物3(11.3 mg)。Fr.6-24(170.4 mg)經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯(250∶1)為洗脫劑，得到化合物4(1.2 mg)。Fr.6-16(71.3 mg)經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-氯仿-乙酸乙酯(150∶1∶1)為洗脫劑，得到化合物5(3.9 mg)。Fr.6-18(41.8 mg)經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯(300∶1)為洗脫劑，得到化合物6(1.8 mg)。Fr.6-13(62.4 mg)經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-氯仿-丙酮(150∶1∶1)為洗脫劑，得到化合物7(1.7 mg)。Fr.6-22(110.8 mg)經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮(500∶1)為洗脫劑，得到化合物9(1.5 mg)。

Fr.7(1.9 g)經(jīng)ODS柱色譜，以甲醇-水(4∶10→1∶0)梯度洗脫，得到22個(gè)亞組分(Fr.7-1～Fr.7-22)。Fr.7-8(41.3 mg)經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-二氯甲烷-丙酮(120∶1∶1)為洗脫劑，得到化合物8(3.6 mg)。Fr.7-16(210.0 mg)，經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-二氯甲烷-丙酮(300∶1∶1)得到化合物10(3.3 mg)和化合物11(12.0 mg)。Fr.7-16-2(23.6 mg)，經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯(150∶1∶1)得到化合物12(3.3 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1無色油狀物質(zhì)(CHCl3)；ESI-MS：m/z235.4[M + H]+；分子式C15H22O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:5.74(1H，s，H-9)，2.82(1H，d，J=4.5 Hz，H-12)，2.70(1H，d，J=4.5 Hz，H-12)，2.45(1H，td，J=12.6，4.9 Hz，H-1)，2.27(1H，dd，J=13.7 Hz，4.4 Hz，H-6)，2.12～2.16(1H，m，H-1)，2.09(1H，dd，J=14.7，4.4 Hz，H-7)，1.96～2.01(1H，m，H-3)，1.82～1.87(1H，m，H-4)，1.72(1H，dd，J=14.7，13.6 Hz，H-6)，1.56～1.59(1H，m，H-2)，1.51(1H，dq，J=12.9，4.1 Hz，H-3)，1.32～1.38(1H，m，H-2)，1.25(3H，s，H-13)，1.10(3H，s，H-14)，0.95(3H，d，J=6.7 Hz，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:33.1(C-1)，29.8(C-2)，30.3(C-3)，37.9(C-4)，40.5(C-5)，34.2(C-6)，49.6(C-7)，198.3(C-8)，122.4(C-9)，173.3(C-10)，56.2(C-11)，56.1(C-12)，17.3(C-13)，21.2(C-14)，16.2(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故鑒定化合物1為7α-H-9(10)-ene-11,12-epoxy-8-oxoeremophilane。

化合物2無色油狀物質(zhì)(CHCl3)；ESI-MS：m/z235.1[M + H]+；分子式C15H22O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:5.74(1H，s，H-9)，2.61(1H，d，J=4.3 Hz，H-12)，2.55(1H，d，J=4.3 Hz，H-12)，2.45(1H，dd，J=13.7 ，4.8 Hz，H-7)，2.43(1H，t，J=5.2 Hz，H-1)，2.08(1H，dd，J=14.0，4.6 Hz，H-6)，2.08～2.10(1H，m，H-1)，1.95～1.98(1H，m，H-2)，1.81～1.86(1H，m，H-4)，1.58～1.64(1H，m，H-3)，1.50～1.53(1H，m，H-3)，1.51(1H，dd，J=13.9，13.6 Hz，H-6)，1.44(3H，s，H-13)，1.23～1.26(1H，m，H-2)，1.08(3H，s，H-14)，0.94(3H，d，J=6.7 Hz，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:33.0(C-1)，29.5(C-2)，30.4(C-3)，38.5(C-4)，40.3(C-5)，34.2(C-6)，47.4(C-7)，198.5(C-8)，122.8(C-9)，172.3(C-10)，56.2(C-11)，51.2(C-12)，21.1(C-13)，20.8(C-14)，16.2(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故鑒定化合物2為7β-H-9(10)-ene-11,12-epoxy-8-oxoeremophilane。

化合物3無色油狀物質(zhì)(CHCl3)；ESI-MS：m/z219.3[M + H]+；分子式C15H22O；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:5.79(1H，s，H-9)，4.95(1H，d，J=1.1 Hz，H-12)，4.74(1H，br s，H-12)，3.06(1H，dd，J=12.0，5.1 Hz，H-7)，2.42(1H，td，J=12.7，5.1 Hz，H-1)，2.16(1H，m，H-1)，1.97(3H，m，H-6，H-3)，1.85(1H，m，H-4)，1.77(3H，s，H-13)，1.58(1H，dd，J=8.7，6.9 Hz，H-2)，1.50(1H，m，H-3)，1.41(1H，m，H-2)，1.07(3H，s，H-14)，0.94(3H，s，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:33.2(C-1)，29.3(C-2)，30.4(C-3)，39.4(C-4)，40.5(C-5)，37.6(C-6)，50.5(C-7)，199.7(C-8)，122.9(C-9)，172.0(C-10)，143.9(C-11)，113.8(C-12)，20.7(C-13)，20.2(C-14)，16.1(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，故鑒定化合物3為neopetasane(eremophila-9,11-dien-8-one)。

化合物4無色油狀物質(zhì)(CHCl3)；ESI-MS：m/z223.2[M + H]+；分子式C15H26O；1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δH:5.30(1H，ddd，J=5.7，2.2，2.2 Hz，H-9)，2.13(1H，br t，J=12.1 Hz，H-1)，2.04(1H，m，H-8)，1.99(1H，br d，H-1)，1.83(1H，ddd，J=12.3，2.2，2.2 Hz，H-6)，1.77(1H，dddd，J=17.0，12.1，2.2，2.2 Hz，H-8)，1.73(1H，m，H-2)，1.61(1H，dddd，J=12.3，12.1，4.9，2.2 Hz，H-7)，1.41(1H，m，H-2)，1.32(1H，m，H-3)，1.26(1H，m，H-4)，1.25(1H，m，H-3)，1.21(3H，br s，H-12 or H-13)，1.17(3H，br s，H-13 or H-12)，0.98(1H，dd，J=12.3，12.3 Hz，H-6)，0.95(3H，s，H-14)，0.85(3H，d，J=6.7 Hz，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:32.4(C-1)，27.7(C-2)，31.0(C-3)，41.2(C-4)，38.5(C-5)，38.7(C-6)，44.1(C-7)，27.3(C-8)，118.4(C-9)，144.5(C-10)，72.5(C-11)，27.4(C-12)，26.3(C-13)，17.8(C-14)，15.6(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，故鑒定化合物4為jinkoh-eremol。

化合物5無色油狀物質(zhì)(CHCl3)；ESI-MS：m/z235.3[M + H]+；分子式C15H22O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:5.56(1H，d，J=5.4 Hz，H-9)，4.57(1H，dd，J=5.4，4.5 Hz，H-8)，2.87(1H，qt，J=7.1 Hz，H-11)，2.39(1H，m，H-7)，2.30(1H，dd，J=12.7，4.6 Hz，H-7)，1.90(2H，m，H-2)，1.76(1H，dd，J=14.0，4.1 Hz，H-6)，1.52(1H，ddd，J=11.0，6.3，4.0 Hz，H-4)，1.48(1H，ddd，J=11.3，7.6，4.0 Hz，H-3)，1.40(1H，m，H-3)，1.19(3H，d，J=7.2 Hz，H-13)，0.93(3H，s，H-14)，0.91(1H，dd，J=14.0，9.2 Hz，H-6)，0.83(3H，d，J=6.5 Hz，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:32.4(C-1)，29.7(C-2)，30.8(C-3)，38.5(C-4)，38.6(C-5)，30.0(C-6)，34.4(C-7)，74.9(C-8)，113.0(C-9)，157.7(C-10)，40.5(C-11)，179.3(C-12)，9.4(C-13)，20.2(C-14)，15.7(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致，故鑒定化合物5為(rel)-4β, 5β,7β-eremophil-9-en-12,8β-olide。

化合物6無色油狀物質(zhì)(CHCl3)；ESI-MS：m/z219.3[M + H]+；分子式C15H22O；H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:5.65(1H，s，H-1)，4.65(1H，s，H-12)，4.61(1H，s，H-12)，2.52(1H，m，H-9)，2.32(1H，tt，J=12.8，2.8 Hz，H-7)，2.30(1H，m，H-9)，2.25(1H，d，J=16.4 Hz，H-3)，2.08(1H，d，J=16.4，3.2 Hz，H-3)，1.94(1H，dd，J=12.8，2.8 Hz，H-6)，1.91(1H，m，H-4)，1.85(1H，d，J=1.4 Hz，H-8)，1.65(3H，s，H-13)，1.27(1H，dd，J=12.8，2.8 Hz，H-8)，1.09(1H，d，J=12.8 Hz，H-6)，1.07(3H，s，H-15)，0.90(3H，d，J=6.8 Hz，H-14)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:124.8(C-1)，202.1(C-2)，42.5(C-3)，41.4(C-4)，40.5(C-5)，34.1(C-6)，41.7(C-7)，32.8( C-8)，45.1(C-9)，174.3(C-10)，150.1(C-11)，109.4(C-12)，20.9(C-13)，15.1(C-14)，17.1(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，故鑒定化合物6為諾卡酮。

化合物7無色油狀物質(zhì)(CHCl3)；ESI-MS：m/z237.3[M + H]+；分子式C15H24O2；H NMR(500 MHz，CHCl3)δH:5.75(1H，s，H-1)，2.55(1H，m，H-9)，2.41(1H，m，H-9)，2.35(1H，d，J=17.0 Hz，H-3)，2.16(1H，dd，J=17.0，3.2 Hz，H-3)，2.12(1H，dd，J=12.6，3.2 Hz，H-6)，2.00(1H，dd，J=12.6，3.2 Hz，H-8)，1.99(1H，m，H-4)，1.78(1H，tt，J=12.6，3.1 Hz，H-7)，1.20(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，1.17(3H，s，H-12)，1.16(3H，s，H-15)，1.13(3H，s，H-13)，1.02(1H，d，J=12.5 Hz，H-6)，1.00(3H，s，J=6.8 Hz，H-14)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:124.7(C-1)，202.5(C-2)，42.8(C-3)，42.0(C-4)，40.6(C-5)，41.0(C-6)，45.0(C-7)，29.0(C-8)，34.1(C-9)，175.0(C-10)，72.9(C-11)，27.2(C-12)，26.5(C-13)，15.2(C-14)，17.2(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，故鑒定化合物7為11-hydroxy-valenc-1(10)-en-2-one。

化合物8無色油狀物質(zhì)(CHCl3)；ESI-MS：m/z235.3[M + H]+；分子式C15H22O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:10.17(1H，s，H-14)，4.80(1H，s，H-12)，4.79(1H，s，H-12)3.53(1H，dd，J=11.5，4.4 Hz，H-9)，3.34(1H，d，J=10.8 Hz，H-6)，2.37(1H，d，J=17.4Hz，H-3)，2.08(2H，m，H-6，H-7)，1.94(1H，m，H-8)，1.81(1H，m，H-1)，1.78(3H，s，H-13)，1.71(1H，m，H-2)，1.68(1H，m，H-8)，1.51(2H，m，H-1，H-2)，1.15(3H，s，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:35.4(C-1)，17.6(C-2)，23.8(C-3)，134.7(C-4)，161.3(C-5)，28.6(C-6)，43.2(C-7)，35.4(C-8)，77.5(C-9)，42.5(C-10)，147.6(C-11)，110.1(C-12)，20.7(C-13)，191.0(C-14)，18.7(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致，故鑒定化合物8為(7S，9S，10S)-(+)-9-hydroxy-selina-4,11-dien-14-al。

化合物9黃色針狀結(jié)晶(CHCl3)；ESI-MS：m/z295.3[M + H]+；分子式C18H14O4；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:7.60(1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，7.54(2H，d，J=8.1 Hz，H-6′)，7.51(1H，t，J=8.3 Hz，H-7)，6.96(1H，d，J=8.3 Hz，H-8)，6.95(2H，d，J=8.1 Hz，H-3′，H-5′)，6.79(1H，t，J=8.3 Hz，H-6)，6.60(1H，d，J=16.0 Hz，H-8′)，6.21(1H，s，H-3)，3.86(3H，OMe-4′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:163.8(C-2)，108.4(C-3)，183.3(C-4)，161.7(C-5)，111.6(C-6)，135.6(C-7)，107.0(C-8)，156.4(C-9)，111.4(C-10)，127.9(C-1′)，129.7(C-2′)，114.6(C-3′)，161.1(C-4′)，114.9(C-5′)，129.7(C-6′)，138.1(C-7′)，117.5(C-8′)，55.8(OMe-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道一致，故鑒定化合物9為5-羥基-2-[2-(4-甲氧基苯)乙烯基]色酮。

化合物10黃色針狀結(jié)晶(CHCl3)；ESI-MS：m/z297.3[M + H]+；分子式C18H16O4；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:12.77(1H，s，OH-5)，7.38(1H，d，J=8.9 Hz，H-7)，7.28(4H，m，H-2′，H-3′，H-5′，H-6′)，7.18(1H，m，H-4′)，6.94(1H，d，J=8.9，Hz，H-8)，6.10(1H，s，H-3)，3.87(3H，s，OMe-6)，3.06(2H，t，J=7.1 Hz，H-7′)，3.00(2H，t，J=7.1 Hz，H-8′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:171.4(C-2)，108.0(C-3)，184.3(C-4)，150.5(C-5)，144.1(C-6)，121.0(C-7)，106.1(C-8)，149.9(C-9)，110.9(C-10)，140.6(C-1′)，129.0(C-2′，C-6′)，129.2(C-3′，C-5′)，126.8(C-4′)，33.2(C-7′)，36.3(C-8′)，57.1(OMe-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道一致，故鑒定化合物10為5-羥基-6甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮。

化合物11淡黃色油狀物質(zhì)(CHCl3)；ESI-MS：m/z281.1[M + H]+；分子式C18H16O3；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:7.76(1H，d，J=3.1 Hz，H-5)，7.38(1H，m，J=9.5 Hz，H-8)，7.23(4H，m，H-7，H-3′，H-4′，H-5′)，7.20(2H，d，J=8.0 Hz，H-2′，H-6′)，6.16(1H，s，H-3)，3.90(3H，s，OMe-6)，3.06(2H，t，J=7.7 Hz，H-7′)，2.94(2H，t，J=7.7 Hz，H-8′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:168.2(C-2)，109.6(C-3)，178.3(C-4)，104.9(C-5)，156.9(C-6)，123.6(C-7)，119.3(C-8)，151.4(C-9)，124.6(C-10)，139.8(C-1′)，128.7(C-2′)，128.3(C-3′)，126.6(C-4′)，128.3(C-5′)，128.7(C-6′)，33.1(C-7′)，36.1(C-8′)，56.0(OMe-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道一致，故鑒定化合物11為6-甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮。

化合物12黃色不規(guī)則針狀結(jié)晶(CHCl3)；ESI-MS：m/z327.1[M + H]+；分子式C19H18O5；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δH:12.71(1H，s，OH-5)，7.21(1H，d，J=9.0 Hz，H-7)，7.10(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，H-6′)，6.87(1H，d，J=9.0 Hz，H-8)，6.83(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，H-5′)，6.01(1H，s，H-3)，3.93(3H，s，OMe-6)，3.78(3H，s，OMe-4′)，2.98(2H，t，J=7.6 Hz，H-7′)，2.87(2H，t，J=7.6 Hz，H-8′)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δC:170.3(C-2)，107.9(C-3)，184.0(C-4)，149.4(C-5)，143.3(C-6)，118.9(C-7)，105.8(C-8)，150.5(C-9)，110.8(C-10)，131.5(C-1′)，129.3(C-2′)，114.1(C-3′)，158.3(C-4′)，114.1(C-5′)，129.3(C-6′)，32.1(C-7′)，36.5(C-8′)，57.0(OMe-6)，55.3(OMe-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道一致，故鑒定化合物12為5-羥基-6甲氧基-2-[2-(4-甲氧基苯)乙基]色酮。

4 活性測試

4.1 乙酰膽堿酯酶抑制活性測定

采用Ellman法[20]測定乙酰膽堿酯酶抑制活性?；衔?～13均溶解于DMSO中，取110 μL磷酸緩沖液(pH值8.0)、10 μL待測樣品(50 μg/mL)和40 μL乙酰膽堿酯酶(0.02 U/mL)于96孔板中，在30 ℃條件下孵育20 min后，再加入20 μL DTNB(2.48 mg/mL)和20 μL碘化硫代乙酰膽堿(1.81 mg/mL)等體積混合液40 μL，最終反應(yīng)體系總共200 μL。再在30 ℃條件下孵育30 min后，將反應(yīng)體系于405 nm紫外波長下用酶標(biāo)儀檢測吸光度(A)值。陽性對(duì)照藥物為他克林，反應(yīng)終質(zhì)量濃度為0.05 mg/mL，陰性對(duì)照為DMSO，終濃度為0.1 %，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。選擇陰性對(duì)照組平均吸光值為1時(shí)的樣品吸光值，計(jì)算化合物吸光值的平均值(化合物測定值-背景值)。按照公式1計(jì)算化合物對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制率，結(jié)果見表1?；钚詼y定結(jié)果表明化合物1～3和12具有乙酰膽堿酯酶抑制活性，其他化合物乙酰膽堿酯酶抑制率低于10 %。

抑制率(%)=(E-S)/E×100 % 公式(1)

注：E為陰性對(duì)照組的平均吸光值，S為待測化合物的平均吸光值。

表1 化合物1～12的乙酰膽堿酯酶抑制活性

注：他克林為陽性對(duì)照。

Note:Tacrine served as positive control.

5 討論

本實(shí)驗(yàn)采用多種柱色譜技術(shù)從柬埔寨野生柯拉斯那沉香中共分離純化了12個(gè)化合物，其中8個(gè)倍半萜類化合物，3個(gè)2-(2-苯乙基)色酮類化合物和1個(gè)2-(2-苯乙烯基)色酮類化合物。并且化合物2～11均是首次從柯拉斯那沉香中分離得到?；钚詼y定結(jié)果表明化合物1～3和12具有乙酰膽堿酯酶抑制活性。

目前，國內(nèi)外學(xué)者通過對(duì)不同品種的沉香進(jìn)行化學(xué)成分研究，發(fā)現(xiàn)其主要成分是倍半萜和2-(2-苯乙基)色酮類化合物。分離鑒定的倍半萜類化合物按不同骨架類型分為沉香呋喃型倍半萜、沉香螺旋烷型倍半萜、愈創(chuàng)木烷型倍半萜、桉烷型倍半萜、艾里莫芬烷型倍半萜、杜松烷型倍半萜、前香草烷型倍半萜和菖蒲烷倍半萜8種類型[4]。而本次從柬埔寨野生柯拉斯那沉香中分離的8個(gè)倍半萜中，化合物1～7均為艾里莫芬烷型倍半萜，只有1個(gè)桉烷型倍半萜(8)。沉香中分離的2-(2-苯乙基)色酮類化合物按色酮母核的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)主要可分為4種類型：Fidersia 類型的2-(2-苯乙基)色酮、多羥基取代的5，6，7，8-四氫-2-(2-苯乙基)色酮、單環(huán)氧5,6,7,8-四氫-2-(2-苯乙基)色酮、雙環(huán)氧-5，6，7，8-四氫-2-(2-苯乙基)色酮[4]。而此次從柬埔寨野生柯拉斯那沉香中分離的3個(gè)色酮類化合物，均是Fidersia 類型的2-(2-苯乙基)色酮(10～12)。目前，在沉香中僅發(fā)現(xiàn)了5個(gè)2-(2-苯乙烯基)色酮類化合物，其中3個(gè)2-(2-苯乙烯)色酮類化合物均是首次從柬埔寨柯拉斯那沉香中分離得到[10,16]。而此次從柬埔寨野生柯拉斯那沉香中分離得到了一個(gè)2-(2-苯乙烯基)色酮(9)，可見柯拉斯那沉香中的2-(2-苯乙烯基)色酮類化合物還有很大的研究價(jià)值。綜上，柬埔寨柯拉斯那沉香與其他品種沉香的主要化學(xué)成分是一致的，均是倍半萜類和2-(2-苯乙基)色酮類化合物，這為后期柯拉斯那沉香的化學(xué)成分研究和開發(fā)利用提供了一定的研究基礎(chǔ)。