民族藥九龍盤的化學(xué)成分(Ⅱ)

盧汝梅，張 強(qiáng)，陳 娜，李 俊，韋建華，朱小勇

(廣西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，廣西 南寧 530001)

九龍盤為廣西壯醫(yī)、瑤醫(yī)常用藥，其基源為蓼科金線草屬植物金線草Antenoronfiliforme(Thunb.) Roberty et Vautier，在廣西各地有分布。中醫(yī)認(rèn)為九龍盤有涼血止血、散瘀止痛、清熱解毒之功效。九龍盤壯名Goseqmanh (棵社慢)，壯醫(yī)認(rèn)為其具有清熱毒、通龍路、散瘀止痛之功效，用于埃病(咳嗽)、陸裂(咳血)、滲裂(吐血)、兵淋勤(崩漏)、京尹(痛經(jīng))、阿意咪(痢疾)、白凍(泄瀉)、林得叮相(跌打損傷)、發(fā)旺(風(fēng)濕骨痛)、滲襠相(燒燙傷)、額哈(毒蛇咬傷)等疾病的治療[1-2]。九龍盤在瑤藥中屬于風(fēng)打相兼藥，稱為慢驚風(fēng)，瑤醫(yī)認(rèn)為具有祛風(fēng)除濕、理氣止痛、止血散淤之功效，臨床用于治療風(fēng)濕骨痛、肺膿瘍、痢疾、腹瀉、胃痛、神經(jīng)性腰痛、外感痧癥、子宮出血、骨折、毒蛇咬傷等[3]。

九龍盤具有抗炎、鎮(zhèn)痛和抗凝血等藥理活性[3]，但化學(xué)成分和作用機(jī)制等方面研究報(bào)道甚少，文獻(xiàn)[4-5]報(bào)道從金線草中分離得到的化合物主要為黃酮及其苷、酚酸類、萜類等成分，包括3-甲氧基槲皮素、4′-甲基-棉花素、圣草酚、檸檬黃素、鼠李黃素、阿福豆苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷、山奈酚-3，7-二-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、鼠李黃素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷、3,3′-O-二甲基鞣花酸、鄰苯二酚、沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸甲酯、沒(méi)食子酸乙酯、對(duì)甲氧基肉桂酸、木栓酮、3β-angeloyloxy-7-epifutronolide、5-羥基-2-O-β-D-吡喃葡萄糖基龍腦等30多種化合物，但成分研究還不深入且缺乏系統(tǒng)性，藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明，臨床應(yīng)用和產(chǎn)品開發(fā)還缺乏科學(xué)依據(jù)。本課題組在前期研究證明九龍盤具有良好的抗炎和止血活性的基礎(chǔ)上，采用硅膠、MCI GEL CHP 20P反相樹脂、AB-8大孔吸附樹脂、Sephadex LH-20和ODS柱色譜等方法從其乙醇提取物不同極性部位中分離得到17個(gè)化合物，分別鑒定為2-甲基蒽醌(1)、表木栓醇(2)、羽扇豆醇乙酸酯(3)、大黃素(4)、大黃素甲醚(5)、熊果酸(6)、鞣花酸(7)、咖啡酸(8)、原兒茶酸(9)、香草酸(10)、槲皮素(11)、表兒茶素(12)、芹菜素(13)、山奈酚(14)、蘆丁(15)、鼠李糖(16)和川陳皮素(17)。

1 儀器、試劑與藥材

Waters Autospec Premier p776質(zhì)譜儀(美國(guó)Waters公司)；Bruker Drx-500 MHz、Avance III 800 MHz核磁共振儀(瑞士Bruker公司)。

柱色譜硅膠、薄層色譜硅膠(青島海洋化工廠)；AB-8大孔吸附樹脂(南開大學(xué)樹脂廠)；Sephadex LH-20(pharmacia公司(美國(guó)))；MCI GEL CHP 20P 反相樹脂(三菱化學(xué)公司(日本))；其余溶劑均為分析純。

九龍盤藥材采集于容縣黎村鎮(zhèn)，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授鑒定為蓼科植物金線草Antenoronfiliforme(Thunb.) Rob. et Vaut.)全草。藥材采集后自然晾干，樣品保存于廣西中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)室(編號(hào)20160715)。

2 提取分離

九龍盤藥材15.0 kg，依次用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇與60%乙醇冷浸提取3次(10倍量每次)；提取液減壓濃縮至無(wú)醇味，加水混懸，用系統(tǒng)溶劑分配法分離，得到石油醚萃取物261 g、乙酸乙酯萃取物251 g和正丁醇萃取物360 g。

取石油醚萃取物80 g，硅膠柱色譜分離，用100∶0→90∶1→70∶1→50∶1→30∶1→15∶1→5∶1→2∶1→1∶1→ 0∶100(均為體積比，下文同)的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)，合并相同流分，再經(jīng)硅膠柱色譜分離及重結(jié)晶，得到化合物1(3.6 mg)和2(5.0 mg)。取乙酸乙酯萃取物110 g，硅膠柱色譜分離，用100∶0→80∶1→50∶1→20∶1→10∶1→6∶1→3∶1→1∶1→0∶100的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)，合并相同流分，再經(jīng)硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜分離和重結(jié)晶，得到化合物3(3.0 mg)、4(4.0 mg)、5(3.0 mg)、6(3.4 mg)、7(3.0 mg)、8(1.5 mg)、9(2.7 mg)、10(8.0 mg)、11(18.0 mg)、12(1.5 mg)。取正丁醇萃取物160 g，熱水溶解，過(guò)濾，濾液用AB-8吸附樹脂柱色譜分離，用水-乙醇(100∶0→70∶30→50∶50→25∶75→5∶95→0∶100)梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)，合并相同流分，再經(jīng)MCI GEL CHP 20P反相樹脂柱色譜、ODS柱色譜和Sephadex LH-20柱色譜分離，得到化合物13(3.0 mg)、14(6.0 mg)、15(7.0 mg)、16(22.0 mg)、17(4.0 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1黃色網(wǎng)狀粉末(氯仿)。EI-MS (m/z): 222[M]+, 207, 194。分子式C15H10O2。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 8.10(1H, brs, H-1), 7.61(1H, d,J=7.8 Hz, H-3), 8.20(1H, d,J=7.8 Hz, H-4), 8.29(2H, m, H-5, 8), 7.79(2H, m, H-6, 7), 2.54(3H, s, —CH3)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 127.5(C-1), 145.3(C-2), 135.0(C-3), 127.5(C-4), 127.2(C-5), 134.0(C-6), 134.1(C-7), 127.2(C-8), 183.1(C-9), 183.5(C-10), 131.3(C-4a), 133.6(C-8a), 133.4(C-9a), 133.6(C-10a), 22.0(—CH3)。與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的2-甲基蒽醌數(shù)據(jù)對(duì)比，確定化合物1為2-甲基蒽醌。

化合物2無(wú)色片狀結(jié)晶(二氯甲烷)。EI-MS (m/z): 428[M]+, 413, 275, 248, 205, 165。分子式C30H52O。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 3.73(1H, m, H-3), 1.24(3H, s, H-28), 1.04(3H, s, H-27), 0.99(6H, s, H-26, 29), 0.96(3H, s, H-30), 0.94(3H, s, H-25), 0.91(3H, d,J=7.3 Hz, H-23), 0.87(3H, s, H-24)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 15.8(C-1), 35.2(C-2), 72.8(C-3), 49.2(C-4), 37.1(C-5), 41.7(C-6), 17.6(C-7), 53.2(C-8), 37.8(C-9), 61.3(C-10), 35.6(C-11), 30.6(C-12), 39.6(C-13), 38.4(C-14), 32.3(C-15), 36.1(C-16), 30.0(C-17), 42.8(C-18), 35.2(C-19), 28.2(C-20), 32.8(C-21), 39.3(C-22), 11.6(C-23), 16.4(C-24), 18.3(C-25), 20.1(C-26), 18.7(C-27), 32.1(C-28), 35.1(C-29), 31.8(C-30)。與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的表木栓醇數(shù)據(jù)對(duì)比，確定化合物2為表木栓醇。

化合物4黃色結(jié)晶(甲醇)。EI-MS (m/z): 270[M]+, 242, 213, 139。分子式為C15H10O5。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) : 2.43 (3H, s, —CH3), 7.07 (1H, d,J=1.0 Hz, H-2), 7.50(1H, d,J=1.1 Hz, H-4), 7.13 (1H, d,J=2.4 Hz, H-5), 6.56 (1H, d,J=2.4 Hz, H-7)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 163.4(C-1), 125.3(C-2), 149.8(C-3), 121.9(C-4), 109.2(C-5), 167.2(C-6), 109.2(C-7), 166.4(C-8), 191.8(C-9), 183.0(C-10), 134.6(C-4a), 110.3(C-8a), 114.9(C-9a), 136.9(C-10a), 22.3(—CH3)。與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的大黃素?cái)?shù)據(jù)對(duì)比，確定化合物4為大黃素。

化合物5橙色結(jié)晶(氯仿)。EI-MS (m/z): 284[M]+, 255, 241, 128。分子式為C16H12O5。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) : 12.31(1H, s, 8-OH), 12.11(1H, s, 1-OH), 6.68(1H, d,J=2.5 Hz, H-2), 7.35(1H, d,J=2.5 Hz, H-4), 7.62(1H, d,J=1.2 Hz, H-5), 7.07(1H, d,J=1.2 Hz, H-7), 3.93(3H, s, —OCH3), 2.45(3H, s, —CH3)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 166.5(C-1), 108.2(C-2), 162.5(C-3), 106.8(C-4), 121.3(C-5), 148.5(C-6), 124.5(C-7), 165.2(C-8), 190.8(C-9), 182.0(C-10), 133.2(C-4a), 113.7(C-8a), 110.3(C-9a), 135.2(C-10a), 22.2(—CH3), 56.1(—OCH3)。與文獻(xiàn)[10]報(bào)道的大黃素甲醚數(shù)據(jù)對(duì)比，確定化合物5為大黃素甲醚。

化合物6白色粉末(甲醇)。EI-MS (m/z): 456[M]+, 438, 300, 248, 208, 203, 189, 133。分子式為C30H48O3。1H-NMR (500 MHz, C5D5N): 3.46(1H, t,J=8.0 Hz, H-3), 5.48(1H, brs, H-12), 1.24(3H, s, H-23), 1.02(3H, s, H-24), 0.87(3H, s, H-25), 1.05(3H, s, H-26), 1.22(3H, s, H -27), 0.94(3H, d,J=6.4 Hz, H-29), 1.00(3H, d,J=6.5 Hz, H-30)。13C-NMR (125 MHz, C5D5N): 39.1(C-1), 28.2(C-2), 78.2(C-3), 39.4(C-4), 55.9(C-5), 18.8(C-6), 33.6(C-7), 40.0(C-8), 48.1(C-9), 37.3(C-10), 17.5(C-11), 125.7(C-12), 139.3(C-13), 42.5(C-14), 28.7(C-15), 25.0(C-16), 48.1(C-17), 53.6(C-18), 39.5(C-19), 39.4(C-20), 31.1(C-21), 37.5(C-22), 28.9(C-23), 15.7(C-24), 16.6(C-25), 17.6(C-26),23.7(C-27), 180.0(C-28), 24.0(C-29), 21.5(C-30)。與文獻(xiàn)[11-12]報(bào)道的熊果酸數(shù)據(jù)對(duì)比，確定化合物6為熊果酸。

化合物7淡黃綠色粉末(二甲基亞砜)。EI-MS (m/z): 302[M]+, 246, 190, 162。分子式為C14H6O8。1H-NMR (500 MHz, C5D5N+DMSO-d6): 7.74(2H, s, H-5, 5′)。13C-NMR (125 MHz, C5D5N+ DMSO-d6)：107.7(C-1, 1′), 140.2(C-2, 2′), 136.6(C-3, 3′), 148.9(C-4, 4′), 110.6(C-5, 5′), 112.5(C-6, 6′), 159.5(C-7, 7′)。與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的鞣花酸數(shù)據(jù)對(duì)比，確定化合物7為鞣花酸。

化合物8黃綠色粉末(甲醇)。EI-MS (m/z): 180[M]+, 163[M-OH]+, 134。分子式為C9H8O4。1H-NMR (800 MHz, CD3OD): 7.03(1H, d,J=2.4 Hz, H-2), 6.76(1H, d,J=8.0 Hz, H-5), 6.93(1H, d,J=8.0 Hz, H-6), 7.52(1H, d,J=15.2 Hz, H-7), 6.21(1H, d,J=15.2 Hz, H-8)。13C-NMR (200 MHz, CD3OD): 127.8(C-1), 115.5(C-2), 147.0(C-3), 149.5(C-4), 116.5(C-5), 122.8(C-6), 146.8(C-7), 115.1(C-8), 171.0(C-9)。與文獻(xiàn)[14]報(bào)道的咖啡酸數(shù)據(jù)對(duì)比，確定化合物8為咖啡酸。

化合物9白色粉末(甲醇)。溴甲酚綠反應(yīng)陽(yáng)性，與原兒茶酸對(duì)照品共硅膠薄層色譜檢識(shí)，分別在二氯甲烷-甲醇-甲酸(20∶1∶0.2，體積比，余同)、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(1∶1∶0.2)、二氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶1∶0.2)3種溶劑系統(tǒng)中展開，二者Rf值相同，確定化合物9為原兒茶酸。

化合物10白色粉末(甲醇)。EI-MS (m/z): 168[M]+, 153, 125, 97。分子式為C8H8O4。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 7.54(1H, d,J=2.0 Hz, H-2), 6.82(1H, d,J=8.7 Hz, H-5), 7.55(1H, dd,J=8.7, 2.0 Hz, H-6), 3.88(3H, s, 3-OCH3)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 123.0(C-1), 115.8(C-2), 148.6(C-3), 152.7(C-4), 113.7(C-5), 125.3(C-6), 170.0(C-7), 56.4(C-8)。與文獻(xiàn)[15]報(bào)道的香草酸數(shù)據(jù)對(duì)比，確定化合物10為香草酸。

化合物11黃色粉末(甲醇)。EI-MS (m/z): 302[M]+, 273, 229, 137。分子式為C15H10O7。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 6.18(1H, d,J=2.0 Hz, H-6), 6.38(1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 7.73(1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 6.88(1H, d,J=8.5 Hz, H-5′), 7.63(1H, dd,J=8.5, 2.1 Hz, H-6′)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 158.2(C-2), 137.3(C-3), 177.4(C-4), 148.8(C-5), 99.2(C-6), 165.6(C-7), 94.4(C-8), 162.5(C-9), 104.5(C-10), 124.1(C-1′), 116.0(C-2′), 146.2(C-3′), 148.0(C-4′), 116.2(C-5′), 121.6(C-6′)。與文獻(xiàn)[16-17]報(bào)道的槲皮素?cái)?shù)據(jù)對(duì)比，確定化合物11為槲皮素。

化合物12白色粉末(甲醇)。EI-MS (m/z): 290[M]+, 152, 139, 123。 分子式C15H14O6。1H-NMR (800 MHz, CD3OD): 2.73(1H, dd,J=2.4, 16.0 Hz, H-4a), 2.85(1H, dd,J=4.0, 16.0 Hz, H-4b), 4.17(1H, m, H-3), 4.81(1H, brs, H-2), 5.91(1H, d,J=2.4 Hz, H-6), 5.93(1H, d,J=2.4 Hz, H-8), 6.74(1H, d,J=8.0 Hz, H-5′), 6.78 (1H, dd,J=1.6, 8.0 Hz, H-6′), 6.96(1H, d,J=1.6 Hz, H-2′)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 80.0(C-2), 67.5(C-3), 29.3(C-4), 158.0(C-5), 96.4(C-6), 157.7(C-7), 95.9(C-8), 157.4(C-9), 100.1(C-10), 132.3(C-1′), 115.9(C-2′), 145.9(C-3′),145.8(C-4′),115.3(C-5′), 119.4(C-6′)。與文獻(xiàn)[18]報(bào)道的表兒茶素?cái)?shù)據(jù)對(duì)比，確定化合物12為表兒茶素。

化合物13淺黃色粉末(甲醇)。鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性。EI-MS (m/z): 271[M+1]+, 270[M]+, 242, 153, 152, 118。分子式C15H10O5。1H-NMR(500 MHz, CD3OD): 7.78(2H, d,J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.92(2H, d,J=8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.51(1H, s, H-3), 6.23(1H, d,J=2.1 Hz, H-6), 6.42(1H, d,J=2.1 Hz, H-8)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 165.0(C-2), 103.6(C-3), 183.3(C-4), 162.3(C-5), 99.9(C-6), 165.6(C-7), 94.9(C-8), 158.7(C-9), 105.2(C-10), 122.8(C-1′), 128.9(C-2′,6′), 116.6(C-3′,5′), 161.7(C-4′)。與文獻(xiàn)[19]報(bào)道的芹菜素?cái)?shù)據(jù)對(duì)比, 確定化合物13為芹菜素。

化合物14黃色針晶(甲醇)。m.p. 273～276 ℃。鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈紫紅色，與山奈酚對(duì)照品共硅膠薄層色譜檢識(shí)，分別在環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(2∶1∶0.2)、二氯甲烷-甲醇-甲酸(10∶1∶0.2)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(3∶1∶0.2)3種溶劑系統(tǒng)展開，二者Rf值相同；且二者混合熔點(diǎn)不下降。確定化合物14為山奈酚。

化合物15黃色粉末(甲醇)，加熱溶于水。m.p. 176～179 ℃。鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈紫紅色，與蘆丁對(duì)照品硅膠薄層色譜檢識(shí)，分別在甲醇-水(8∶1)、二氯甲烷-甲醇-甲酸(2∶1∶0.1)、乙酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶1∶0.1)3種溶劑系統(tǒng)展開，二者Rf值相同；且二者混合熔點(diǎn)不下降。確定化合物15為蘆丁。

化合物16白色結(jié)晶(甲醇)。EI-MS (m/z): 165[M+1]+, 147[M-OH]+, 73, 60。分子式為C6H12O5。1H-NMR(500 MHz, CD3OD): 4.99 (1H, d,J=5.5 Hz, H-1), 3.78(2H, m, H-2, 5), 3.71(1H, dd,J=5.4, 5.6 Hz, H-3), 3.35(1H, m, H-4), 1.64(3H, d,J=6.5 Hz, CH3)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 95.8(C-1), 74.2(C-2), 73.0(C-3), 72.1(C-4), 69.3(C-5), 18.1(C-6)。與文獻(xiàn)[20]報(bào)道的鼠李糖數(shù)據(jù)對(duì)比，確定化合物16為鼠李糖。

化合物17白色粉末(吡啶)。EI-MS (m/z): 403[M+1]+, 402[M]+, 387, 344, 197。分子式為 C21H22O8。1H-NMR(500 MHz, C5D5N): 7.77(1H, dd,J=2.0, 8.5 Hz, H-6′), 7.56(1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 7.06(1H, d,J=8.9 Hz, H-5′), 7.02(1H, s, H-3), 4.12(3H, s, 5-OCH3), 4.09(3H, s,6-OCH3), 4.05(3H, s, 7-OCH3), 3.95(3H, s, 8-OCH3), 3.88(3H, s,3′-OCH3), 3.81(3H, s, 4′-OCH3)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 161.3(C-2), 107.4(C-3), 176.7(C-4), 144.6(C-5), 138.7(C-6), 151.8(C-7), 148.8(C-8), 148.1(C-9), 115.7(C-10), 124.4(C-1′), 109.6(C-2′), 149.5(C-3′), 152.8(C-4′), 112.2(C-5′), 120.1(C-6′), 56.0(3′-OCH3), 56.0(4′-OCH3), 62.5(5-OCH3), 62.0(6-OCH3), 61.9(7-OCH3), 61.7(8-OCH3)。與文獻(xiàn)[21]報(bào)道的川陳皮素?cái)?shù)據(jù)對(duì)比, 確定化合物17為川陳皮素。